马晨芸 作品数:21 被引量:158 H指数:8 供职机构: 上海中医药大学 更多>> 发文基金: 浦东新区卫生系统优秀青年医学人才培养计划 浦东新区科技发展基金 上海市浦东新区科技发展基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
自建两轮PCR法对低载量HBV DNA S区基因的扩增及实验条件优化 被引量:2 2021年 目的探究低载量HBV DNA S区基因扩增的可行性并对实验条件进行优化,为隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV DNA S区基因突变检测提供依据。方法采用传统巢式PCR和自建两轮PCR方法扩增6例低HBV DNA载量(100~200 IU/mL)和22例更低HBV DNA载量(20~99 IU/mL)的血清样本中HBV DNA S区基因,并对引物序列、引物量、PCR产物模板稀释倍数、退火温度、PCR反应循环数、PCR总反应体系等条件进行优化。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,切割目的条带凝胶进行克隆测序,然后对克隆测序结果进行核酸序列BLAST比对确认。结果设计3对巢式PCR引物(P1~P3),扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因。经过PCR扩增条件优化后,6例低HBV DNA载量的血清样本中仅2例经巢式PCR扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,22例更低HBV DNA载量样本无一例扩增成功。自建两轮PCR法设计了P4~P15共12对引物,扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因。经过PCR扩增条件优化并筛选出P13为最佳引物后,6例低HBV DNA载量的血清样本全部扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列;15例(15/22,68.18%)更低HBV DNA载量的样本扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,经PCR产物克隆测序均证实为HBV DNA S区基因,该15例样本中HBV DNA载量最低为20.1 IU/mL。结论基于引物P13自建的两轮PCR法更适用于低载量HBV DNA S区基因的扩增,扩增效率和特异性均优于传统巢式PCR;扩增产物可进一步应用于OBI者HBV DNA S区基因序列突变分析。 何成山 蒋秀娣 徐正 马晨芸 姚晓阳 陆志成关键词:乙型肝炎病毒 聚合酶链反应 测序 化学发光免疫分析法检测HBcAb阳性、HBsAg阴性血清中隐匿性乙型肝炎病毒感染的分析 被引量:52 2019年 目的分析化学发光免疫分析法(CIA)检测乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)阳性、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性血清学模式中隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的情况,旨在了解CIA检测HBsAg的分析性能,并为评价OBI提供实验室依据。方法收集2017年5月至2017年12月本院检验科近20000份CIA检测乙型肝炎病毒(HBV)五项血清学标志物中HBsAg无反应性、HBcAb阳性且信号值比临界信号值(S/Co值)>7.5的样本1157例,对样本HBcAb再进行酶联免疫吸附试验(ELISA)复筛,选取A450nm吸光值<0.070样本294例进行HBV DNA检测。结果 1157例样本进行HBcAb ELISA检测,复筛得HBcAb阳性标本1053例,阴性104例,其中A450nm吸光值<0.070样本294例。294例样本进行HBV DNA检测,其中HBV DNA阳性(HBV DNA>20IU/mL为阳性)34例,总阳性率为2.94%(34/1157)。22例HBV DNA载量21~99IU/mL;7例为100~1000IU/mL;5例为> 1000IU/mL;主要以低水平形式存在。以HBeAb、HBcAb阳性及HBsAb、HBeAb和HBcAb阳性这两种血清学模式中HBV DNA检出率较高;HBcAb S/Co≥10.0样本HBV DNA阳性率可达13. 5%。结论 CIA作为检测HBsAg灵敏度较高的方法 ,依然存在HBsAg阴性而HBV DNA阳性的OBI。