祖莹
- 作品数：12 被引量：52H指数：5
- 供职机构：蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 日本血吸虫重组抗原rSj14-3-3免疫保护作用的初步研究被引量：7
- 2004年
- 目的 初步探讨重组信号蛋白 14 3 3及 14 3 3与GST融合蛋白抗日本血吸虫尾蚴感染和抗血吸虫病的免疫保护作用。 方法 用rSj14 3 3和rSj14 3 3 /SjGST免疫BALB/c小鼠 ,日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤攻击感染 ,收集实验组与对照组成虫和虫卵 ,计算减虫率和减卵率 ;间接ELISA法测定实验组与对照组小鼠免疫前、后血清中特异性IgG抗体水平的变化 ;显微镜下测量并比较实验组与对照组肝脏切片上单个虫卵肉芽肿大小 ,观察两种重组抗原对小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。 结果 上述两种重组抗原在尾蚴攻击感染后的减虫率分别为 3 1.93 %和 3 4.3 9% ;每克肝组织减卵率分别为 5 3 .2 4%和 60 .0 6% ,每对成虫减卵率分别为 3 3 .3 9%和 40 .48% ;免疫前各组血清IgG抗体A值差异无显著性 ,免疫后实验组血清IgG抗体A值明显高于对照组 ;实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿平均直径比对照组分别下降3 5 .2 3 %和 46.13 %。 结论 信号蛋白 14 3 3在抗感染和抗病免疫中具有保护作用 ,复合多价疫苗的免疫保护作用可能优于单价疫苗。
- 李德发祖莹陈月生沈继龙
- 关键词：免疫保护疫苗
- 补体系统在抗钩端螺旋体感染中的作用
- 1997年
- 本文报告感染构端螺旋体的豚鼠及正常豚鼠血清补体50％溶血（CH50）及血清对中性粒细胞（PMN）的趋化作用。结果显示感染组CH50明显降低，血清对PMN的趋化能力明显提高（P＜0．01）；经青霉素治疗后补体活性无明显改变（P＞0．05）。提示补体系统参与了抗钧端螺旋体的感染，并对变态反应的免疫病理损伤有一定作用。
- 吴俊英陈艺林祖莹蒋惠荷李英欣
- 关键词：钩端螺旋体补体
- 神经元细胞信号传导蛋白质14-3-3ζ编码基因的扩增和克隆被引量：1
- 2001年
- 目的 克隆神经元信号传导蛋白质 14 3 3ζ编码基因 ,以研究其在人神经退行性病变中的诊断价值、细胞信号传导过程中的作用及对细胞分裂、细胞凋亡的影响。方法 提取人脑胶质瘤细胞总mRNA ,以其为模板逆转录合成cD NA第一链 ,设计合成引物 ,用PCR扩增 14 3 3ζ基因编码序列 ,将其插入 pGEM T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的PCR进行鉴定。结果 RT PCR扩增出一条约 75 0bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR获得了一条与RT PCR大小相同的条带。经DNA测序证明所克隆的DNA片段与GenBank收录序列一致。结论 信号传导蛋白质 14 3 3ζ重组 pGEM T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供了条件。
- 祖莹沈继龙汪学龙
- 关键词：遗传学CJD编码基因基因扩增
- 日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫被引量：3
- 2004年
- 目的 制备日本血吸虫裸露DNA疫苗 (pBK Sj14 3 3) ,观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法 以RT PCR方法扩增Sj14 3 3基因 ,并将其亚克隆入真核表达载体pBK ;提取、纯化重组质粒pBK Sj14 3 3,肌肉注射法接种BALB/c小鼠 ;日本血吸虫尾蚴攻击感染后 ,剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,观察pBK Sj14 3 3对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响。结果 1%琼脂糖凝胶电泳显示 ,RT PCR扩增产物与EcoRⅠ +XhoⅠ双酶切重组质粒得到的插入片段大小相同 ,约为76 5bp ,核苷酸序列测定证实插入片段为Sj14 3 3;免疫注射pBK Sj14 3 3后 ,14 3 3组平均每只小鼠获检成虫数为 2 2 9± 9 6 ,与对照组成虫数 (31 3± 7 3)比较 ,14 3 3组小鼠平均成虫负荷下降了 2 7%。经 5 %氢氧化钾消化后 ,14 3 3组平均每克肝组织虫卵数为 16 6 0 0± 5 90 4 ,每对成虫平均虫卵数为 476 9± 115 6 ,与对照组平均每克肝组织虫卵数 (77875± 4 32 6 )和每对成虫平均虫卵数 (972 3± 2 0 74 )比较 ,减卵率为 79% ,每对成虫减卵率为 5 1%。肝脏虫卵肉芽肿平均直径下降了 2 9%。结论 DNA疫苗pBK Sj14 3 3构建成功 ,且在小鼠抗血吸虫感染中有一定的免疫保护作用 。
- 李德发陈月生祖莹沈继龙
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗保护性免疫
- 重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析被引量：8
- 2003年
