付苏雷
- 作品数：14 被引量：12H指数：2
- 供职机构：新乡医学院生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 小鼠胚胎发育过程中N-Cadherin异常表达对大脑皮层神经元迁移的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探究N-Cadherin异常表达对小鼠大脑皮层发育过程中神经元迁移的影响。方法:通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,荧光免疫组化检测超表达结果,用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征。结果:与对照组相比,N-Cadherin超表达后有更多的GFP阳性神经元迁移到皮层的Ⅱ-Ⅳ层;N-Cadherin被抑制后大量GFP阳性神经元停滞在SVZ区。结论:N-Cadherin在小鼠大脑皮层发育过程中对神经元的迁移具有影响作用。
- 付苏雷杨慈清贾阳阳李晗郭志坤林俊堂
- 关键词：神经元迁移RNA干扰
- 小鼠子宫内电转基因方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠侧脑室，在电压40V、每次脉冲60ms，间隔940ms，电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因，电转后24h取材，甲醛固定冷冻冠状切片，DAPI染细胞核观察组织形态结构变化，荧光免疫组织化学检测α-SMA的表达差异。结果：妊娠15d孕鼠转染24h后小鼠成活率80％（8／10），胚胎成活率为54．2％（13／24），存活胚胎GFP阳性表达率为61．5％（8／13），GFP阳性表达胚胎脑组织切片，基因转染区域和正常组织区组织形态结构和α-SMA表达不存在差别。结论：成功建立了小鼠子宫内电转基因的方法。
- 杨慈清李小英卢习付苏雷赵善廷林俊堂
- 关键词：小鼠转基因方法
- 神经型钙黏蛋白对小鼠脂肪间充质干细胞的成神经作用
- 2015年
- 目的:探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)成神经分化中的作用.方法;用差速培养法获取小鼠ADMSCs,传至第5代,经成神经诱导液诱导ADMSCs 7 d后,免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP2)的表达,半定量PCR检测细胞中N-cadherinmRNA的表达;采用N-cadherin对细胞进行基因修饰,免疫荧光检测神经丝蛋白(NF)和GFAP的表达.结果:ADMSCs经成神经诱导7d后表达GFAP、NSE和MAP2,半定量PCR结果显示,与对照组相比成神经诱导后的细胞表达N-cadherin显著增高.转染N-cadherin的N-cadherin细胞培养24h后发出细长的突起,与相邻细胞之间形成网状连接.免疫荧光结果显示,转染后的细胞NF和GFAP表达阳性.结论:ADMSCs在体外多种作用下,具有向神经细胞分化的潜能.N-cadherin转染后能改变ADMSCs的形态,并且在ADMSCs向神经分化中发挥一定的作用.
- 贾阳阳杨慈清付苏雷李晗郭志坤骆建凯
- 关键词：脂肪间充质干细胞转染
- 一种电转染装置及使用该装置的鸡胚视顶盖电转染方法
- 本发明公开了一种电转染装置及使用该装置的鸡胚视顶盖电转染方法，该电转染装置包括用于与电源供应器测试端连接的第一电极和第二电极，所述第一电极为板形电极，第二电极为针形电极，所述针形电极呈弧形。本发明采用2个分别独立的电极，...