这对于输血的安全性和乙肝的预防监测及治疗都存在重大影响。临床上对于HBsAg阴性伴高反应性HBcAb(S/Co值≥10.0)的患者应进行一步行HBV DNA检测,以明确OBI的存在。 何成山 马晨芸 陆志成关键词:隐匿性乙型肝炎病毒感染 化学发光免疫分析法 乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒核心抗体 外周血T淋巴细胞亚群和慢性丙型肝炎患者HCV复制程度关系的研究 被引量:4 2015年 目的分析外周血T淋巴细胞亚群和慢性丙型病毒性肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制程度的关系。方法选取上海市第七人民医院收治的CHC患者65例和健康体检者20名,流式细胞仪检测外周血中的T细胞亚群,荧光定量PCR法检测患者血清HCV RNA复制程度。结果 CD3+T细胞亚群在两组人群中分布相比,差异无统计学意义(P>0.05);CD4+T细胞亚群在CHC患者中分布明显低于健康体检者(P<0.05),而CD8+T细胞亚群在CHC患者中分布明显高于健康体检者(P<0.05)。CD3+T细胞亚群百分率与HCV复制程度无明显相关性(P>0.05);CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群百分率和CD4+/CD8+比值与HCV复制程度有明显相关性(P<0.05)。结论 CHC患者外周血T淋巴细胞亚群比例改变与导致HCV感染慢性化密切相关。HCV RNA复制程度增加进一步导致T细胞亚群紊乱,CD4+/CD8+比值的动态变化可提示HCV感染者细胞免疫功能的变化。 马晨芸 王克翔关键词:丙型肝炎病毒 T淋巴细胞亚群 RNA 抗氨甲酰化蛋白抗体检测对类风湿关节炎诊治的临床价值 被引量:8 2018年 类风湿关节炎(RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病,患者体内会出现多种自身抗体,通过自身抗体的检测,可用于疾病的诊治。目前已用于临床诊断的抗体主要有抗环瓜氨酸抗体和类风湿因子等。最近,新型自身抗体抗氨甲酰化蛋白抗体受到广泛关注,有望成为RA早期诊断和评价疾病活动性及骨质破坏等的指标之一。(中华检验医学杂志,2018, 41:77-80) 姚晓阳 姚晓阳 蒋秀娣 马晨芸关键词:关节痛 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布情况及其同源性探讨 被引量:6 2019年 目的:了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯杆菌(CR-KP)中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法:收集我院2016年1月至2017年12月对厄他培南、亚胺培南或美罗培南药敏试验结果不敏感的CR-KP共34株,根据CLSI M100S-27th文件的改良碳青霉烯灭活试验确证其是否为产酶菌株,通过PCR方法扩增5种碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)、bla_(VIM)、bla_(NDM)),PCR扩增产物进行测序明确基因型;通过脉冲场凝胶电泳对肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果:34株肺炎克雷伯菌经改良碳青霉烯灭活试验确证均为产酶菌株,PCR检测显示均为KPC-2型酶。脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果显示34株菌可分为5组,其中1、2、4组为主要流行菌株。结论:院内存在以KPC-2为主要耐药基因的CR-KP克隆株的流行,且主要以重症医学科耐药株流行,34株菌间存在不同程度的亲缘关系。 别立翰 马晨芸 蒋秀娣 陆志成关键词:肺炎克雷伯杆菌 碳青霉烯酶 脉冲场凝胶电泳 案例教学法在医学检验科实习教学中的应用 被引量:12 2021年 目的探讨案例教学法在医学检验科实习教学过程中的应用效果。方法通过将2015年7月-2019年12月期间,在我院检验科进行实习的48名学生随机分成试验组和对照组,分别应用传统带教法(对照组,n=24)与案例教学法进行教学(试验组,n=24),对带教学习后的考试成绩以及教学调查结果展开对比。结果试验组学生的理论成绩以及实践技能评分均高于对照组学生的评分,差异具有统计学意义(P<0.05)。