罗声栋
- 作品数：22 被引量：18H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学冶金工程更多>>
- 携带肠道病毒71型VPl基因的重组减毒沙门菌的构建和鉴定
- 2011年
- 目的构建和鉴定能够稳定携带肠道病毒71型（EV71）VPl基因的重组减毒伤寒沙门菌，用于口服EV71DNA疫苗的研发。方法利用DNA重组技术，构建表达EV71VPl蛋白的真核表达质粒VR．EV7lVPl，体外转染Vero细胞后检测目的蛋白体外表达和抗原性，并将该质粒电转化至减毒伤寒沙门菌SL7027。结果酶切鉴定证实构建含EV7lVPl基因的重组质粒，体外表达目的蛋白具有较好的抗原性．并获得稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌。结论成功构建稳定携带肠道病毒71型VPl基因的减毒伤寒沙门菌，为下一步的疫苗研究打下了基础。
- 刘泽胡燕沈宏辉蔡少平白冰珂高蓉罗声栋柴燕涛貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属疫苗DNA沙门菌伤寒
- 新型呼肠病毒S1基因的表达鉴定
- 2012年
- 目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白的编码基因S1的重组原核表达质粒，对其在原核细胞内的表达进行研究。方法将S1基因克隆入原核表达载体pProEX HTa，构建重组原核表达载体pPLS，通过IPTG诱导，利用蛋白电泳和蛋白免疫印迹等方法对其在大肠杆菌中的表达进行研究。结果酶切分析表明重组质粒构建成功。SDS-PAGE和Western-blot的检测结果一致表明，诱导后1-5h均可检测到目的蛋白的表达，其中以5h的蛋白表达量最大，且表达的目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在。结论通过构建重组原核表达质粒，可使目的蛋白σ1得到诱导表达，为后续抗体制备及研究病毒一宿主相互作用提供实验基础。
- 白冰珂胡燕侯俊沈宏辉陆日北罗声栋黄维芝柴艳涛貌盼勇
- 关键词：S1基因
- 肠道病毒71型强神经毒分离株VP1蛋白的表达鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的利用大肠杆菌原核表达系统表达肠道病毒71型强神经毒分离株VP1蛋白,为抗体制备和病毒诊断试剂盒的开发奠定基础。方法利用一步法RT-PCR扩增出病毒VP1基因,构建重组原核表达质粒,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达的特异性。结果重组质粒在1 mmol/L的IPTG 37℃诱导6 h后可诱导表达得到约33 KD的蛋白,且表达的蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在。VP1蛋白特异性单抗和His蛋白单抗验证了蛋白表达的特异性。结论获得特异性的EV71病毒河南分离株VP1蛋白,可用于开发病毒诊断试剂盒。
- 胡燕白冰珂沈宏辉侯俊高蓉罗声栋貌盼勇
- 关键词：肠道病毒71型VP1蛋白原核表达
- 青海藏区B型沙眼衣原体的分离培养与鉴定被引量：1
- 2017年
- 【目的】对青海藏区沙眼患者标本进行沙眼衣原体分离培养与鉴定。【方法】分别采集患者的单眼结膜和结膜囊拭子标本至1 mL样本保护培养基中。取50μL样本采用离心法感染BGM细胞,37°C培养72 h,连续传代3次,相差显微镜观察衣原体包涵体。对临床样本和分离株分别进行主要外膜蛋白基因ompA序列分析。【结果】共采集了45例活动性沙眼患者的115份临床样本,其中54份样本为ompA PCR阳性,15份样本为沙眼衣原体培养阳性。ompA分析发现,青海藏区沙眼衣原体有3个不同的同源ompA变异株,均为基因B型,都包含有一个泌尿生殖道型沙眼衣原体特有密码子。分离株QH111L和QH111R分别来自编号111患者的左眼和右眼样本,它们ompA基因的可变区有一个非同义碱基差异。该碱基变异仅存在于111号患者的左眼样本中,说明QH111L可能是新出现的ompA突变体。【结论】青海藏区的眼型沙眼衣原体流行株为基因B型,至少存在3个不同的ompA变异株。从青海藏区分离培养了15株眼型沙眼衣原体,发现同一患者的左右眼样本中的沙眼衣原体有不同ompA。本研究为研制沙眼疫苗和诊断试剂奠定了基础,也将有助于理解沙眼的进化和传播。
- 鲁辛辛冯乐于永慧罗声栋孙志会王涛端青王宁利宋立华
- 关键词：沙眼衣原体沙眼进化OMPA
- 肠道病毒71型（EV71）AH3株感染性克隆的构建与鉴定
- 2014年
- 目的 构建肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71） AH3株的全基因序列感染性克隆.方法 通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建含全病毒基因组序列的重组质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光（IFA）等方法进行鉴定.结果 酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因；其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变；所获得的拯救子代病毒滴度（TCID50）为107.5；IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.结论 成功构建EV71全基因序列感染性克隆,为病毒致病机理及减毒疫苗的研究奠定基础.
