费云标 作品数:23 被引量:346 H指数:12 供职机构: 中国科学院遗传与发育生物学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 美国洛克菲勒基金 中国科学院科研项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 理学 医药卫生 更多>>
沙冬青高活性抗冻蛋白的发现 被引量:89 1994年 The authors have isolated and partial purified antifreeze protein antifreeze protein (AFP) produced endogenously in Ammopiptanthus mongolicus.The results show that the partial purified AFP ranged in size including 45 7 kD, 81 2 kD, and so on.At 50 mg/ml protein concentration, the temperature of melting point is -15℃, and its freezing point is even lower.Therefore, the AFP activity exhibited by the Ammopiptanthus mongolicus is higher than that observed for AFP found in polar fishes or in winter rye.In addition, by a phase contrast light photomicroscope, the author have observed the morphology of individual ice crystals formed in the solution, including squares, rectangles, cones, hexagons.The morphology of these ice crystals are similar to those of ice crystals observed in polar fishes and in cold acclimation winter rye. 费云标 孙龙华 黄涛 舒念红 高素琴 简令成关键词:抗冻蛋白 豆科 淡水瓦氏雅罗鱼基因文库的构建和抗冻蛋白基因同源序列的筛选 被引量:3 1996年 极地海域中的鱼类非常耐寒。它们的血液里常含有两种能降低其体内冰点的蛋白质:抗冻糖蛋白(AFGP)和不含糖的抗冻蛋白或抗冻多肽(AFP)。这些蛋白的编码基因已经被克隆,并将黄盖鲽AFP导入虹鳟鱼和大西洋鲑鱼,而改变了它们的抗冻性能。为开展中国的抗冻转基因鱼研究,本项目对中国北方的耐寒淡水鱼的抗冻基因进行了分离研究。所用实验材料鱼为中国内蒙古北部生活的瓦氏雅罗鱼(Leuciscuswaleckii),属鲤形目(Lypciniformes),鲤科(Lyprinidae),雅罗鱼亚科(Leucisinae)。基本按标准方法构建瓦氏雅罗鱼的基因文库,只在包装反应至30分钟时,再加一份BHB2690制备物,并延长30分钟反应时间。所得文库的成斑率大于1×105pfu。已知AFP基因常常多至40个拷贝,故已够用。采用通用的原位分子杂交和Southern分析进行瓦氏雅罗鱼AFP基因同源序列的分离及其亚克隆分析。以北美黄盖鲽AFP基因片段为探针,从瓦氏雅罗鱼DNA文库中筛选了三个阳性克隆。图一所示为其中一个的双份膜及其复筛结果。图二为这个阳性克隆DNA经过三种限制酶切后,同时与北美黄盖鲽AFP基因片段和该基因0.4KbcDN? 费云标 于建康 陈良标 王亚平 王为先 毛钟荣 严绍颐 靳光琴关键词:淡水鱼 瓦氏雅罗鱼 基因文库 抗冻蛋白基因 同源序列 分离和鉴定沙冬青抗冻蛋白质(英文) 被引量:25 1999年 采用经典的蛋白质色谱技术,纯化沙冬青( Ammopiptanthus mongolicus (Maxim .) Chengf.) 叶片中的抗冻蛋白质,然后经非变性PAGE胶分离、回收,得到具有热滞活性的两条带:B1 和B3。前者在8 g/L时热滞活性为0.46 ℃,并在SDS_PAGE胶上分离出两条带( 分子量为67 kD和21 kD) ;后者在10 g/L时热滞活性为0.45 ℃,在SDS_PAGE胶上只有1 条带( 分子量为39.8 kD)。B1 和B3 均不能被Shiff 试剂染色,也不具有典型糖蛋白的紫外吸收特征。 