试验组检验科实习生的问卷调查结果显示,对本次教学过程满意度为95.83%,对照组的教学满意度为70.83%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在医学检验科实习教学过程中,进行案例教学法的应用开展,一定程度上帮助其将理论知识联系到实际应用中,增强临床的实际动手能力,提高教学效率和质量。 别立翰 马晨芸 徐正 陆志成 蒋秀娣关键词:案例教学法 医学检验科 实习教学 带教 教学效率 教育 项目导向教学法在医学检验实习生临床实习中的应用 被引量:4 2019年 目的探讨项目导向教学法在检验医学专业实习生临床实习的教学效果。方法通过将我院检验本科专业48名学生随机均等分为实验组和对照组两组,实验组和对照组分别采用项目导向教学法和传统面授教学方法进行教学,教学人员及教学内容相同,课程结束后分别对两组实习同学进行相同的理论知识及实践技能操作等方面的测评。结果实验组学生理论知识成绩、实践技能操作成绩均高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);通过对学生的匿名问卷调查显示,项目导向教学法可以有效的提升学生实习效果,同时在提升学生团队协作项目上有显著作用。结论项目导向教学法明显提高了医学检验专业实习生的各项能力;提升了临床带教效果。 徐正 陆志成 徐标 马晨芸关键词:临床教学 学习主动性 教学效果 上海部分区域人乳头瘤状病毒基因分型及感染状况 被引量:7 2018年 目的对上海市浦东高桥地区妇女人乳头瘤状病毒(HPV)的基因型分布及感染状况进行分析,为上海市浦东高桥区域内宫颈癌的预防提供指导。方法收集本院妇女宫颈脱落细胞样本9 843例进行HPV基因的分型检测。结果 9 843例妇女样本中,HPV总感染率为16.64%(1 638/9 843),HPV阳性的患者中,以高危型为主,占76.86%(1 259/1 638)。HPV感染类型中,以单一感染为主,占73.50%(1 204/1 638),其次为双重感染占18.38%(301/1 638),双重以上感染合计占8.12%(1 33/1 638)。21种基因亚型均被检出,低危型感染中常见亚型为HPV81(CP8304),检出率为1.7%(63/9 843)。高危型感染中常见亚型为HPV52、16、58、51,检出率依次为3.28%(323/9 843)、2.3%(235/9 843)、1.99%(196/9 843)、1.97%(194/9 843)。不同年龄组妇女感染率各不相同,差异有统计学意义(P<0.01)。≤20岁和51~60岁2年龄组感染率较高,分别为26.78%(49/183)、22.89%(168/734)。各年龄组别妇女常见HPV亚型分布各不相同。结论上海市浦东高桥地区女性HPV感染主要以高危型、单一感染为主,常见HPV亚型为52、16、58、51、81(CP8304),各年龄段妇女感染HPV亚型分布各不相同。 何成山 马晨芸 陆志成关键词:基因型 宫颈癌 淋巴细胞活化基因-3的表达水平与慢性HBV感染者T细胞功能受损和感染状态的关系 马晨芸文献传递 五种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的比较 被引量:8 2013年 目的评价快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法收集上海市第七人民医院临床分离的金黄色葡萄球菌158株、表皮葡萄球菌12株、溶血葡萄球菌10株、人葡萄球菌1株,用MRSAID产色培养基法、苯唑西林最低抑菌浓度(MIC)法、头孢西丁纸片扩散法、青霉素结合蛋白(PBP2a)乳胶凝集法4种方法检测MRSA,并与荧光聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因进行比较。结果 MRSA ID产色培养基法检出MRSA 124株,敏感性和特异性分别为100.0%、91.9%,头孢西丁纸片扩散法检出MRSA 119株,敏感性和特异性均为100.0%,苯唑西林MIC法检出MRSA 117株,敏感性和特异性分别为97.5%、98.4%,PBP2a乳胶凝集法检出MRSA 117株,敏感性和特异性分别为98.3%和100.0%,4种方法与PCR比较Kappa值均≥0.75,具有较好的一致性。结论头孢西丁纸片扩散法检出MRSA的敏感性和特异性最高,ID产色培养基法检测MRSA比常规方法报告时间缩短24 h,是一种快速、简便、特异性好且便于临床实验室检测MRSA的方法。 陈碧英 马晨芸 李志兰 陈佩宏 陆志成 郎立中关键词:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MECA基因 头孢西丁