朱耿超
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”资助基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人HVEMIg融合蛋白的研制及其生物学特性的探讨
- 适度、有效免疫应答的启动、发生、发展取决于正性和负性共信号分子间的平衡.LIGHT在LIGHT/HVEM/BTLA(CD160)调控网络中参与了对T细胞的正性激活作用,表明其作为一个共信号分子在机体的免疫调节、器官移植的...
- 黄子逸王雪峰朱耿超张学光
- 人膜型HVEM对T细胞体外增殖和细胞因子分泌的协同刺激作用被引量：1
- 2010年
- 建立人协同刺激分子HVEM的基因转染细胞株,探讨膜型HVEM体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。从此前已插入人HVEM编码区全长基因的pMD18-T/HVEM中用PCR法扩增出目的片段,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP/HVEM重组载体,以脂质体法转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,以免疫荧光标记和流式细胞术分析HVEM分子在转染细胞膜上的表达情况,以MTT法和ELISA法测定获得HVEM转染细胞L929体外对T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果:基因转染细胞株L929/HVEM的细胞膜上能稳定高表达人HVEM分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染HVEM基因的L929/mock细胞相比,L929/HVEM能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖,以及促进T细胞IL-2、IFN-γ、IL-10和TNF-α的分泌。建立了稳定高表达人HVEM分子的基因转染细胞株,并发现膜型HVEM体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著促进作用。
- 齐嫄王雪峰黄子逸朱耿超胡振华张学光
- 关键词：HVEM转染T细胞增殖
- 人膜型LIGHT分子对Mo-DC成熟和T细胞激活的调节作用
- 2013年
- 利用我们建立的表达人膜型LIGHT分子的基因转染细胞(L929/LIGHT)探讨LIGHT/HVEM信号体外对Mo-DC诱导分化的影响,并进一步研究其对T细胞活化和抗凋亡的共刺激作用。从健康人外周血中分离的单核细胞经GM-CSF联合IL-4诱导形成Mo-DC,流式细胞术分析Mo-DC诱导过程中HVEM和LIGHT的表达;基因转染细胞L929/mock、L929/LIGHT、L929/CD40L或L929/LIGHT联合L929/CD40L,分别经丝裂霉素处理后,与GM-CSF联合IL-4诱导的Mo-DC共育,流式细胞术检测Mo-DC细胞表面成熟标志CD83和CD86的表达,利用FITC-Dextran分析Mo-DC对抗原的摄取能力;L929/LIGHT或L929/mock经丝裂霉素处理后,与抗人CD3单抗激发的T细胞共育,流式细胞术分析CD4+和CD8+T细胞表面活化标志CD25的表达,Annexin V和PI双标记分析T细胞的凋亡率。结果表明,高表达HVEM的单核细胞在诱导形成成熟Mo-D(iDC)的过程中下调了HVEM的表达,成熟Mo-DC(mDC)又上调表达HVEM,而LIGHT在Mo-DC分化过程中呈短暂的诱导性表达;基因转染细胞L929/LIGHT及其联合L929/CD40L能上调Mo-DC表面共刺激分子CD83和CD86的表达,并下调Mo-DC对FITC-Dextran的摄取能力;L929/LIGHT细胞能上调CD4+、CD8+T细胞CD25的表达,并增强T细胞抗凋亡能力。因此,基因转染细胞L929/LIGHT表面表达的人膜型LIGHT分子介导的LIGHT/HVEM共刺激信号对Mo-DC的诱导成熟和T细胞活化及抗凋亡能力具有促进作用。
- 曹丽娟宋华峰朱耿超黄子逸王雪峰张学光
- 关键词：T细胞
- 人HVEM-Fc融合蛋白的制备及其生物学特性
- 2013年
- 为建立CHO/HVEM-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌HVEM-Fc融合蛋白,采用常规PCR法分别从本单位已构建的重组载体pGEZ-Term/B7-H1-Fc和pIRES2-EGFP/HVEM上扩增人IgG1(Fc)恒定区和人HVEM胞外段编码基因,XhoⅠ和Bam HI双酶切人IgG1(Fc)恒定区及真核表达载体pIRES2-EGFP,将两种酶切的目的产物连接为pIRES2-EGFP/Fc,同时将获得的人HVEM胞外段基因片段经XhoⅠ和NheⅠ酶切后插入上述pIRES2-EGFP/Fc构建成pIRES2-EGFP/HVEM-Fc重组载体,通过脂质体转染仓鼠卵巢癌CHO细胞,培养基中添加G418长期筛选并将分泌目的蛋白的基因转染细胞株亚克隆化。流式细胞术检测HVEM-Fc融合蛋白的表达,收集含融合蛋白的基因转染细胞培养上清,Protein G亲和层析柱对其进行纯化,Western blot定性分析。MTT检测HVEM-Fc融合蛋白体外对抗人CD3单抗联合基因转染细胞L929/LIGHT刺激的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染细胞CHO/HVEM-Fc分泌的HVEM-Fc融合蛋白能与L929/LIGHT细胞有效结合,纯化后的蛋白经Western blot鉴定出现特异性清晰条带,并且HVEM-Fc融合蛋白对L929/LIGHT协同刺激的T细胞体外增殖具有抑制作用。
