沈仁权
- 作品数：12 被引量：21H指数：4
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- pUC衍生质粒的一个低拷贝数突变型
- 1989年
- 本文报道大肠杆菌的ColE1类似质粒的一个低拷贝数突变型。从载体质粒pUC4衍生的重组质粒pPGVT3在大肠杆菌宿主DF2145中是不稳定的,以pPGVT3转化DF2145时在4o℃培养得不到转化子。用诱发点突变的羟胺体外处理pPGVF3质粒DNA,得到一个稳定性提高了的突变质粒pPGVT3HA,突变的位置被确定在质粒的pUC部分,突变降低了pUC及其衍生质粒的拷贝数。文中对质粒的稳定性与拷贝数的关系作了讨论。
- 何笑松吴小云沈仁权盛祖嘉
- 关键词：突变型
- 编码耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的亚克隆与高表达被引量：5
- 1997年
- 目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。并与ｘｙｌＥ基因编码的邻苯二酚２，３双加氧酶作了耐热性比较。结论：ｐｈｅＢ基因在大肠杆菌中获得了高表达，高表达后重组酶的耐热性未发生改变。
- 蔡在龙季朝能王学敏王学敏张洁张洁毛裕民
- 关键词：双加氧酶大肠杆菌
- 嗜热脂肪芽孢杆菌CU21中有关质粒pFDX163的整合和游离状态的一种新的相转变现象被引量：1
- 1990年
- pFDX1是带有外源基因xyIE的重组质粒。从嗜热脂肪芽孢杆菌CU21(pFDX1)出发,提高培养温度后选择卡那霉素抗性突变菌落,得到一个变异株CU21-163。该菌株含有突变质粒pFDX163,它由一个来自宿主基因组的2.0kb的H片段插入pFDX1而构成。pFDX163可通过H片段的同源重组而整合到染色体上。CU21-163包含y、w两类细胞,二者的xyIE基因表达量有明显差异。这两类细胞在分裂过程中呈现一种新的相转变现象,即y细胞的后代中经常出现少数w细胞,w细胞的后代中经常出现少数y细胞。对CU21-163的不同细胞群体的总DNA样品中游离质粒与整合质粒的含量进行了测定,由此推断y细胞含有游离质粒和整合质粒,w细胞只含整合质粒。
- 何笑松沈仁权盛祖嘉
- 关键词：嗜热细菌相转变
- 嗜热脂肪芽孢杆菌FDTP－3编码邻苯二酚2，3－双加氧酶基因的核苷酸全序列分析被引量：4
- 1995年
- 嗜热脂肪芽孢杆菌ＦＤＴＰ－３编码邻苯二酚２，３－双加氧酶基因的核苷酸全序列分析何知庆，毛裕民，盛祖嘉，沈仁权（复旦大学遗传所，上海２００４３３）嗜热细菌与嗜温细菌相比，在用于分解工业废水的酚菜化合物方面可望处于有利的地位．我们在前文中［１］报道了对一...
