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芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达被引量：9: 1994年; 从杭州郊区感病的甘蓝型油菜上分离到一种致病力较强的芜菁花叶病毒（Ｔｕｒｎｉｐｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＴｕＭＶ）分离物。大量提取病毒并纯化后，电镜观察病毒粒子约７４０ｎｍ×１２ｎｍ。以寡聚（ｄＴ）１５为引物合成ｃＤＮＡ，并根据外壳蛋白（ＣＰ）基因两端序列设计两个诱变引物进行ＰＣＲ扩增，得到一个特异性ＤＮＡ片段。将该片段克隆到ｐＵＣ１８中，经Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序，结果表明该ＣＰ基因全长为８６７ｂｐ。与前人报道的两种芜青花叶病毒ＣＰ基因的核苷酸序列的同源性分别为８９．５％和９６．７％。，氨基酸序列的同源性分别为９４．５％和９７．９％。将ＣＰ基因亚克隆到原核表达载体ｐＫＫ２３３－２中，用ＩＰＴＧ诱导含插入片段表达载体的大肠杆菌，Ｗｅｓｔｅｍ印迹检测证明，大肠杆菌能表达病毒的ＣＰ。; 徐平许建平薛朝阳陈集双张耀洲李德葆; 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白基因

枯草杆菌B826的化学诱变及筛选研究被引量：8: 1998年; 枯草杆菌Ｂ８２６（ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢ８２６）是一株对水稻白叶枯病菌有强烈拮抗作用的细菌．本研究测定了枯草杆菌Ｂ８２６的对数生长曲线并利用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）处理对数生长期的细胞，获得了１６０个存活的菌株，其中６个菌仍保留拮抗活性或拮抗活性有所提高，其余的均丧失拮抗活性．突变菌Ｎｏ．３５能稳定地保持高效的拮抗活性和遗传．; 许建平管江志陈卫良龚鸿飞李德葆; 关键词：枯草杆菌诱变拮抗白叶枯病菌

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析被引量：39: 1998年; 利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增，以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选，应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％，而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％；其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段，在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段，而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．; 郑经武许建平吴玉良李德葆; 关键词：松材线虫拟松材线虫 RAPD标记

芜菁花叶病毒杭州分离株外壳蛋白基因序列分析被引量：5: 1994年; 从杭州郊区分离出一个ＴｕＭＶ强毒株系，利用分子克隆和Ｓａｎｇｅｒ双脱氢测序方法分析了其外壳蛋白基因的ＤＮＡ序列．该序列与已报道的其他４种ＴｕＭＶ分离物都具有较高的同源性，最高达９７．６％，最低达８９．５％，其氨基酸序列的同源性更高，最高达９７．９％，最低达９４．５％。本文分析了该序列中ＡＴ和ＧＣ含量，计算了４种核苷酸在有意义链中和在密码子不同位置上的出现频率，同时还分析了该病毒外壳蛋白氨基酸遗传密码的使用频率。; 徐平许建平薛朝阳李德葆; 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白

松材线虫的PCR快速诊断研究被引量：12: 1998年; 松材线虫的ＰＣＲ快速诊断研究①许建平１郑经武１王建伟２龚鸿飞１李德葆１（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２杭州动植物检疫局，杭州３１００２１ＰＣＲＡｓａｙｔｏＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ...; 许建平郑经武王建伟龚鸿飞李德葆; 关键词：松材线虫聚合酶链反应林木检疫