- 黄子逸朱耿超王雪峰张学光
- 关键词：融合蛋白共刺激分子T细胞
- 鼠抗人LIGHT单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究
- 朱耿超黄子逸王雪峰张学光
- 人BTLA-Fc融合蛋白的制备及其生物学活性的研究
- 2011年
- 为建立CHO/BTLA-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌BTLA-Fc融合蛋白,采用PCR法从本单位构建的pEGZ-Term/B7-H1-Fc重组质粒中扩增人IgG1(Fc)恒定区,Xho I、BamH I双酶切后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接为重组质粒pIRES2-EGFP-Fc,同时PCR法从pEGZ-Term/BTLA重组质粒中获得人BTLA胞外段基因片段,用Nhe I、Xho I双酶切插入上述pIRES2-EGFP-Fc构建重组载体pIRES2-EGFP/BTLA-Fc。脂质体法以该重组载体转染鼠CHO细胞,G418筛选并亚克隆化。Protein G亲和层析柱对上清中的融合蛋白进行纯化,Western blot作定性分析。CCK-8检测BTLA-Fc融合蛋白对抗人CD3单抗激发的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染CHO细胞培养上清中表达的BTLA-Fc融合蛋白能与L929/HVEM细胞有效结合,纯化的融合蛋白经Western blot鉴定有清晰的目的条带,而且BTLA-Fc融合蛋白对T细胞的体外增殖具有抑制作用。
- 朱耿超黄子逸曹丽娟陈永井王雪峰张学光
- 关键词：融合蛋白T细胞
- 鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:研制特异性鼠抗人PD-L1单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性。方法:以高表达人PD-L1分子的基因转染细胞L929/PD-L1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-L1细胞为抗体筛选细胞,L929/mock细胞为对照细胞,经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析,筛选稳定和持久分泌鼠抗人PD-L1 mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、Western blot、间接免疫荧光法和竞争结合抑制实验等方法对mAb进行生物学特性鉴定;继而体外实验分析mAb对T细胞增殖的影响。结果:成功获得3株鼠抗人PD-L1mAb,分别命名为11G8,2G5和5C3;对其生物学功能的研究结果显示,3株mAb均能识别活化T细胞表面PD-L1分子,和在体外显著促进T细胞的增殖。结论:获得的3株鼠抗人PD-L1功能性mAb,通过阻断PD-1/PD-L1抑制途径能够有效增强T细胞体外增殖,这为进一步研究PD-1/PD-L1信号通路提供了物质基础。
- 周莹陈永井白利雄朱耿超王雪峰张学光
- 关键词：协同刺激分子单克隆抗体T细胞
- 人HVEM基因转染细胞株的建立及其对T细胞的协同刺激作用
- 齐嫄黄子逸朱耿超张学光王雪峰
- 人可溶性BTLA酶联检测试剂盒的研制及其应用的研究
- 共信号分子在免疫细胞上的调节性表达、相互作用及介导的信号参与了免疫应答的有效启动、持续和适时终止。根据共信号分子的结构的不同，可以将其分成两大超家族:免疫球蛋白（B7/CD28或Ig）超家族和肿瘤坏死因子/肿瘤坏死因子受...
- 朱耿超
- 关键词：免疫球蛋白克隆技术
- 人LIGHT基因转染细胞株的建立及其对T细胞协同刺激作用的研究被引量：2
- 2010年
- 建立人协同刺激分子LIGHT的基因转染细胞株,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。采用RT-PCR法从活化的人外周血T细胞中克隆人LIGHT编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP-LIGHT重组子,脂质体法以重组质粒pIRES2-EGFP-LIGHT转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析LIGHT分子在基因转染的L929细胞膜上的表达,MTT法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)探讨获得的基因转染细胞L929/LIGHT体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测转基因L929/LIGHT细胞膜上能稳定高表达人LIGHT分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染LIGHT基因的L929/mock细胞相比,L929/LIGHT能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖;同时L929/LIGHT亦能明显促进T细胞对IL-2、IFN-γ和IL-10的分泌。建立了稳定高表达人LIGHT分子的基因转染细胞株,LIGHT介导的信号在体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著地促进作用。
- 黄子逸王雪峰齐嫄朱耿超胡振华张学光
- 关键词：T细胞
