高洋
- 作品数：14 被引量：31H指数：3
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MiR-138对MCF-7细胞端粒酶活性及端粒稳定性的调控作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究MiR-138通过人端粒酶反转录酶(hTERT)作为下游靶基因,对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性的调控作用及端粒稳定性的影响。方法在人乳腺癌MCF-7细胞中瞬时转染MiR-138模拟物,用MTT法检测细胞增殖活性,并于转染后48 h用实时定量RT-PCR检测端粒酶催化亚单位hTERT表达、TRAP assay检测端粒酶活性,同时对细胞进行53BP1抗体免疫荧光染色及端粒的FISH染色。结果转染后48 h,MiR-138模拟物处理的MCF-7细胞hTERT表达水平比对照细胞降低2.18倍(2-△△Ct),端粒酶活性比对照细胞降低2.69倍,53BP1聚集形成的凝集点(Foci)部分与端粒位点重合,比率达到20.62%±1.55%。结论 MiR-138以hTERT作为下游靶分子调控MCF-7细胞端粒酶活性,影响细胞端粒稳定性。
- 石嵘姜立高洋周珏宇丁大鹏郑文岭马文丽
- 关键词：端粒酶端粒人乳腺癌MCF-7细胞
- BTNL2基因多态性与广东汉族女性乳腺癌易感性的相关性研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨位于基因BTNL2(butyrophilin-like2)位点chr6-32478813和chr6-32470723的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与广东汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法采用MassARRAY-IPLEX SNP分型技术,以南方医科大学南方医院的216例广东汉族女性乳腺癌患者及216例同期女性健康体检者为研究对象,对以上2个多态性位点进行基因分型,利用χ2检验统计分析病例组和对照组的基因型频率有无差异,非条件Logistic回归计算比数比(odds ratio,OR)和95%可信区间(confidence interval,CI),由此评价这两个位点多态性与乳腺癌的相关性。随后,将病例组按雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)免疫组化结果的不同进行进一步的分层分析。结果位点chr6-32478813和chr6-32470723基因型分布频率在病例-对照分组分析中无统计学差异(P>0.05);而进一步的分析发现这两位点的基因型分布频率在ER阴性(-)与ER阳性(+)乳腺癌分组中有一定的差别,但统计学意义不显著;在PR阴性(-)与PR阳性(+)分组中,差异有统计学意义(P<0.05),携带杂合基因型(chr6-32478813,CT;chr6-32470723,GA)的个体更倾向于PR(-)乳腺癌(OR=0.53,95%CI:0.29～0.94,P=0.028;OR=0.44,95%CI:0.19～0.99,P=0.043)。结论 BTNL2基因chr6-32478813和chr6-32470723位点多态性与乳腺癌患病风险均无明显相关性,但两位点的杂合基因型均与乳腺癌组织PR阴性(-)明显相关。
- 孙敏英黎佩怡高洋杨学习徐伟文李明
- 关键词：单核苷酸多态性易感性
- 间日疟原虫部分乳酸脱氢酶基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的克隆并测定我国间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)的部分基因序列并进行生物信息学分析。方法根据PvLDH基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从间日疟原虫基因组DNA中扩增LDH基因,定向克隆入pMD18质粒。阳性质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用生物信息学网站www.ncbi.nlm.nih.gov、www.expasy.ch对获得的基因及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到特异的间日疟原虫LDH基因序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的重组质粒。测序结果表明,获得的间日疟原虫LDH基因全长897bp,编码299个氨基酸。DNAMAN预测PvLDH存在10个潜在抗原表位,均与PfLDH的相应预测表位间有同源序列。同源性分析显示,我国间日疟原虫与SalvadorⅠ株和Belem株间日疟原虫的氨基酸序列同源性为99%,与其它疟原虫LDH的同源性为88%～90%。结论成功克隆了我国间日疟原虫LDH基因,其基因序列与其它疟原虫LDH基因序列有高度同源性。
- 郝文波王萍陈白虹高洋李明
- 关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶克隆
- 血管紧张素(1-7)抑制血管生成的机制被引量：5
- 2013年
- 血管紧张素(1-7)[angiotensin-(1-7),Ang-(1-7)]是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)中新近发现的一种内源性七肽氨基酸肽类激素,通过与血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)生理功能相互拮抗,使体内的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),胎盘生长因子(Placental growth factor,PLGF)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等明显下调,抑制肿瘤血管的增生以及癌细胞的生长,从而防止肿瘤在体内的发生、发展和转移。本文综述了血管紧张素(1-7)抑制肿瘤血管增生和肿瘤生长等方面作用的研究以及与临床癌症试验相关的研究进展,有望为肿瘤的预防和治疗等研究提供新的方向。
