郭慧利
- 作品数：11 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
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- 猪单精注射胚与孤雌胚激活后的发育被引量：1
- 2009年
- 用猪的冷冻精液,以不同的激活方法进行猪单精注射(ICSI)胚胎的生产。结果表明,联合应用电激活和化学激活所获ICSI胚卵裂率(79.28%)明显高于单纯电激活组卵裂率(58.77%),但两组桑囊胚发育率无统计学差异(31.58%对22.67%),电化学联合激活较单纯的电激活更有利于ICSI胚胎的发育。通过比较孤雌电激活胚与ICSI胚胎的发育情况,发现孤雌激活胚与ICSI胚在卵裂率、桑囊胚发育率上均无显著差异,表明现有实验电激活参数完全适用于猪ICSI胚胎的体外生产。
- 周冬梅李宁剧世强林鹏飞郭慧利郝元斌芮荣
- 关键词：孤雌激活卵裂率
- 猪体细胞克隆胚胎体外发育过程中的凋亡规律被引量：1
- 2010年
- 本试验旨在研究比较猪体细胞克隆胚胎体外发育与凋亡变化规律,探讨其体外发育潜能与细胞凋亡间的关系。将体外成熟培养获得的猪MⅡ期卵母细胞随机分为2组,分别进行体细胞核移植(SNCT)与体外受精(IVF)处理,采用彗星试验(Comet assay)和Real-time RT-PCR技术对体外发育过程中各时期胚胎的细胞凋亡事件及抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达水平进行研究。结果表明,两组在卵裂率上无显著差异(77.6%vs 80.3%,P>0.05),在囊胚发育率上,SCNT组胚胎明显低于IVF组,但无统计学差异(18.9%vs 24.5%,P>0.05);随着胚胎发育,SCNT与IVF组胚胎的凋亡率均呈现不断增加的趋势,Bcl-2 mRNA表达量则逐渐下降;到16-细胞以后,SCNT组胚胎的凋亡率均显著高于IVF组,同时Bcl-2 mRNA表达量均显著低于IVF组(P<0.05)。本试验结果表明,猪克隆胚胎生产效率低下可能与胚胎发育过程中的细胞凋亡有关。
- 剧世强郭慧利王利勤林鹏飞卢庆芮荣
- 关键词：体细胞核移植发育凋亡基因表达
- 猪体细胞克隆胚胎的体外生产试验被引量：6
- 2009年
- 【目的】通过优化猪体细胞核移植程序,建立获得克隆囊胚的有效方法。【方法】比较不同电激活参数、不同体外培养条件对猪体细胞克隆胚发育能力的影响。【结果】选用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合,对猪核移植重构胚进行电融合和电激活,可获得较高的卵裂率和最高的囊胚发育率(分别为71.4%和14.3%),且囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05);0.4%BSANCSU23培养液培养克隆重构胚72h,半量换液并未改善克隆胚的发育,但添加10%FBS可显著提高囊胚发育率(15.1%对10.3%,P<0.05)和DNA完整率(56.8%对46.6%,P<0.05);采用猪卵泡颗粒细胞(pGC)共培养体系未能显著提高克隆胚发育率(P>0.05),但卵丘细胞(pCC)单层共培养时,囊胚发育率显著高于对照组(16.7%对9.8%,P<0.05),培养5d的克隆胚凋亡率也显著低于对照组(39.5%对54.2%,P<0.05)。【结论】采用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合对猪克隆重构胚进行电融合和电激活,以0.4%BSANCSU23培养液作pCC单层共培养72h,然后换用10%FBSNCSU23培养液,可明显提高囊胚发育率。
- 剧世强芮荣卢庆曹爱巧李宁林鹏飞郭慧利
- 关键词：体细胞核移植重构胚发育
- 猪体细胞克隆胚胎体外发育过程中的凋亡规律
- 目的：本试验旨在研究比较猪体细胞克隆胚胎体外发育与凋亡变化规律，探讨其体外发育潜能与细胞凋亡间的关系。
方法：将体外成熟培养获得的猪MⅡ期卵母细胞随机分为2组，分别进行体细胞核移植(SNCT)与体外受精(IVF...