- 目的 :纯化日本血吸虫信号蛋白质 14 3 3编码基因的原核表达产物 ,分析纯化产物的免疫学特性。方法 :SDS PAGE鉴定重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)蛋白包涵体 ,超声破碎细胞收集包涵体 ,尿素溶解包涵体 ,NiSO4平衡层析柱 ,亲和层析纯化rSj14 3 3,Western blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果 :rSj14 3 3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达 ,通过亲和层析在 32 .5kDa附近得到单一蛋白条带 ,Western blot证实纯化产物为rSj 14 3 3,且具有与天然Sj 14 3 3相同的抗原表位。结论 :成功纯化了rSj14 3 3蛋白 ,为研究 14 3 3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。
- 李德发沈继龙祖莹刘庆中
- 关键词：免疫特性日本血吸虫纯化
- 信号蛋白质14-3-3研究进展被引量：2
- 2001年
- 14 - 3- 3信号蛋白质家族是一组高度保守 ,分布十分广泛的多功能真核生物蛋白质 ,具有 7个亚型 ,与各种信号肽分子包括激酶、磷酸酶、膜转移受体等结合 ,参与细胞内信号传导包括有丝分裂信号转导、细胞周期调节、细胞凋亡等 。
- 祖莹沈继龙
- 关键词：RAF-1CJD
- 两种血吸虫病疫苗候选分子在原核细胞的融合表达被引量：13
- 2003年
- 目的 在原核细胞中表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3的融合蛋白。 方法 RT- PCR法从日本血吸虫成虫总 RNA中扩增出 Sj14- 3- 3基因 ,亚克隆至原核表达载体 p GEX- 4T- 1,并转化 E.coli BL2 1 ,IPTG诱导表达 ,Western- blot鉴定表达产物。 结果 扩增产物约为 76 5 bp,重组质粒经 Bam H 和 Xho 双酶切后可得到一与 PCR产物大小相同的 DNA片段 ,经 IPTG诱导后在 5 5 ku附近出现一新增蛋白条带 ,Western- blot结果显示 ,表达产物可被兔抗鼠 14- 3- 3ε多克隆抗体识别。 结论 在原核细胞融合表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3成功。
- 祖莹李德发沈继龙
- 关键词：血吸虫疫苗SJ14-3-3
- rSj14-3-3和rSj14-3-3/SjGST对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨日本血吸虫信号蛋白 14 - 3- 3基因重组蛋白 (rSj14 - 3- 3)及其与谷胱甘肽S转移酶融合蛋白(rSj14 - 3- 3/SjGST)对宿主肝虫卵肉芽肿形成的影响。 方法 用rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST免疫雌性BALB/c小鼠 ,末次免疫后 5d ,各组小鼠均感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 /鼠 ,6周后 ,剖杀 ,取肝组织计数肝表面虫卵结节密度和肝切片上单个虫卵肉芽肿直径大小。结果 免疫组 (14 - 3- 3组和 14 - 3- 3/GST组 )和对照组肝表面虫卵结节数分别为 6 72±1 14、5 89± 1 0 3和 2 1 0 5± 1 2 6 ,前两者比后者分别减少了 6 8 0 8%和 72 0 2 % ;肝肉芽肿平均直径免疫组为 178 12±32 18μm和 14 8 13± 2 9 6 5 μm ,与对照组 2 75 0 0± 38 2 1μm相比分别减少了 35 2 3%和 4 6 13%。结论 重组抗原rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST对日本血吸虫具有较好的抗病效果。
- 李德发祖莹沈继龙
- 关键词：日本血吸虫虫卵肉芽肿形成谷胱甘肽S转移酶基因重组蛋白
- 信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 。
- 祖莹沈继龙汪学龙李德发
- 关键词：克隆信号传导免疫反应性原核细胞
- 日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14—3—3编码基因重组质粒pET28a一Sj14—3—3的构建和鉴定
- 2001年
- 目的构建日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3编码基因原核表达质粒pET28a-Sj14-3-3,测定Sj14-3-3基因序列,并为中国大陆株Sj14-3-3的体外表达奠定基础。方法采用RT-PCR技术从日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA中扩增出Sj14-3-3基因,扩增产物经纯化后。用BamH I+Xho I双酶切,定向克隆入pET28a质粒,转化大肠杆菌DH5a,再用BamH I+Xho I双酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定,并应用在线软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 PCR扩增产物约为765bp,符合预计大小,并成功地定向克隆到原核表达质粒pET28a,对插入片段的测序结果表明,该序列和推测的氨基酸序列与GenBank收录的日本血吸虫14-3-3基因分别有99.5％和99.2％的同源性。序列分析显示,Sj14-3-3基因序列中可能有抗原表位存在。结论 pET28a-Sj14-3-3重组质粒构建成功,为日本血吸虫5j14-3-3分子疫苗及信号转导研究奠定基础。
- 李德发沈继龙祖莹王维
- 关键词：日本血吸虫SJ14-3-3反转录分子克隆
