查何
- 作品数：14 被引量：52H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达
- 2012年
- 目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。
- 王瑞敏星懿展郭海英何龙杨恬连小华查何彭惠民
- 关键词：JNK毛囊毛囊周期小鼠
- miR-451靶向调控肾小球系膜细胞Ywhaz基因的表达被引量：4
- 2013年
- 目的探讨miR-451对肾小球系膜细胞Ywhaz基因表达的靶向调控。方法应用生物信息学技术对miR-451的靶基因进行预测,PCR法扩增靶基因3′UTR全长片段,插入荧光素酶报告载体pmiR-RB-REPORTTMvector中,构建荧光素酶报告质粒pmiR-Ywhaz-3′UTR。将miR-451 mimics和NC mimics分别转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,将miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,采用Real-time RT-PCR和Westernblot法检测miR-451和Ywhaz的表达水平;将miR-451 mimics和NC mimics分别与pmiR-Ywhaz-3′UTR共转染高糖培养条件下的小鼠系膜细胞,miR-451 inhibitor和NC inhibitor分别与pmiR-Ywhaz-3′UTR共转染低糖培养条件下的小鼠系膜细胞,检测各组细胞荧光素酶活性。结果 Ywhaz基因3′UTR区有11个碱基与miR-451种子序列匹配,其中7个碱基呈高度保守性;荧光素酶报告质粒经测序鉴定构建正确;miR-451在miR-451 mimics组呈高表达,在miR-451 inhibitor组表达降低;miR-451可抑制Ywhaz的蛋白表达;荧光素酶活性检测发现,miR-451可通过与Ywhaz3′UTR的结合,抑制Ywhaz的表达。结论 miR-451可直接靶向糖尿病相关基因Ywhaz,抑制其蛋白表达,为进一步研究miR-451调控早期糖尿病肾病发生发展的机制提供了依据。
- 查何彭惠民马晶周吉王瑞敏尹频文利张政
- 关键词：靶基因早期糖尿病肾病
- S100A9对宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移的影响及其机制探讨被引量：4
- 2015年
- 为初步探讨S100A9在宫颈癌中的生物学作用,利用携带有人S100A9基因的腺病毒(Adh S100A9)感染于低表达S100A9的宫颈癌Hela细胞,通过MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移能力,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测上皮细胞标志蛋白E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)、间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin,Vim)及Wnt/β-联蛋白(β-catenin,β-cat)信号通路相关分子的表达。结果显示,与对照组相比,过表达S100A9的Hela细胞增殖活性增强、迁移率增高,细胞形态由"铺路石"样向"梭形"转变,排列紊乱,伴随E-cad降低(P<0.05)和Vim升高(P<0.01);同时,过表达S100A9的Hela细胞中Wnt/β-cat信号通路的关键分子β-联蛋白水平增加(P<0.01),并且入核增多(P<0.01),该通路的下游靶基因c-myc、Snail及Twist表达也明显上调。该研究结果提示,S100A9促进宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),激活Wnt/β-cat信号通路;S100A9促进增殖和迁移作用的机制可能与其促进EMT和激活Wnt/β-cat信号通路相关。
- 李雪茹孙晖查何段亮李欢袁世梅李爱芳谷月周兰
- 关键词：S100A9宫颈癌迁移上皮间质转化
- HIFU通过下调miR-181a进而促进ICAM-1表达增强小鼠抗肿瘤免疫被引量：2
- 2015年
- 目的探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法 1皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采用简单随机法随机分为HIFU组与荷瘤组,每组30只,采用MTT方法检测各组脾淋巴细胞对B16细胞的杀伤活性,ELISA检测小鼠血清及共培养上清中TNF-α及IFN-γ的表达水平;2qRT-PCR检测HIFU组与荷瘤组脾淋巴细胞中的差异miRNAs;3用生物信息学方法预测差异miRNAs的潜在靶基因,通过RT-PCR及Western blot验证靶基因的表达;4构建荧光素酶报告质粒进一步验证差异miRNAs的靶基因,再将差异miRNAs的mimics转染脾淋巴细胞,RT-PCR及Western blot检测其靶基因表达的变化,以进一步确认差异miRNAs对靶基因表达的影响。