梁凯
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金武汉市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氯甲基苯甲酰氨荧光染料用于羊骨髓基质干细胞标记和心肌内示踪动物实验
- 2017年
- 目的探讨氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-Di I)标记羊骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行心肌内移植示踪的可行性。方法羊BMSCs经CM-Di I标记后(D-BMSCs),体外传代培养观察荧光变化;D-BMSCs细胞悬液经心肌内直接注射于心梗区和梗死移行区,观察示踪有效性。结果 CM-Di I可高效标记羊BMSCs。D-BMSCs在荧光显微镜下呈橙红色。体外培养证实D-BMSCs保持骨髓基质干细胞特异细胞形态,并在传2代后仍保持较强荧光。流式细胞术分析表明D-BMSCs与BMSCs增殖能力没有差异;三系分化证实D-BMSCs与BMSCs分化潜能相当。心肌内植入1周,D-BMSCs在荧光显微镜下发红色荧光,清晰显示其在心脏中的位置和细胞形态。结论 CM-Di I可用于羊BMSCs标记和心肌内移植示踪。
- 赵云山王嵘丁毅梁文涛张勇梁凯
- 小鼠肝癌H22细胞不同乙醛脱氢酶表达亚群的致瘤性分析被引量：1
- 2012年
- 【目的】利用干细胞中乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)高表达的特性,分选小鼠肝癌H22细胞中ALDH表达不同的亚群,分析细胞球体形成与致瘤性,为针对肿瘤干/祖细胞的肿瘤靶向治疗奠定基础。【方法】流式细胞术分选小鼠肝癌H22细胞的ALDH阳性、弱阳性和阴性细胞亚群;将分选出的各亚群细胞,在干细胞培养基中培养,观察球体形成;将各亚群细胞分别以不同数量级在小鼠背部皮下注射致瘤,观察成瘤情况,绘制生长曲线。【结果】(1)小鼠H22细胞可分选出ALDHhigh,ALDHlow,ALDHneg3个亚群细胞。(2)ALDHhigh亚群细胞可形成细胞球体,ALDHlow和ALDHneg亚群细胞不能形成球体。(3)ALDHlow亚群在接种2×102个细胞和2×104个细胞时,肿瘤的生长趋势和平均体积均高于其它2个亚群。【结论】H22细胞中ALDHhigh亚群ALDH表达阳性且可以形成球体,符合干细胞特征;ALDHlow亚群呈ALDH弱表达,体外培养不能形成球体,但致瘤性高于ALDHhigh和ALDHneg亚群细胞,是出现分化并进入快速增殖状态的亚群,可能是在肿瘤生长与复发中具有重要意义的肿瘤祖细胞,应成为肿瘤治疗的重要标靶。
- 丁毅梁文涛胡鑫梁凯孙慧伟徐迎新
- 关键词：乙醛脱氢酶肿瘤干细胞动物实验
- 抗肿瘤治疗对晚期肿瘤患者外周血CD4+/CD8+记忆T细胞亚群的影响被引量：10
- 2013年
- 目的探索建立晚期肿瘤的免疫评估方法,并初步研究抗肿瘤治疗特别是免疫治疗对免疫记忆的影响。方法将31例晚期肿瘤患者按治疗与否分为未治组(17例)与经治组(14例),应用流式细胞术检测患者外周血CD4+中央型记忆T细胞(TCM)、CD8+TCM、CD4+效应型记忆T细胞(TEM)及CD8+TEM比例,分析晚期肿瘤患者免疫记忆特征及免疫治疗对免疫记忆的影响。结果 CD4+T细胞中以TCM为主,而CD8+T细胞中TCM、TEM比例相当。与未治组比较,经治组外周血中CD4+TCM和CD8+TCM比例显著降低(P<0.01,P<0.05),CD8+TEM显著升高(P<0.05)。进一步分析发现免疫治疗次数和患者CD8+TCM比例呈显著正相关(r=0.747,P=0.002)。结论记忆T细胞可有效评价晚期肿瘤患者的免疫状态,且免疫治疗可以有效纠正晚期肿瘤患者的免疫耗竭状态。
- 张兰李则学刘海亮梁文涛梁凯李力徐迎新
- 关键词：进展期肿瘤记忆T细胞
- 结肠癌肺转移小鼠高调节性T细胞浸润模型的建立与鉴定
- 2018年
- 本研究旨在建立小鼠结肠癌肺转移高调节性T细胞（Tregs）浸润模型，现报道如下。一、材料与方法1．动物模型构建：经尾静脉注射BALB／C小鼠结肠癌高转移细胞株（C126），建立结肠癌肺转移模型。2．病理组织学检测：用Bouins液对小鼠肺组织进行固定、染色，对肺转移灶结节进行分级及计数。
- 王垒梁文涛梁文涛梁凯徐迎新
- 关键词：BALB/C小鼠调节性T细胞T细胞浸润肺转移灶
