胡志伟
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
- 供职机构：湖南医科大学肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大肠癌相关抗原CA-Hb3的提取、亲和层析纯化及其生物学特性被引量：4
- 1998年
- 方法：应用ＴｒｉｔｏｎＸ１００和正丁醇分别提取了大肠癌组织粗提抗原和大肠癌细胞株ＨＲＴ－１８的ＣＢＥ（正丁醇提取物），二者均有抗原活性。抗原经抗大肠癌单抗Ｈｂ３－亲和层析进一步纯化，获得纯大肠癌相关抗原ＣＡ－Ｈｂ３。结果：经鉴定，ＣＡ－Ｈｂ３为糖蛋白，其抗原活性与糖链有关。其分子量随变性程度而异，变性完全（１００℃巯基乙醇作用５ｍｉｎ）时为５０ｋＤ，而变性不完全（１００℃３ｍｉｎ）约２７ｋＤ，故推测该抗原是由两个亚基（约２７ｋＤ）组成的同源二聚体。结论：在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定蛋白质分子量时。
- 胡志伟李小玲周国华朱建高孙去病
- 关键词：大肠肿瘤抗原亲和层析纯化
- 机体本身在肿瘤免疫治疗中的地位被引量：1
- 1996年
- 机体本身在肿瘤免疫治疗中的地位湖南医科大学肿瘤研究所博士生（长沙４１００７８）胡志伟导师孙去病人体抗肿瘤的机制主要是细胞免疫而非体液免疫。因为体液免疫抗肿瘤主要是通过抗体的ＡＤＣＣ（抗体依赖性溶细胞毒作用）和ＣＤＣ（补体依赖性细胞毒作用），其作用有限...
- 胡志伟孙去病
- 关键词：肿瘤免疫疗法机体
- 大肠癌相关抗原体外致敏法构建人源抗体库被引量：5
- 1997年
- 建立杂交瘤单抗亲和层析纯化抗原、抗原体外致敏淋巴细胞和RT-PCR克隆人抗体基因及噬菌体呈现技术构建人源抗体库的策略.将亲和层析纯化的大肠癌相关抗原CA-Hb3经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定后,与IL-2和丝裂原于体外致敏10个大肠癌病人各10ml外周血淋巴细胞(PBL),出现淋巴母细胞化和集落形成现象,提取总RNA并纯化mRNA,经RT-PCR扩增3种VH-CHI(γ)基因和5种VL-CL(κλ)基因,再经PCR克隆3种VH(γ)和8种VL(κλ)基因.通过(Gly_4Ser)_3相应的寡核苷酸连接序列将VH和VL基因不同组合连成24种单链抗体(ScFv)基因,经 SfiI酶切,将之克隆入fUSE 5RF,用电穿孔法将此表达载体转化MC1061,四环素抗性筛选得到10~6库容的初级抗体库,ScFv基因插入百分率为85%.该策略将可能普遍用于鼠源单抗人源化.
- 胡志伟孙去病
- 关键词：抗原肿瘤大肠肿瘤
- 全套抗体库被引量：1
- 1996年
- 基因工程抗体被称为第三代抗体，其中全套抗体库（亦称为噬菌体抗体库）又较另两种某因工程抗体（嵌合抗体、改形抗体）优越，可实现单抗的人源化、小型化和多功能化，而且理论上若构建一个足够大容量的全套抗体库，便可从中筛选抗任何抗原的单克隆抗体。从而克服了杂交瘤单抗用于体内的局限性，将来可能代替杂交瘤单抗技术并可用于体内诊断和治疗人类疾病，本义就抗体库构建流程及其进展作一综述。
- 胡志伟孙去病
- 关键词：噬菌体抗体库基因扩增单克隆抗体
- T_H1,T_H2细胞交叉调节与肿瘤免疫被引量：8
- 1997年
- T辅助细胞具有两种功能截然不同的亚群，即TH1和TH2细胞，其中TH1细胞负责细胞免疫，辅助Ⅰg亚类转换为ⅠgG2；TH2细胞负责体液免疫，辅助Ⅰg转换为ⅠgG，ⅠgE和ⅠgA。但是TH1与TH2细胞存在交叉调节的关系，在一定条件下二者可以互相转换。涉及互相转换的因素可能包含免疫识别过程中的诸多因素，诸如抗原种类剂量、局部细胞因子种类、APC细胞类型和动物品系、MHCⅡ类分子、粘附分子和激素等。正是这些因素引起的、TH1和TH2细胞交叉调节，使得正常机体免疫系统处于动态平衡，经常出现所谓克隆转换现象即细胞免疫增强时体液免疫降低，反之亦然，这种现象可能用于肿瘤免疫治疗及其他免疫性疾病的治疗。因为TH1细胞甚至包括TH2细胞均有抗肿瘤作用。
- 胡志伟
- 关键词：TH细胞肿瘤免疫细胞因子
- 构建人源抗体库并亲和性筛选抗大肠癌单链抗体
- 目的以体外致敏法和噬菌体呈现技术将我室制备的有临床应用前景的抗大肠癌单抗Hb3 人源化和小型化。方法以噬菌体呈现技术构建人源全套抗体库,用亲和性筛选人源抗大肠癌单链抗体。结果分别用CaCl法和电穿孔法将带有全套单链抗体(...