结果 1HIFU治疗能够抑制黑色素瘤生长,促进脾淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ,增强脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;2HIFU处理明显下调脾淋巴细胞中miR-181a的表达水平(P<0.01);3生物信息学方法预测发现共刺激分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)可能是miR-181a的潜在靶基因,且HIFU处理明显促进脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA和蛋白质的表达(P<0.01);4miR-181a mimics显著抑制pLUC-ICAM-1-3'UTR报告质粒荧光素酶的活性(P<0.01),并下调脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.01)。结论 HIFU通过抑制miR-181a对共刺激分子ICAM-1的负调控作用从而增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫。
- 袁世梅李欢杨敏段亮查何孙晖李雪茹罗进勇李崇雁王智彪何通川周兰
- 关键词：高强度聚焦超声抗肿瘤免疫MICRORNA细胞间黏附分子-1
- S100A8通过调控炎性微环境中的巨噬细胞促进结直肠癌细胞迁移及其分子机制
- 研究目的： 结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是世界性常见的恶性消化道肿瘤，也是我国常见八大癌症之一，其发病率年平均增长约4.2％，高于全球平均增长速度。随着病情的发展，其肿瘤组织可逐渐突破肠壁，...
- 查何
- 关键词：炎性因子结直肠癌巨噬细胞
- miR-451对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其机制被引量：4
- 2013年
- 目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-451对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其机制。方法在Lipofectamine 2000介导下,将miR-451模拟物(miR-451 mimics)及mimics对照分别转染高糖培养的肾小球系膜细胞,另设高糖未转染组和低糖未转染组,实时荧光RT-PCR法检测各组细胞中miR-451的表达水平;MTT法检测miR-451对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响;Western blot法检测靶蛋白Ywhaz、p-p38 MAPK和p-MKK3的表达水平。结果 miR-451组细胞中miR-451的表达水平较mimics对照组明显升高(P<0.01);miR-451组第2、3、4天的细胞增殖能力明显低于高糖未转染组(P均<0.05),第3、4天明显低于mimics对照组(P均<0.05);与mimics对照组和高糖未转染组比较,miR-451组细胞中Ywhaz、p-p38 MAPK和p-MKK3的表达水平均明显下降(P均<0.05)。结论 miR-451可抑制Ywhaz蛋白的表达,降低p38 MAPK信号途径中p-p38 MAPK和p-MKK3蛋白的表达,从而降低高糖诱导的肾小球系膜的增殖。本实验为研究糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发病机制提供了新的思路。
- 尹频贺勇查何周吉文利彭惠民张政
- 关键词：肾小球系膜细胞细胞增殖糖尿病肾病
- 外源性S100A6蛋白对人结直肠癌细胞S100A6基因转录的影响及机制探讨
- 2016年
- 目的:探讨钙周期蛋白S100A6对人结直肠癌细胞系HCT116及SW480中S100A6基因转录的影响及机制。方法:首先采用原核表达方法制备重组人S100A6蛋白(recombinant human S100A6,rh S100A6)并鉴定;rh S100A6蛋白(终浓度为10μg/ml)、重组腺病毒Adsiβ-catenin(可表达β-catenin的siRNA)处理结直肠癌细胞HCT116、SW480及正常肠上皮细胞FHC,采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)及定量实时聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR)检测S100A6 mRNA的水平,采用RT-PCR检测细胞中E-cadherin mRNA水平,采用Western blot检测并比较HCT116及SW480细胞核中β-catenin蛋白的水平变化,采用细胞免疫荧光法检测细胞中β-catenin分布的变化。结果:成功制备rh S100A6蛋白;外源性rh S100A6蛋白上调HCT116及SW480细胞中S100A6 mRNA水平和细胞核中的β-catenin蛋白水平并促进β-catenin发生核移位,同时下调细胞中E-cadherin mRNA水平;Adsiβ-catenin与rh S100A6联合处理组的S100A6 mRNA水平明显低于单独rh S100A6处理组。所有差异均具有统计学意义。结论:胞外的S100A6蛋白增强结直肠癌细胞中S100A6基因的转录,其机制可能涉及β-catenin通路的激活。