- 外周血Tcm和Treg在胰腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系被引量：4
- 2016年
- 目的探讨胰腺癌患者外周血中央型记忆T细胞(central memory T cells,Tcm)和调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)的表达情况,及其与临床病理因素的关系。方法选取2014年6月—2016年1月解放军总医院普通外科收治的128例未治胰腺癌患者作为胰腺癌组,另选取同期48例体检健康者作为健康对照组。两组均采集外周血5 ml,分离单个核细胞,以荧光标记的抗CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CD25、FOXP3抗体染色,运用流式细胞术检测Tcm及Treg表达率。并进一步分析胰腺癌组Tcm和Treg表达及其与临床病理因素的关系。结果胰腺癌组Tcm及Treg表达率均显著高于健康对照组[(19.38±5.42)%vs(12.22±3.21)%,t=8.60,P=0.00;(2.34±0.89)%vs(0.17±0.03)%,t=16.87,P=0.00]。胰腺癌组Tcm及Treg表达率均与临床分期及淋巴结转移相关(P均<0.05),Tcm表达率还与患者年龄相关(χ2=28.00,P=0.00)。结论未治胰腺癌患者外周血Tcm和Treg高表达,提示存在一定程度的抗肿瘤预存免疫记忆,但呈现为免疫抑制状态;其表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移相关。
- 郑丽娜李则学张兰梁凯梁文涛刘海亮
- 关键词：胰腺肿瘤T淋巴细胞亚群
- 移植肝细胞与胶原水凝胶单元皮下创建工程化肝组织
- 2015年
- 背景:胶原水凝胶可为肝细胞生长和组织重建提供良好的基质支持,并且以胶原为基质构建的工程化组织易于合并生长,形成融合组织。目的:尝试将肝细胞/胶原水凝胶复合物打散成小块肝单元,堆积在皮下腔中,提高工程化肝组织厚度。方法:将新鲜分离的大鼠肝细胞与胶原水凝胶复合,构建肝细胞/胶原水凝胶复合物,待固化后将其打散成小块肝单元,以未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物作为对照。取6只SD大鼠,其中3只切除2/3肝脏,诱导肝再生,于双侧腹股沟皮下腔中分别植入打散与未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物;另3只于双侧腹股沟皮下腔中分别植入打散与未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物。植入后7 d取材,采用苏木精-伊红染色、免疫组化染色、印度墨水灌注等方法对工程化肝组织形成情况进行评价。结果与结论:两组移植物均在皮下腔中形成了血管工程化肝组织,但小块肝单元相互融合,形成了大块血管工程化肝组织,肝组织厚度可达4 mm;整块植入的肝移植物只形成小块肝组织,其厚度只有几层细胞。免疫组织化学染色证实,血管工程化肝组织中的肝细胞具有天然肝细胞的特征及功能。肝部分切除实验表明,工程化肝组织具有对肝部分切除再生刺激产生反应的能力。结果表明将肝细胞/胶原水凝胶移植物打散成小块单元,堆积在皮下腔中,可提高工程化肝组织的厚度。
- 李则学张兰梁文涛梁凯卫博
- 关键词：肝细胞胶原水凝胶生物材料肝组织工程
- 小鼠肝癌H22细胞中不同干性亚群的分选与鉴定
- 2012年
- 目的利用干细胞中乙醛脱氢酶(ALDH)高表达的特性分选并鉴定肿瘤细胞中存在的ALDHhigh、ALDHlow及ALDHneg细胞亚群。方法以流式细胞术检测小鼠肝癌H22、人胃癌BGC-823、结肠癌LS-174T、肝癌SMMC-7721细胞及胰腺癌SW-1990和Panc-1细胞系中ALDH+细胞的表达;在确定ALDH阳性表达的细胞中,以ALDH表达的高低差异,将细胞分选并定义为ALDHhigh、ALDHlow、ALDHneg细胞亚群;对分选出的3种细胞亚群进行CD133/CD44表型及细胞周期分析。结果 (1)在小鼠肝癌H22细胞、人结肠癌LS-174T细胞、胰腺癌SW-1990细胞和Panc-1细胞中存在着ALDH阳性表达,而在人胃癌BGC-823细胞和肝癌SMMC-7721细胞中未见ALDH表达;(2)在小鼠肝癌H22细胞中能明确分选出存在荧光差异的3群细胞即ALDHhigh、ALDHlow和ALDHneg细胞亚群;(3)H22的ALDHhigh、ALDHlow、ALDHneg3个亚群中CD133/CD44表达存在差异,其表达比例依次减少;(4)H22细胞中ALDHhigh亚群主要处于G0/G1期,ALDHlow亚群处于S期,而ALDHneg亚群处于G2/M期。结论在肿瘤细胞中存在着介乎于肿瘤干细胞与终末肿瘤细胞之间的特异性亚群,该亚群为肿瘤治疗提供了新的方向。