- 侯俊李瑞生胡燕罗声栋白冰珂沈宏辉王志杰柴燕涛杨瑞创貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属
- HBsAg和抗HBs双阳性患者S基因新增N-糖基化突变的意义被引量：11
- 2016年
- 目的分析乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg+抗HBs双阳性患者S基因主要亲水区(MHR)新增N-糖基化突变的特点,探讨HBsAg+抗HBs双阳性的发生机制和临床意义。方法对284例HBsAg+抗HBs双阳性和314例HBsAg单阳性的慢性HBV感染者S基因进行测序分析。对1例携有MHR区双N-糖基化新型突变株的慢性乙肝患者样本进行随访收集和研究。构建双N-糖基化突变和对照前S/S基因重组质粒,转染HepG2细胞,分析突变对病毒复制力和抗原性的影响。结果 HBsAg+抗HBs双阳性患者MHR区新增N-糖基化突变的检出率为11.3%(32/284),显著高于HBsAg单阳性患者的2.9%(9/314)(P<0.01)。HBsAg+抗HBs双阳性组中,72例肝细胞癌(HCC)在N-糖基化突变阳性和阴性患者中所占比例分别为46.9%(15/32)和22.6%(57/252)(P<0.01)。从1例患者中检出的新型株突变形式为s116-118TST→NST+s131-133TSM→NST,并联合sP120缺失+G145D突变,在3份随访样本中该突变株分别占98.0%、2.0%和2.5%,第2份样本中检出s130-132GTS→NSS单N-糖基化突变株,占17.6%,但无s P120缺失+G145D联合突变。与野生株相比,新型突变株复制力提高31%,但HBsAg定量降低99%。免疫荧光结果显示,双N-糖基化定点回复突变株可部分恢复HBsAg检出水平,提示除双N-糖基化突变外,sP120缺失+G145D联合突变对HBsAg抗原性减弱也有明显影响。结论 HBV S基因MHR区新增N-糖基化突变与HBsAg+抗HBs双阳性相关,两者同时出现可能是HCC发生的高风险因素;S基因MHR区新增双N-糖基化+sP120缺失+sG145D联合突变共同影响HBsAg的抗原性。
- 卢姗姗李晓东罗声栋乔艳许智慧刘妍李伯安徐东平李进
- 关键词：S基因突变N-糖基化抗原性
- 肠道病毒71型强神经毒分离株VP1蛋白的表达鉴定
- 胡燕白冰珂沈宏辉侯俊高蓉罗声栋貌盼勇
- 文献传递
- 新型呼肠病毒M基因重组真核质粒的构建及免疫效果研究
- 目的：研究新型呼肠病毒M基因在小鼠体内的免疫原性,包括体液免疫和细胞免疫.方法：扩增M1,M2和M3片段,并分别克隆至真核表达载体pcDNA3.1+,构建重组质粒,按照每只100 μg的量免疫小鼠,对照质粒和PBS同时免...
- 胡燕王睿林侯俊罗声栋黄维芝杨锐创白冰珂
- 关键词：DNA疫苗细胞免疫体液免疫
- Q热性心内膜炎1例抗Ⅰ相和Ⅱ相抗原IgG抗体的跟踪监测报道被引量：2
- 2017年
- Q热（query fever,Qfever,不明热）是由贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii,Cb）感染人导致的一种无特征性病症的发热疾病,临床上与流感等不易区分,常被误诊漏诊。Cb为人畜共患的专性胞内寄生菌,在我国分布广泛,禽、畜等动物足其主要宿主和传染源,Cb可引起孕畜流产,造成经济损失。人感染Cb后,除出现类似流感的不明发热症状以外,
- 于永慧王涛罗声栋冯乐孙志会宋立华
- 关键词：Q热贝氏柯克斯体心内膜炎免疫球蛋白G
- 新型呼肠病毒S基因DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性被引量：1
- 2014年
- 目的探讨新型呼肠病毒R4株S片段免疫小鼠后引发的免疫应答。方法构建4个不同S基因节段的重组真核表达质粒,并免疫小鼠;ELISA检测血清以研究R4特异性抗体升高水平,并对其抗体亚型进行鉴定;ELISPOT检测小鼠淋巴细胞INF-γ的表达情况。结果与对照组相比,4个重组质粒免疫的小鼠血清都有明显的R4特异性抗体升高,尤其以S1和S3基因免疫后抗体水平较高,且均以IgG2a占绝对优势;S1基因免疫组小鼠的细胞免疫应答最强。结论 S1基因重组质粒免疫小鼠后可同时引发较强的体液免疫和细胞免疫应答,是较为理想的疫苗备选基因片段。
- 侯俊刘泽谢国明罗声栋李瑞生白冰珂
- 关键词：呼肠病毒DNA疫苗体液免疫细胞免疫小鼠