- 孙晖李雪茹查何段亮袁世梅李欢李爱芳谷月周兰
- 关键词：结直肠癌S100A6Β-CATENIN
- 糖尿病肾病循环microRNA差异表达谱的分析被引量：7
- 2014年
- 为了解循环microRNA在早期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)发病机制中的作用,该文采用芯片筛查结合real-time PCR检测早期糖尿病肾病患者循环microRNA差异表达谱,同时应用生物信息学方法预测差异表达谱microRNA的靶基因.结果表明:芯片筛查出49个microRNA在DN中呈差异表达,其中信号值在两组中均大于1 000的microRNA有22个,17个上调,5个下调.选择其中差异倍数大于2的5个microRNA进行realtime PCR验证,结果与芯片结果一致,分别为let-7a,let-7d,let-7f和miR-363在DN中低表达,miR-4429在DN中高表达.同时,应用生物信息学技术预测了5个microRNA的靶基因,主要涉及细胞代谢过程调控、生长因子反应和细胞增殖等的相关基因.DN差异表达谱的建立为探寻microRNA发病中的作用以及DN的早期诊治提供了新的思路.
- 彭睿查何周吉彭惠民张政
- 关键词：糖尿病肾病MICRORNA表达谱
- 柚皮素对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响被引量：9
- 2013年
- 目的:探讨柚皮素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柚皮素组。侧脑室注射链脲佐菌素(ICV-STZ)(3 mg/kg,共2次)制备AD模型。柚皮素组行柚皮素灌胃,其余两组生理盐水灌胃,1次/d,连续3 w。以Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;测试完成后取各组大鼠脑组织,用化学比色法测定其超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组织化学染色法观察其Aβ42和Aβ40的表达情况;Western blotting法定量检测其Tau蛋白的表达及磷酸化程度。结果:水迷宫结果显示,与假手术组比较,模型组平均逃避潜伏期显著延长(P<0.05),在原平台活动时间显著缩短(P<0.05);与模型组比较,柚皮素组平均逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),在原平台活动时间显著延长(P<0.05);化学比色法结果显示,模型组较假手术组肠组织SOD活性显著降低(P<0.05);而柚皮素组较模型组肠组织SOD活性显著升高(P<0.05);与假手术组比较,模型组肠组织MDA含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,柚皮素组MDA含量显著降低(P<0.05);免疫组化结果显示,模型组Aβ40、Aβ42阳性表达较对照组显著增多(P<0.05),柚皮素组较模型组阳性表达显著降低(P<0.05);Tau蛋白表达在各组间无差异,但模型组Tau蛋白磷酸化程度较对照组显著增强(P<0.05),柚皮素组较模型组显著减弱(P<0.05)。结论:柚皮素可通过氧化应激途径较好地改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力。
- 马晶杨文青查何余华荣
- 关键词：柚皮素阿尔茨海默病氧化应激TAU蛋白
- miRNA-451表达质粒的构建及对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响。方法:Hsa-miRNA-451序列通过miRBase数据库查找,根据此序列设计出2条寡核苷酸片段,将目的基因经过退火处理后克隆至真核表达载体pGenesil-1.1质粒中,从而构建成为miRNA-451真核表达载体(pGenesil-1.1-miRNA-451质粒)。将pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control质粒分别转染人A549肺癌细胞,经过G418的筛选,建立pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株。流式细胞术分析检测细胞凋亡的情况;Transwell小室检测miRNA-451对细胞侵袭能力的影响;细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果:经测序证实miRNA-451真核表达质粒构建成功,与未处理的人A549肺癌细胞和稳定表达pGenesil-1.1-control的细胞相比,稳定表达了pGenesil-1-miRNA-451的人A549肺癌细胞的侵袭和迁移能力均明显受到抑制影响,而细胞凋亡无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移具有显著的抑制作用,但对细胞凋亡作用不明显。
- 姚莉孙艳查何彭惠民
- 关键词：肺癌凋亡