- 何知庆毛裕民盛祖嘉沈仁权
- 关键词：嗜热细菌核苷酸
- 嗜热脂肪芽孢杆菌启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11的构建被引量：4
- 1990年
- 以pPL703的衍生质粒pPGV5为载体,从嗜热脂肪芽孢杆菌CU21总DNA的Sau 3A酶切产物中得到1个0.54kb的启动子片段,它能促进载体上的无启动子的cat-86基因在嗜热脂肪芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌中表达。这一片段以正、反向插入pPGV5载体,都能使重组质粒转化CU21原生质体的效率提高10^(?)至10(?)倍。Southern杂交实验表明,这一启动子片段与Imanaka等报道的来自CU21中的隐蔽性质粒pBS02的能提高转化效率的1.6kb Eco RI片段是同源的。利用所得到的0.54kb Sau 3A片段构建了新的启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11,二者都能以很高的效率转化CU21原生质体。
- 何笑松沈仁权盛祖嘉
- 关键词：原生质体转化
- 螺旋链霉菌转化的研究被引量：4
- 1989年
- 以细菌质粒pBR322、pBR325、pPS108、pSS31、RP4等对螺旋链霉菌(Streptomycesspiramyceticus n.sp.298-36)成功地进行了质粒DNA的转化,转化效率达10~4转化子/μgDNA。研究了菌龄、菌丝分散状况、两价阳离子等因素对转化的影响,建立了螺旋链霉菌的转化系统。
- 王筠陈孝康周健明朱逸昕毛世红沈仁权盛祖嘉
- 关键词：DNA转化
- 嗜热细菌的高温适应机制
- 1991年
- 本文报道在45℃以下培养的嗜热脂肪芽孢杆菌T521的磷酸葡萄糖异构酶的同工酶谱上显示3条同工酶带(PGIA_1,PGIA_2,PGIB),在55℃以上培养的细菌的同工酶谱显示1条额外的酶带(PGIC).克隆得到低温酶带的编码基因pgiA和pgiB,但是未能克隆到高温酶带的编码基因.体外重建实验结果说明PGIC是pgiA和pgiB基因编码产物的共聚体,并且pgiB基因受温度调控,此外还发现PGIC比PGIA和PGIB更为耐热.这是嗜热细菌的一种可塑性的高温适应机制.本文还广泛地讨论了嗜热细菌的高温适应机制.
- 盛祖嘉陶无凡王丽莉沈仁权
- 关键词：嗜热细菌同功酶
- xylE基因在嗜热脂肪芽孢杆菌中的表达被引量：4
- 1990年
- 以嗜热脂肪芽孢杆菌CU21的表达型质粒pFDC11为载体,插入来自恶臭假单孢菌的编码邻苯二酚2,3-双加氧酶(CatO_2ase)的xylE基因,构建成重组质粒pFDX1转化入CU21受体,在48℃培养时得到了表达产物,表明常温细菌的xylE基因可以在高温菌启动子的带动下在高温菌宿主中表达。采用提高培养温度后选择卡那毒素抗性突变的方法,得到了在55℃及6O℃的CatO_2ase表达量明显提高的变异菌株CU21-161。本文同时报道一种用完整细胞悬浮液测定CatO_2ase活力的方法。
- 何笑松沈仁权盛祖嘉
- 关键词：嗜热芽孢杆菌基因表达
- 螺旋霉素链霉菌噬菌体的分离和鉴定被引量：2
- 1989年
- 从螺旋霉素的异常发酵液及土壤样品中分离到19株螺旋霉素链霉素噬菌体,对每一噬菌体进行了纯化,根据血清中和反应,这些噬菌体可分为4种血清型(P_(11)型、1010型、1012型及4031型)。P_(11)型和1012型噬斑小而清晰,4031型和1010型大而不清晰。观察了4种血清型的代表性噬菌体形态和它们的DNA的限制性内切酶酶切片断长度,多态性。
- 周健明朱逸忻陈孝康刘玉顺朱建华沈仁权盛祖嘉
- 关键词：螺旋霉素链霉菌噬菌体
- 嗜热脂肪芽孢杆菌中转座因子IS5376的转座行为研究
- 1997年
- ＩＳ５３７６和ＩＳ５３７７是在嗜热脂肪芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中发现的两个转座因子。随机取样分析的结果说明，ＩＳ５３７６由ＣＵ２１染色体向质粒ｐＦＤＣ５和ｐＦＤＣ１２的转座受温度的影响，而ＩＳ５３７７则不。温度影响的原因还不清楚，从现有证据看来，这由ＩＳ５３７６本身的性质所决定。另外，测得ＩＳ５３７６的转座作用有一定程度的专一性，还测得转座后所造成的目标序列的顺向重复为４或５ｂｐ。
- 许可毛裕民沈仁权盛祖嘉
- 关键词：转座因子芽孢杆菌