- 李文敏徐暘陈秀生陈思杨晓帆陈兴露高洋杜红延
- 关键词：癌症血管抑制
- 狂犬病病毒糖蛋白在酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 利用酿酒酵母表达系统表达狂犬病病毒糖蛋白G,可获得大量无致病的抗原,为研究新型狂犬病疫苗提供条件。构建Tat-G融合基因,通过EcoR I和Xba I酶切位点克隆至pYes2表达载体中,醋酸锂法转化酿酒酵母,URA3筛选鉴定阳性克隆,阳性重组子经半乳糖诱导20 h后,提取蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定融合蛋白。SDS-PAGE结果显示糖蛋白基因在酿酒酵母中可能表达为2种形式的蛋白,yGI和yGII,分子大小分别为66 kD和56 kD,Western blot显示在56 kD处有特异性条带。结合前人的研究成果,初步判断狂犬病病毒糖蛋白基因的跨膜TD区和膜内编码区对RV-G蛋白分子的正确折叠和免疫活性等有至关重要的影响,从而为进一步提高yGII蛋白的表达奠定基础。
- 赵慧郑文岭高洋张进芳彭翼飞张宝马文丽
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白酿酒酵母
- 浸润性膀胱癌差异基因的互作网络分析及验证研究被引量：3
- 2010年
- 目的采用蛋白互作网络分析研究表达谱基因芯片数据,构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行实验验证。方法将表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌152个共同差异表达基因,导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因互作网络图,并将互作网络数据导出到Cytoscape2.6.2软件中,筛选出网络中心节点。采用KEGG数据库等进行信号通路分类及基因功能研究,进而采用实时定量RT-PCR对其基因表达进行验证,筛选出基因表达在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组差异最大的基因,并对浸润性膀胱癌发生的分子机制进行初步探讨。结果共有103个膀胱癌共同差异表达基因编码的蛋白经STRING筛选存在相互作用,并构成一个复杂的互作网络图;Cytoscape共筛选出26个网络中心节点,广泛参与肿瘤发生的多条信号通路;实时定量RT-PCR结果表明UBE2C、VEGF、TGFBR2、CAV1四个基因表达量在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组的差异最大,分别为9.45、4.17、0.13、0.18倍(以GAPHD作为内参,计算2-△△Ct),与芯片检测结果的趋势一致。结论本研究构建出的浸润性膀胱癌差异基因互作网络图,尤其是其中的网络中心节点基因,对于浸润性膀胱癌发生分子机制的研究、早期诊断及分子靶向治疗研究具有较好的提示作用。
- 石嵘赵镇高洋吴清华宋艳斌姜立郑文岭马文丽
- 关键词：膀胱癌中心节点
- 干扰hTERT降低人乳腺癌MCF-7细胞对γ射线引起的DNA损伤反应被引量：1
- 2010年
- 目的研究hTERTRNA干扰对人乳腺癌MCF-7细胞γ射线照射引起的DNA损伤反应的影响。方法通过反转录病毒为载体的hTERT-siRNA,抑制人乳腺癌MCF-7细胞中端粒酶催化亚单位hTERT表达,实时定量RT-PCR及Western blot确认hTERT表达水平。用137Cs放射源以3 Gy剂量γ射线照射细胞,于照射前以及照射后1、2、4、8和12 h收集细胞,采用磷酸化53BP1抗体进行免疫荧光染色,并于照射前、照射后1、4和12 h收集细胞,Western blot检测53BP1蛋白磷酸化水平。结果 hTERT-siRNA处理的细胞hTERT表达水平比对照细胞降低3.20(2-△△Ct)倍,hTERT蛋白水平降低2.56倍。hTERT-siRNA处理的细胞对γ射线引起的DNA损伤反应显著降低。结论 RNA干扰hTERT表达水平,可以降低人乳腺癌MCF-7细胞对γ射线照射引起的DNA损伤反应。
- 石嵘马文丽高洋周珏宇丁大鹏余海浪郑文岭
- 关键词：端粒酶Γ射线人乳腺癌MCF-7细胞
- 疟疾快速分子诊断技术的研究与应用
- 李明郝文波吴英松王萍徐伟文董文其江晓玲高洋李林海侯云霞
- 该研究针对疟疾的快速诊断、流行病学调查及疟疾的防治进行研究。建立了疟原虫诊断靶抗原的筛选、鉴定技术；建立了三种靶抗原重组蛋白的克隆、表达与纯化技术；建立了稳定的dipstick-免疫胶体金技术，结合抗HRP-Ⅱ、LDH及...
- 关键词：
- 关键词：疟疾荧光定量PCR技术
- 自制免疫层析试剂盒检测恶性疟原虫HRP-II抗原的评价被引量：2
- 2006年
- 目的对自制免疫层析试剂盒检测恶性疟原虫富组氨酸蛋白II(HRP-II)的敏感性、特异性、稳定性等技术参数进行评价,为试剂盒的临床应用提供科学依据。方法对试剂盒的敏感性、特异性、灵敏度、精密度、稳定性等性能指标进行测定,并与国外的同类试剂盒进行比较研究。结果自制试剂盒操作简便,反应快速;以血涂片显微镜检查为金标准,对49例恶性疟血样、30例间日疟血样、43例正常人血样检测的敏感性为98%,特异性为100%;对恶性疟原虫血样的最小检出量为原虫密度0.01%,对重组HRP-II蛋白的最小检出量为10ng/ml;试剂盒精密度和稳定性均较好;各项性能指标相当或优于国外同类试剂盒。结论自行研制的恶性疟原虫免疫层析检测试剂盒测定结果较为准确、稳定和可靠,适用于恶性疟的快速诊断、流行病学筛查、疟区献血员筛查及过境边民筛查。
- 郝文波王萍李宏斌陈白虹高洋王声亮李明
- 关键词：恶性疟原虫免疫层析法
- 慢病毒载体——重组蛋白高效表达的新契机
- 2013年
- 随着生命科学产业的发展,人们对于重组蛋白的需求越来越大,所以构建一种能够大规模生产重组蛋白的系统成为当前的研究热点。而通过慢病毒(Lentivirus)来提高重组蛋白的产量可能会是一种十分有效的方法。由于其拥有的优良特性,慢病毒系统被广泛关注,已经被应用于许多领域。本文对近年来有关慢病毒系统在外源重组蛋白表达方面的应用进行了综述。将慢病毒应用于外源重组蛋白的表达,将会为外源蛋白的高效表达提供新的契机。
- 周鹏高洋杜红延李红卫
- 关键词：慢病毒慢病毒载体