江勇 魏令波 费云标 舒念红 高素琴关键词:沙冬青 抗冻蛋白 色谱 抗冻蛋白及其在植物抗冻生理中的作用 被引量:98 1999年 抗冻蛋白(antifrezeproteins,AFPs)是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能以非依数性形式降低水溶液的冰点,但对熔点影响甚微,从而导致水溶液的熔点和冰点之间出现差值。这种差值称为热滞活性(thermalhysteresisactivity,... 江勇 贾士荣 费云标 费云标关键词:抗冻蛋白 热滞活性 aroAIn融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化 被引量:5 2004年 PCR扩增突变的 5′ 烯醇丙酮酸莽草酸 3 磷酸合成酶 (5′ enolpyruvylshikimate 3 phosphatesynthetase ,EPSPS)cDNA全长序列 ,插入 pLitmus2 8得到 pLEPSPS ,进而通过反向PCR在EPSPS 2 35 /2 36aa之间将其打断为无功能的片段。选用人工构建的具有顺式和反式剪接功能的mini型蛋白内含子SspDnaB和RmaDnaB ,插入被打断的aroA(抗除草剂基因 ) ,构建了质粒 pLEBC、pLEBT、pLERC和 pLERT。将 4种重组质粒中的aroA In(蛋白内含子Intein插入aroA)融合基因插入 pET 32得到表达载体 pETLEBC、pETLEBT、pETLERC和 pETLERT ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE分析显示其能在DE3 中有效表达并发生相应的蛋白剪接。将aroA cisSspDnaB和aroA cisRmaDnaB融合基因分别插入 pLYM中进一步构建成植物表达载体 ,农杆菌叶盘法转化烟草。基因组PCR分析表明融合基因整合入植物核基因组 ;RT PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达。结果说明蛋白内含子基因可以转化高等真核细胞 ,蛋白剪接技术可应用于高等植物细胞 。 赵瑾 高素琴 费云标 魏令波关键词:EPSPS 转基因 烟草 热激蛋白的分子生物学研究进展 被引量:17 1995年 热激蛋白的分子生物学研究进展费云标,黄涛,舒念红,江勇(中国科学院发育生物研究所,北京100080)ADVANCESOFMOLECULARBIOLOGYONHEATSHOCKPROTEINS¥FeiYun-biao;HuangTao;ShuNian-... 费云标 黄涛 舒念红 江勇关键词:热激蛋白 分子生物学 基因表达 植物寒冻损伤与抗性的细胞化学及生物化学 被引量:32 1994年 植物寒冻损伤与抗性的细胞化学及生物化学费云标,舒念红,黄涛,赵淑慧(中国科学院发育生物学研究所)植物的抗寒冻性随季节和发育有明显不同,某些硬木和灌木在冬季-196℃深冻仍可存活,而春天-3℃就被冻死。有的苹果树组织也可冷冻到-60℃还能存活,某些适盐... 费云标 舒念红 黄涛 赵淑慧关键词:植物 抗冻性 细胞化学 生物化学 高活性植物抗冻蛋白及其分离技术 从抗寒植物分离的高活性植物抗冻蛋白及分离技术的特征是抗寒植物经匀浆、硫酸铵沉淀,DE-52离子交换柱和SephadexG100分离的抗冻蛋白,在30mg/ml浓度下,融点为-10℃~-14℃,再经灌注层析分离可得更高活性... 费云标 孙龙华 黄涛 舒念红 高素琴 赵淑慧 简令成文献传递 昆虫抗冻蛋白的研究进展 被引量:34 2000年 热滞效应(ThermHysteresisAction)最早在昆虫研究中发现,后来研究表明,它是抗冻蛋白(AntifreezeProteins,AFPs)的一种基本性质。和鱼类,植物AFPs相比,昆虫AFPs具有更高的热滞活性和独特的化学结构特征。昆虫AFPs在昆虫抗冻生理过程中起着相当重要的作用,表现在以下三个方面:①抑制一些冰晶形成;②提高冰冻耐受性;③可能参与水分平衡过程。光周期,气温和湿度是调控AFPs生物合成与降解的三种外部因子,而体内激素的变化可能是直接调节脂肪体合成AFPs的内部因子。 费云标 江勇 赵淑慧关键词:昆虫 抗冻蛋白 化学结构 全文增补中 植物抗寒冻的分子遗传与基因工程 被引量:19 1996年 植物抗寒冻的分子遗传与基因工程费云标,黄涛,舒念红,赵淑慧(中国科学院发育生物学研究所)植物抗寒冻的遗传学研究表明,小麦的21对染色体中至少有10对染色体关系到寒冻抗性,在染色体5A和D,携带着影响小麦抗性的许多基因(Guy1990)。寒冻抗性的70... 费云标 黄涛 舒念红 赵淑慧关键词:作物 抗寒性 分子遗传 基因工程 农业生物工程