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张念祖: 作品数：47 被引量：158H指数：7; 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>; 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家科技攻关计划云南省应用基础研究基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学一般工业技术自动化与计算机技术更多>>

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鹅副粘病毒F基因的克隆测序及核苷酸序列分析被引量：28: 2002年; 以鹅副粘病毒 (GPV) SF0 2株的基因组 RNA为模板 ,通过 RT- PCR的方法扩增出 F基因片段 ,然后将其克隆至 T载体中。经 PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序。测序后拼接得出 F基因的全序列。与 Gen Bank下载的 9株参考毒株比较 F基因编码区全核苷酸序列 ,发现所测 GPV- SF0 2毒株与参考毒株 L Z- NDV核苷酸序列同源性为 96 %,与F48E9同源性为 92 .5 %,与 L a Sota为 88%。; 赵文华朱建波姚龙涛宋建领信爱国何水林张念祖; 关键词：核苷酸序列分析鹅副粘病毒 F基因基因克隆

马动脉炎病毒核蛋白基因的克隆与表达被引量：5: 2005年; The gene of nucleocapsid protein of Equine arteritis virus was amplified from PMD-18-T plasmid with equine arteritis virus ORF7 sequence by PCR. The PCR product was sequenced as well as purified and digested with EcoR I and Xho I, then directly cloned into the prokaryotic vector pET32a. Consequently the recombinant plasmid was constructed, designateds pET32a-N. PET32a-N was transformed into the host cell BL21(DE3) and the expression procedure was optimized including cultivated temperature, optional induction concentration and time of IPTG. The result indicated that the nucleocapsid protein can be expressed efficiently with 0.8mmol/L IPTG and 4 hour induction. The resulting Trx-N recombinant fusion protein was identified to be consisted of 34 kDa protein by SDS-PAGE and western blotting analysis. It indicated that the recombinant fusion protein could be used as antigen of diagnostic assay for detecting antibodies.; 杜建王志亮赵永刚宋厚辉金宁一张念祖; 关键词：马动脉炎病毒核衣壳蛋白纯化

牛瘟研究进展被引量：2: 2002年; 邹云莲信爱国赵文华朱建波杨仕标张念祖; 关键词：牛瘟牛瘟病毒疫苗

蓝舌病毒野毒株及疫苗株S10基因多态性分析研究被引量：2: 2003年; 对中国蓝舌病毒 1株疫苗株、31株野毒株及 1株南非毒株进行测序。结果揭示 33株毒株S1 0基因核苷酸长度均为 82 2bp ,S1 0基因为基因内基因 ,其核苷酸链的第 2 0～ 2 2和 5 9～61位有两个起始密码子 ,共有终止子在 70 7～ 70 9位 ,预测编码NS3和NS3A两种蛋白 ;32株中国毒株间核苷酸差异 0～ 1 0 7个 ,同源性 86%～ 1 0 0 % ;NS3蛋白氨基酸差异 0～ 1 0个 ,同源性 95 6%～ 1 0 0 %。测序毒株与GenBank中 9株其它毒株比较 ,建立的S1 0基因系统发生树 ,将蓝舌病毒分为Chinagroup和USgroup两大基因群 ,两大群的同源性为 85 % ;USgroup包括美国 8株及南非 1株毒株 ;Chinagroup包括中国 32株及澳大利亚 1株毒株 ;说明蓝舌病毒S1 0基因分群与毒株的地理区域来源有关。在国内首次进行了全国较大范围内蓝舌病毒分子流行病学调查 ,揭示了我国蓝舌病毒毒株的遗传多样性。; 张以芳张念祖刘建平朱建波殷震; 关键词：蓝舌病毒系统进化基因多态性

犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析被引量：1: 2007年; 从犬瘟热病毒检测阳性的3份（KM1、KM2、KM3）病料中进行F基因的克隆测序,并与其他5株代表性参考毒株的同一基因序列进行比较（国内外流行毒株以及疫苗毒株）。结果表明,KM1与KM2有95.7%的核苷酸同源性,其氨基酸序列完全相同;KM3株与KM1有1个氨基酸的差异,与参考的5株犬瘟热病毒的F基因核苷酸和氨基酸分析同源性分别为91.1%~96.5%和96.8%~100%。; 高华峰朱建波赵文华姚俊张念祖; 关键词：犬瘟热病毒 F基因融合基因

