胡振华
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”资助基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠抗人PD-1单克隆抗体的研制及人可溶型PD-1分子生物学特性的研究
- 协同刺激分子根据其结构的不同,一般分为TNF//TNFR和B7//CD28两大超家族。近几年,B7//CD28家族成员不断扩大,其中PD-1是新近发现的协同刺激分子之一。PD-1分子属于CD28家族,是55KDa的I型跨...
- 胡振华
- 关键词：协同刺激分子PD-1T细胞生物学活性
- 文献传递
- 一种可溶性B7-H1定量检测试剂盒
- 本发明公开了一种可定量检测可溶性B7-H1的试剂盒，包括：本辣根过氧化物酶标记、反应底物四甲基联苯胺、牛血清白蛋白、酶标板、洗液和终止液，所述试剂盒还包括：包被抗体、标准品蛋白和检测抗体，其中，所述包被抗体为鼠抗人B7-...
- 陈永井王勤张学光施敏骅胡振华
- 文献传递
- 人膜型HVEM对T细胞体外增殖和细胞因子分泌的协同刺激作用被引量：1
- 2010年
- 建立人协同刺激分子HVEM的基因转染细胞株,探讨膜型HVEM体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。从此前已插入人HVEM编码区全长基因的pMD18-T/HVEM中用PCR法扩增出目的片段,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP/HVEM重组载体,以脂质体法转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,以免疫荧光标记和流式细胞术分析HVEM分子在转染细胞膜上的表达情况,以MTT法和ELISA法测定获得HVEM转染细胞L929体外对T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果:基因转染细胞株L929/HVEM的细胞膜上能稳定高表达人HVEM分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染HVEM基因的L929/mock细胞相比,L929/HVEM能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖,以及促进T细胞IL-2、IFN-γ、IL-10和TNF-α的分泌。建立了稳定高表达人HVEM分子的基因转染细胞株,并发现膜型HVEM体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著促进作用。
- 齐嫄王雪峰黄子逸朱耿超胡振华张学光
- 关键词：HVEM转染T细胞增殖
- 一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
- 目的:鼠抗人PD-1分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人PD-1分子的转基因细胞L929/PD-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并以L929/PD-...
- 胡振华陈永井王勤白利雄周莹於葛华张学光
- 文献传递
- 一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定被引量：8
- 2010年
- 研制特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。以高表达人PD-1分子的基因转染细胞L929/PD-1作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-1作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果表明,成功获得1株特异、稳定分泌鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6E2。对6E2生物学功能的研究结果提示,该单抗能够识别活化T细胞表达的PD-1分子,且在体外能够显著抑制T细胞的增殖和细胞因子的分泌。获得的特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,通过激发PD-1负性途径能够有效抑制T细胞的功能,为进一步研究PD-1信号奠定了物质基础。
- 胡振华陈永井王勤白利雄王雪峰张学光
- 关键词：协同刺激分子PD-1单克隆抗体T细胞
- 特异性检测人sPD-1蛋白ELISA方法的建立及其应用研究
- 目的:制备检测人可溶性PD-1蛋白(sOX40L)ELISA试剂盒,并利用该试剂盒检测自身免疫性疾病中sPD-1蛋白的表达水平。方法:采用双抗体酶联夹心法研制人sPD-1酶联检测试剂盒,并对其稳定性、精确性和特异性进行分...
- 陈永井胡振华白利雄张学光
- 文献传递
- 人PD-L1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞系中的稳定转染被引量：2
- 2009年
- 目的构建含有人PD-L1基因的真核表达载体,并通过稳定转染获得稳定表达PD-L1分子的HEK293细胞系。方法从人心脏cDNA文库中扩增出PD-L1基因,通过双酶切(Xho1和EcoR1)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染HEK293细胞,通过G418筛选,建立稳定高表达PD-L1分子的HEK293细胞系,通过流式细胞术、RT-PCR及Westernblot分析PD-L1的表达。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/PD-L1,建立了稳定转染PD-L1目的基因的HEK293细胞系。结论成功构建了PD-L1真核表达载体并获得了稳定转染该分子的HEK293细胞系。
- 朱云霞胡振华陈永井李文香陈成黄建安张学光
- 关键词：真核表达载体转染HEK293细胞
- 人LIGHT基因转染细胞株的建立及其对T细胞协同刺激作用的研究被引量：2
- 2010年
- 建立人协同刺激分子LIGHT的基因转染细胞株,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。采用RT-PCR法从活化的人外周血T细胞中克隆人LIGHT编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP-LIGHT重组子,脂质体法以重组质粒pIRES2-EGFP-LIGHT转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析LIGHT分子在基因转染的L929细胞膜上的表达,MTT法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)探讨获得的基因转染细胞L929/LIGHT体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测转基因L929/LIGHT细胞膜上能稳定高表达人LIGHT分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染LIGHT基因的L929/mock细胞相比,L929/LIGHT能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖;同时L929/LIGHT亦能明显促进T细胞对IL-2、IFN-γ和IL-10的分泌。建立了稳定高表达人LIGHT分子的基因转染细胞株,LIGHT介导的信号在体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著地促进作用。
- 黄子逸王雪峰齐嫄朱耿超胡振华张学光
- 关键词：T细胞
- 人PD-1Δex3基因的克隆、表达及其生物学活性的鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建表达人PD-1Δex3(ΔPD-1)基因的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法:通过RT-PCR的方法获得人PD-1全长(PD-1)基因,设计特异性引物,PCR方法获得PD-1Δex3基因的2个cDNA片段,通过重组PCR的方法获得ΔPD-1基因,将目的片段双酶切后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP/PD-1和pIRES2-EGFP/ΔPD-1并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入293T细胞;流式细胞术(FCM)检测转染细胞膜表面PD-1的表达;Western blot法检测培养上清中可溶性PD-1(sPD-1)的表达;间接免疫荧光实验分析ΔPD-1蛋白与PD-1两个配体PD-L1和PD-L2的结合。结果:酶切和测序结果均证实插入的基因序列正确,成功构建两个真核表达载体;FCM分析和Western blot检测结果表明,PD-1转染细胞膜表面高表达PD-1蛋白,细胞培养上清中无sPD-1蛋白,而ΔPD-1转染细胞膜表面不表达PD-1蛋白,细胞培养上清中则有大量sPD-1;间接免疫荧光实验结果表明,ΔPD-1蛋白能够与PD-1两种配体产生特异性结合。结论:成功进行PD-1Δex3基因的真核表达,证实PD-1Δex3基因编码sPD-1蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究PD-1Δex3在PD-1/PD-L信号通路中的生物学作用提供了有价值的物质基础。
- 胡振华陈永井王勤施毕旻白利雄张学光
- 关键词：协同刺激分子PD-1生物学活性
- sPD-1表达的特性及其对PD-1/PD-L1途径的阻断作用和在自身免疫病理中的意义
- 陈永井胡振华王勤白利雄张学光
