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酶活性中心稳定化策略提高褶皱假丝酵母脂肪酶的稳定性: 酶稳定化机制是生物学家密切关注的科学问题。以酶结构为基础，应用蛋白质工程技术来探索酶稳定性与催化效率/底物选择性复杂作用机制，不仅能揭示酶蛋白的自然进化规律，同时也将为酶生物催化剂的工业应用奠定基础。结构生物学角度研究表...; 张小飞; 关键词：稳定性

一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围<Image file="DDA00010193265700000...; 冯雁张小飞杨广宇张勇谢渊; 文献传递

褶皱假丝酵母脂肪酶1突变体及其基因: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体涉及从褶皱徦丝酵母脂肪酶1(Candida rugosa lipase1：LIP1)基因出发，选择活性中心414位点进行定点饱和突变，获得一系列突变体。本发明所述提高热稳定性的LIP1突...; 冯雁张小飞杨广宇谢渊施贤卫; 文献传递

褶皱假丝酵母脂肪酶1突变体及其基因: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体涉及从褶皱徦丝酵母脂肪酶1(Candida rugosa lipase1：LIP1)基因出发，选择活性中心414位点进行定点饱和突变，获得一系列突变体。本发明所述提高热稳定性的LIP1突...; 冯雁张小飞杨广宇谢渊施贤卫

一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围<Image file="DDA00010193265700000...; 冯雁张小飞杨广宇张勇谢渊; 文献传递

Actinosynnema mirum DSM43827溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征被引量：5: 2014年; 溶解性多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenases,LPMO)是近年来新发现的一类作用于结晶多糖(如纤维素和几丁质)的氧化酶;LPMO通过氧化的方式来裂解底物从而有利于水解酶系进一步作用,获得可溶性寡糖。为获得更多新酶资源,通过PCR方法从Actinosynnema mirum DSM 43827菌株中成功地克隆了编码LPMO的基因Amir_5334;将该基因构建到含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签的pET-28a(+)载体(pET-28a-MBP)上,并转化至E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达。利用镍柱亲和层析进行纯化,获得融合表达蛋白后,使用Factor Xa蛋白酶切除MBP标签,最终得到成熟的LPMO(Am5)。成熟Am5的预测分子量约为26 kDa,等电点为8.3。分析Am5序列发现,Am5与同家族中LPMO的序列一致性较低,具有良好的序列新颖性。酶学性质分析表明Am5是对几丁质有氧化活性而对纤维素无氧化活性的LPMO;与几丁质酶协同降解几丁质时可提高几丁质酶60%的水解效率;吸附实验显示,Am5对几丁质具有较强的吸附作用,而对纤维素吸附能力较弱。以上研究表明,Am5是一种针对几丁质底物具有高效选择性的新型氧化酶。; 施贤卫张伟涛张小飞杨广宇冯雁; 关键词：几丁质

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张小飞