猪瘟病毒E2蛋白表位分析及其单克隆抗体可变区cDNA测序被引量：1: 2004年; 猪瘟病毒(CSFV)囊膜表面结构糖蛋白 E2 (gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。E2 和 Erns与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程。本文采用抗 CSFV(Alfort Tübingen毒株)E2 结构蛋白的单克隆抗体 c2410 和 a18,淘选噬菌体展示的 12 肽随机肽库,对 CSFV E2 蛋白表位进行分析。研究发现:单克隆抗体 c2410 和 a18 识别同一线性表位,定位于 E2 蛋白的 832-837 位氨基酸(SPTTLR),但二者在 ELISA 和免疫印迹分析中对不同表(拟)位的反应性存在差异。自杂交瘤细胞中提取总 RNA,对单克隆抗体轻链和重链可变区 cDNA 进行序列分析。结果表明:c2410 和 a18 虽然来源于同一批次融合的杂交瘤细胞系,识别同一表位,但仍属于不同的单克隆抗体。; 张富强李志华张念祖; 关键词：猪瘟病毒表位可变区

小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析被引量：8: 2007年; 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。; 赵文华杨仕标蒋梅朱建波李华春肖雷张念祖; 关键词：小反刍兽疫病毒 N M 逆转录-聚合酶链反应

山羊痘云南流行毒株及疫苗株P32基因序列分析被引量：1: 2007年; 将本实验室分离到的山羊痘病毒云南流行毒株MYS、XW、XD及疫苗株VF4主要结构蛋白基因P32基因克隆到PMD18T载体后进行双向测序,所得序列与Genbank中羊痘病毒属成员:山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)、疙瘩皮肤病病毒(SLDV)参考毒株相应序列作对比分析(ByClustalWMethod),结果显示:(1)MYS、XD毒株P32基因全长969bp,疫苗株VF4为974bp,XW毒株为975bp。(2)XW、疫苗株VF4在100～105bp位置处均插入6个A,在947bp位置缺失一个T;SPPV参考毒株在169～171bp位置插入GAT。(3)由于疫苗株VF4P32基因核苷酸序列第414位置处发生了T/A突变,在该处形成一个新的终止密码子TAA,导致完整的开放读码框架(ORF)被打断,只表达第1～411bp(137个Aa)的基因片段,而不能表达出完整的P32蛋白。其余6株毒株的开放读码框架均很相似。(4)在所构建的系统发生树中,LSDV与SPPV参考毒株、MYS和XD株、VF4和XW株、GTPV参考毒株各被划分为一组。所有7个毒株P32基因核苷酸序列的同源性都很高,均在97%以上。其中疫苗株VF4与SPPV参考毒株的同源性最低,为97.6%。XD与XW毒株的同源性最高,为99.8%。(5)酶切位点分析结果显示,MYS、XW、XD、VF4及GTPV和SLDV参考毒株具有唯一的HinfI酶切位点,大约在第694bp位置。SPPV参考毒株具有2个HinfI酶切位点,分别在第391bp和691bp位置处,该酶切位点较适合用来鉴别山羊痘和绵羊痘病毒,而疙瘩皮肤病在临床上就很容易与山羊痘和绵羊痘鉴别开来。; 姚俊李华春高华峰单于乃纯高林张念祖; 关键词：山羊痘病毒 P32基因测序

CSFV囊膜糖蛋白E2中和表位的定位研究: 猪瘟病毒(CSFV)囊膜结构糖蛋白E2(gp55)是激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白.Erns和E2与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程.本文采用抗CSFV中和性单克隆抗体c24/10,淘选噬菌体展示的12肽...; 张富强李志华张念祖; 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 肽库免疫应答; 文献传递

马动脉炎病毒大囊膜蛋白和膜蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1: 2005年; 参考GenBank收录的马动脉炎病毒(EAV)读码框大囊膜蛋白基因 ORF5、膜蛋白基因ORF6的核苷酸序列,分别设计了2对引物,对EAV的这两种主要结构蛋白基因进行了 RT PCR;将扩增产物克隆于pUC18通用载体,对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实克隆片段的可靠和准确性。测序结果,ORF5目的片段包含768 bp,编码255个氨基酸组成的多肽;ORF6目的片段包含489 bp,编码162个氨基酸组成的多肽。与EAV NC 002532标准毒株比较,ORF5、ORF6核苷酸的同源性分别为99.1%和99.4%;推导氨基酸的同源性分别为96.9%和98.2%。; 杜建王志亮宋厚辉金宁一张念祖; 关键词：马动脉炎病毒膜蛋白基因克隆

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