- 胡志伟朱建高周国华陈世民胡锦跃段招军孙去病孙颖
- 文献传递
- 全人源化抗结肠癌单链抗体基因的克隆和表达被引量：6
- 2001年
- 分离大肠癌患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,在体外用灭活的大肠癌细胞再次致敏后 ,经EBV转化 ,然后用有限稀释法克隆分泌抗大肠癌细胞抗体的B细胞 ;多次PCR扩增和克隆其抗体可变区基因 (VH VLcDNA) ,并用编码 (Gly4Ser) 3 的互补序列连接成ScFvcDNA(VH linker VL) ,经酶切克隆入载体fUSE 5RF ,使之呈现于噬菌体表面。通过用 3轮肿瘤细胞和正常人PBMC淘选后 ,ELISA检测 80 %的单克隆噬菌体抗体显示了很强的阳性反应。以上结果初步说明 :联合应用体外致敏、EBV转化。
- 朱建高李官成李跃辉胡锦跃周国华胡志伟孙去病李小玲
- 关键词：噬菌体呈现聚合酶链反应
- 从人源单链抗体库中筛出具有抗原结合活性的重链可变区和更小抗体片段被引量：6
- 1999年
- 目的：用噬菌体呈现技术结合体外致敏法构建了人源单链抗体库，并用大肠癌相关抗原ＣＡＨｂ３筛选出抗大肠癌噬菌体抗体克隆ＥＬ５Ｄ、ＥＬ６Ｄ和Ｃａ１２，测定３个克隆的核苷酸序列，并研究其免疫活性。方法：采用抗体克隆扩增、测序分析、免疫组化法测定活性。结果：抗体基因插入片段分别为２２０、５００、５００ｂｐ。测序结果表明，ＥＬ６Ｄ和Ｃａ１２属ＶＨ５ＤＪＨ４，仅为ＶＨ结构亚单位，而ＥＬ５Ｄ属Ｖκ的Ｊκ１，仅为ＦＲ３ＣＤＲ３ＦＲ４结构。三者均能与人结直肠癌细胞和组织反应，与其亲本鼠源单抗Ｈｂ３的结合特性一致。３个抗体克隆已列入国际基因库，序号为ＡＦ０５１１６５ＡＦ０５１１６７。结论：短的人源抗体片段具有潜在临床应用价值。
- 胡志伟段招军朱建高周国华胡锦跃孙去病
- 关键词：免疫球蛋白基因单链抗体库
- 从肿瘤病人少量外周血淋巴细胞克隆抗体基因被引量：1
- 1997年
- 建立杂交瘤单抗亲和层析纯化抗原、体外抗原致敏淋巴细胞和RT PCR克隆人抗体基因的技术 .将亲和层析纯化的大肠癌相关抗原CA Hb3经SDS PAGE和免疫印迹鉴定后 ,与IL 2和丝裂原于体外致敏大肠癌病人 1 0ml外周血淋巴细胞 (PBL) ,出现淋巴母细胞化和集落形成现象 .致敏PBL的总RNA比未致敏PBL的量增加了 2 5倍 .致敏后RT PCR扩增的人抗体VH CH1 (IgG)和VL CL(κ)基因的量比未致敏者多 1 3倍 .该技术可将鼠源杂交瘤单抗人源化 .
- 胡志伟李小玲蔡小红朱建高周国华孙去病
- 关键词：肿瘤抗体基因基因克隆外周血淋巴细胞