- 丁毅梁文涛胡鑫梁凯孙慧伟徐迎新
- 关键词：乙醛脱氢酶肿瘤干细胞流式细胞术细胞表型
- 慢病毒载体用于羊骨髓间充质干细胞基因表达实验被引量：1
- 2016年
- 目的探讨慢病毒载体用于羊骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)基因表达关键问题。方法携带绿色荧光蛋白基因(Zs Green)的慢病毒载体感染羊MSCs获得慢病毒转染MSCs(MSCz),采用流式细胞仪、MTT检测、三系分化等方法对MSCz比例、细胞形态、增殖及分化潜能进行评价。结果 MSCz保持骨髓间充质干细胞特有的长梭形细胞形态,并高效表达绿色荧光蛋白。流式细胞仪分析显示MSCz比例随感染复数(multiplicity of infection,MOI)增加而升高,在MOI值为20时MSCz比例可达71.2%。细胞生长曲线分析表明MSCz与MSCs增殖模式和能力相同。三系分化证实MSCz与MSCs在向骨、脂肪和软骨细胞分化方面没有差异。过氧化氢和低氧处理表明MSCz、MSCs对这些不利环境反应相同。结论慢病毒载体是羊MSCs基因表达的良好载体。
- 梁文涛丁毅王嵘张勇李则学梁凯赵云山
- 关键词：慢病毒载体转染
- 雷公藤生物碱系列组分对人CIK、HCT116及HepG2细胞的增殖抑制作用被引量：5
- 2014年
- 目的从雷公藤生物碱系列组分中筛选具有免疫抑制活性及抗肿瘤作用的组分,评价其增效减毒效果。方法采用MTT法,研究雷公藤总生物碱及倍半萜类生物碱共5种组分对人CIK细胞、结直肠腺癌HCT116细胞及肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,以及筛选出的LGT-ZF1组分在不同时间点对3种细胞的抑制作用。结果 MTT实验发现总生物碱(LGT总生物碱)及3种倍半萜类生物碱组分(LGT-ZF1、2、3)有细胞增殖抑制活性。其中LGT-ZF1对人CIK细胞、HCT116细胞、HepG2细胞的IC50值分别为(2.08±0.11)μg/mL、(2.36±0.16)μg/mL、(6.05±0.17)μg/mL,抑制效应呈时间剂量依赖性。结论 LGT-ZF1组分具有较好的免疫抑制活性及抗肿瘤作用。
- 陈贵兵徐迎新梁凯李荣
- 关键词：雷公藤组分中药
- 冻存复苏制备同体来源的细胞毒性T淋巴细胞
- 2016年
- 目的观察冻存复苏对淋巴细胞增殖及杀伤活性的影响,并探索小鼠同体CTL的制备。方法 5.0×106个/m L脾源性单个核细胞经CELLBANKER2小鼠淋巴细胞冻存液缓慢冻存,6 d后再采用39℃水浴快速复苏;分别取新鲜淋巴细胞和冻存复苏后(CP)淋巴细胞经体外100 ng/m L CD3ε单克隆抗体(m Ab)、10 ng/m L重组小鼠白细胞介素2(rm IL-2)刺激扩增7 d分别获取细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和CP-CIK;骨髓来源的树突状细胞(DC)分别于同系异体来源和冻存复苏后自体来源的脾源性单个核细胞混合培养制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。台盼蓝拒染法分别计数活细胞,流式细胞术检测CD3+T及调节性T细胞(Treg)比例,ELISA检测上清中γ干扰素(IFN-γ)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放法分析细胞毒活性。结果淋巴细胞经冻存复苏后,细胞存活率为78%,冻存前、复苏后CD3+T淋巴细胞及Treg比例无统计学差异;CP-CIK与新鲜CIK在细胞扩增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及细胞毒活性均无明显差异;同体CTL和异体CTL在细胞扩增、Treg比例、上清中IFN-γ水平以及细胞毒活性方面也无显著差异。结论淋巴细胞的冻存复苏有助于获取与传统CTL同等增殖活性及杀伤活性的同体来源的CTL。
- 王垒彭娜胡晓燕梁文涛梁凯彭贵主
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞冻存复苏调节性T细胞