- 剧世强郭慧利王利勤林鹏飞卢庆芮荣
- 关键词：体细胞核移植胚胎发育基因表达
- 小鼠-猪种间体细胞克隆试验被引量：1
- 2010年
- 用3代~5代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)作核供体细胞,体外成熟培养44 h^46 h、排出第1极体(PbI)的猪卵母细胞去核后,进行小鼠-猪种间核移植操作。Hoechst 33342染色检查去核效果,去核率为84.2%(27/32)。共培养68枚小鼠-猪种间核移植重构胚,其中48枚发生卵裂,卵裂率为70.6%,13枚胚胎发育至8-细胞,发育率达27.1%(13/48)。
- 王利勤郭慧利芮荣
- 关键词：小鼠胎儿成纤维细胞卵母细胞
- 猪卵母细胞第1极体与核相对位置变化对去核率的影响被引量：1
- 2010年
- 为探讨猪受体卵母细胞体外成熟过程中第1极体(pbⅠ)与细胞核相对位置的动态变化规律及其对去核效率的影响,准确判定受体卵母细胞去核"窗口期"提供试验依据。将体外采集的GV(Germinal vesicle)期卵母细胞随机分为3组,分别成熟培养42～44 h、44～46 h、46～48 h,并采用Hoechst33342荧光染色法对成熟过程中pbⅠ与细胞核相对位置进行检测判定。结果显示,随着体外成熟时间的延长,卵母细胞的成熟率呈逐渐增加的趋势,但pbⅠ与细胞核的位置发生偏离的比率逐渐增加,而去核率则表现为逐渐降低的趋势,pbⅠ偏离率与去核率之间呈现一定程度的负相关;体外成熟44～46 h,既能获得较高的卵母细胞成熟率(80.2%),又可以保证理想的去核率(81.2%)。说明延长体外成熟时间所造成的去核率显著降低与pbⅠ发生偏离有关,体外成熟44～46 h是该试验条件下猪受体卵母细胞去核的最佳"窗口期"。
- 剧世强郭慧利林鹏飞王利勤芮荣
- 关键词：体细胞核移植去核
- 猪卵泡闭锁过程中颗粒细胞凋亡和Fas/FasL变化被引量：3
- 2010年
- 为了揭示猪卵巢卵泡选择性闭锁机制,采用Real time PCR和HE染色方法,检测猪各阶段卵泡颗粒细胞中Fas和FasLmRNA表达和形态学变化;分析比较不同发育阶段卵泡中颗粒细胞Fas和FasLmRNA表达差异及细胞凋亡程度。结果表明,健康的大(>5 mm)、中(3～5 mm)、小(<3 mm)卵泡,早期闭锁的大、中、小卵泡以及晚期闭锁的大、中、小卵泡壁层颗粒细胞都有Fas和FasLmRNA表达。早期闭锁卵泡颗粒细胞Fas和FasLmRNA相对表达量高于健康卵泡与晚期闭锁卵泡。早期闭锁小卵泡FasLmRNA相对表达量与大、中、小健康卵泡相比均有显著差异(P<0.05);状态相同的大、中、小卵泡间Fas与FasLmRNA相对表达量均无显著差异(P>0.05);表明Fas/FasL系统在猪卵巢卵泡选择性闭锁过程中,对颗粒细胞凋亡具有重要的调节作用。
- 张羽林鹏飞郝元斌郭慧利芮荣
- 关键词：颗粒细胞凋亡FAS/FASL
- 猪分离卵泡体外培养过程中Fas/FasL对颗粒细胞凋亡的作用被引量：9
- 2010年
- 从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为3类:健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色,形态学研究表明,眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92%。取健康卵泡按直径大小分为3组:直径>5mm大卵泡组、3～5mm中卵泡组和<3mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24h,以Annexin-VFITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率(早期凋亡+晚期凋亡)在8h时就已达到70%以上,至24h则为81.1%～94.6%。收集无血清培养0、8、16、24、48和72h的卵泡颗粒细胞,用realtimePCRSYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和FasmRNA相对表达量。各级卵泡颗粒细胞中FasLmRNA水平随培养时间显著增加,培养至24h达最大值(P<0.05);小卵泡颗粒细胞FasLmRNA水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞FasmRNA相对表达量在培养前(0h)差异不显著,8h时显著增加,48h达最大值。该实验表明,所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡,细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异,小卵泡似乎更容易发生闭锁。
- 林鹏飞郝元斌郭慧利刘红林芮荣
- 关键词：有腔卵泡颗粒细胞凋亡FAS/FASL
- 猪体细胞克隆胚胎的体外生产
- 本实验通过优化猪体细胞核移植程序，旨在建立获得克隆囊胚的有效方法。通过对不同电激活参数的比较研究，表明选用1.5 kv/cm、80 μs和1 DC的参数组合，对猪核移植重构胚进行电融合和电激活，可获得最高的卵裂率(70....
- 剧世强芮荣卢庆曹爱巧李宁林鹏飞郭慧利
- 关键词：体细胞核移植克隆胚胎猪体细胞
- 文献传递
- 5-氮杂胞苷对猪克隆胚胎体外生产的影响
- 尽管体细胞核移植（SCNT）技术已在多种动物上获得克隆后代，但克隆技术仍存在许多问题，有待进一步研究完善。DNA甲基化是哺乳动物表观遗传修饰基因调控表达的主要形式之一，供体核去甲基化不彻底或克隆胚胎过早发生重新甲基化，有...
- 郭慧利
- 关键词：5-氮杂胞苷体细胞核移植克隆胚胎体外生产
- 文献传递