采用西瓜汁蔗糖琼脂培养基有效筛选西瓜枯萎病菌拮抗细菌被引量：4: 1997年; 用１１种培养基，即ＣＭＡ，ＴＳＡ，ＰＤＡ，ＰＳＡ，ＮＡ，ＫＭＢ，ＷＳＡ，ＷＡ，ＯＭＡ，ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ，在培养皿平板上，２８℃培养下，测定它们对西瓜枯萎病菌拮抗细菌筛选能力。由西瓜皮提取汁，蔗糖，溴麝香草酚蓝和琼脂配制成的ＷＳＡ培养基在４ｄ内可清晰地分辨出拮抗细菌，ＴＳＡ培养基广泛地用于测定来自作物根部对根部病原真菌具有拮抗作用的拮抗细菌，但与ＷＳＡ培养基比较，在其上细菌和真菌生长较弱，较不明显，因而只能较低水平地检测出拮抗细菌。在ＣＭＡ和ＷＡ培养基上，细菌生长最慢，有些种类的细菌甚至在ＷＡ培养基上不能生长。在ＰＤＡ，ＰＳＡ和ＯＭＡ培养基上ＦＯＮ菌落生长很快，因而不能检出抑制区域，而在ＮＡ、ＰＤＡ和ＫＭＢ培养基上某些细菌菌落生长很快，甚至与ＦＯＮ菌落相重叠，故不能出现抑菌圈，在ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ上ＦＯＮ和某些细菌生长相对较慢。; 林福呈陈卫良许建平龚鸿飞葛起新李德葆; 关键词：西瓜枯萎病菌拮抗细菌培养基

拮抗细菌Bacillus subtilis A30对水稻病原菌的抑制作用被引量：29: 1997年; 由杭州郊区水稻叶围分离得到ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡ３０菌株，平板检测表明它对Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ和Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ等多种水稻病原真菌、病原细菌均有很好的拮抗作用．以水稻白叶枯病、水稻纹枯病为代表进行小区试验，结果表明，Ａ３０菌株的防病效果分别为５８．１％和３９．０％．Ａ３０菌株的培养去菌液经７０％饱和度（ＮＨ４）２ＳＯ４处理，拮抗物可被（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，其拮抗粗提液经Ｄｉｏｌ１５０及ｐｒｏＲＰＣＨＲ５／１０等色谱柱分离得到两种对Ｘ．ｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ的拮抗峰和两种对Ｒ．ｓｏｌａｎｉ的拮抗峰．; 陈卫良龚鸿飞林福呈许建平李德葆; 关键词：拮抗作用拮抗物质病原菌

新型抗生素类杀虫药物阿弗米丁研究与应用概况被引量：8: 1996年; 新型抗生素类杀虫药物阿弗米丁研究与应用概况许建平，李德葆，吕忠平（浙江农业大学生物技术研究所３１００２９）（德清拜克生物有限公司）新型的抗生素类杀虫驱虫药物阿弗米了不仅适用于杀灭农业的主要有害昆虫、螨类、线虫，还适用于牲畜的寄生虫病防治。它的衍生物伊...; 许建平李德葆吕忠平; 关键词：杀虫药

侵染花椰菜的芜菁花叶病毒及RT-PCR扩增外壳蛋白基因研究被引量：6: 1998年; 从杭州市郊区及本校附近菜园地表现严重花叶症状的花椰菜上分离到一种线状病毒，接种６科３１种鉴别寄主，能侵染５科２２种植物。病组织超薄切片可见风轮状内含体和片层聚集状内含体。感病的芥菜叶片，用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液（ｐＨ７．５）匀浆后汁液加４％ＰＥＧ－８０００沉淀３ｈ，５％～４０％甘油梯度离心纯化病毒，可获得较高的产量。提纯的病毒均为一弯曲的线状颗粒，长度７４０ｎｍ左右。病毒提纯液于２６４ｎｍ处有一吸收峰，为典型的核蛋白紫外吸收。ＴｕＭＶ－Ｈ分离株抗血清包被的铜网能大量吸附病毒颗粒。用特异的ＰＣＲ引物扩增其外壳蛋白基因，可得－０．９Ｋｂ的片段。; 许建平李德葆; 关键词：芜菁花叶病毒花椰菜外壳蛋白基因

芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2: 1994年; 本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。; 许建平徐平陈集双李德葆; 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白基因表达

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许建平

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