- 杨慈清王聪睿李小英林俊堂范文艳李琼刘彦礼付苏雷贾阳阳李晗
- 文献传递
- ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响
- 2014年
- 目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到视顶盖内,然后电转基因,E12时收集胚胎;小鼠胚胎发育的15 d（E15）进行子宫内电转,将2μg/μl的shRNA-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到一侧脑室,电转基因后E20时收集胚胎。冰冻切片,采用免疫荧光组织化学和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果：在鸡胚模型中,ADAM17的超表达并不会明显的引起神经前体细胞迁移的改变,对细胞核转录因子Pax7的表达也没有影响;在鼠胚模型中,ADAM17的抑制表达能够引起神经前体细胞迁移受阻,但并没有引起大脑皮层各层的结构的变化。结论：ADAM17的抑制表达对神经前体细胞的迁移具有抑制作用,但并不会引起大脑皮层结构的改变。
- 杨慈清李小英王聪睿付苏雷李晗林俊堂
- 关键词：ADAM17神经前体细胞鸡胚小鼠胚胎
- 鸡胚发育早期Sonic Hedgehog在脊髓中的异位表达对形态结构及相关蛋白表达的影响
- 2014年
- 该文主要分析音猬因子（Sonic Hedgehog,Shh）在鸡胚发育过程中对脊髓形态结构的形成和相关蛋白表达的影响。实验过程采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3 d,将2μg/μL pCAGGS-Shh和0.25μg/μL pCAGGS-GFP质粒以1：8浓度混合,将0.1~0.5μL混合液准确地注射到神经管,在电压18 V、每次脉冲60 ms、间隔100 ms、电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6 h开始到5 d分别收集胚胎,冰冻切片,采用荧光免疫组化和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果表明,电转后6 h便可以观察到GFP的表达,24 h时Shh在脊髓中的异位表达能够诱导转录因子Nkx2.2（NK2 homeobox 2）的表达,并且能够抑制Pax7（paired-type homeobox 7）的表达,而Shh异位表达时脊髓的结构发生了明显的改变;说明Shh作为脊髓发育过程重要的信号分子,其异位表达能够诱导和抑制相关蛋白的表达,影响脊髓正常发育。
- 李小英杨慈清王聪睿付苏雷李晗林俊堂
- 关键词：鸡胚脊髓
- 一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射研究方法的建立被引量：3
- 2014年
- 目的建立一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。方法采用鸡胚带壳开窗培养技术,在鸡胚胚龄3d(E3),通过活体电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到脊髓腔进行定时定位活体电转,转染后3d在体视荧光显微镜下进行观察;取出GFP阳性表达的胚胎,剥离出脊髓,从顶板处破开之后将脊髓展开,用4%多聚甲醛固定1h后,对神经钙黏蛋白(N-cadherin)进行免疫荧光染色,用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染细胞核;封片后在荧光显微镜下观察神经纤维投射情况。结果对比横向切片和脊髓展开标本,两者均观察到GFP阳性转染侧的神经元纤维穿过底板沿对侧脊髓白质区边缘投射到神经结节,在脊髓展开标本中还可观察到神经纤维穿过底板再纵向向脑部投射;而N-cadherin免疫荧光染色结果表明,GFP基因的转染对机体正常的发育无明显影响。结论本实验建立了一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。
- 胡阿珍杨慈清付苏雷贾阳阳李晗郭志坤林俊堂
- 关键词：脊髓神经纤维鸡胚
- 鸡胚发育过程中Shh超表达对脊髓神经纤维投射的抑制作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨鸡胚发育过程中,sonic hedgehog（Shh）在脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。方法在鸡胚龄2.5～3d（E2.5～E3）时,利用鸡胚活体原位电转基因技术将Shh表达质粒和携带有报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的质粒共转入鸡胚脊髓,E6时取材切片,至少取3个材料,免疫荧光技术检验Shh的超表达,利用Open Book技术研究Shh在鸡胚脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。结果在脊髓组织切片水平上,免疫荧光结果表明,Shh在鸡胚脊髓中成功超表达,无论在组织切片上还是通过Open Book技术进行观察,与对照组相比,超表达后转染侧神经纤维都无法正常通过底板投射到对侧,表明Shh在鸡胚脊髓神经纤维投射方面具有重要作用。结论在鸡胚发育过程中,脊髓中Shh超表达后对神经纤维投射具有抑制作用。
- 李晗杨慈清王聪睿胡阿珍付苏雷林俊堂
- 关键词：SHHBOOK鸡胚
- 鸡胚发育过程GFP标记视顶盖神经元迁移规律及NF分布特点的研究
- 2013年
- 目的:阐明鸡胚发育过程视顶盖层的组织学结构,神经元迁移的模式及神经丝蛋白的分布特点。方法:鸡胚正常培养到第3天(E3),采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3～4 ml蛋清,开窗培养至E5,将质粒pCAGGS-GFP通过活体原位电转基因技术导入视顶盖,电转后继续培养到胚胎发育的E8～E12,取材、固定、包埋、切片后进行荧光免疫组化分析不同时期各层结构的形成和神经丝蛋白的分布。结果:在鸡胚发育过程,视顶盖从内向外最终共形成6层结构,大部分神经元垂直于视顶盖平面迁移至视神经纤维层终止,部分细胞沿视神经纤维层继续水平迁移,在中央灰质层(SGC)层,细胞迁移复杂,既存在纵向也存在横向迁移模式,NF的表达具有明显层的特点。结论:鸡胚发育过程视顶盖神经元不但存在从内向外垂直迁移的模式,而且还存在水平横向迁移的模式。
- 杨慈清李小英付苏雷李晗林俊堂
- 关键词：视顶盖神经丝蛋白神经元迁移
- 鸡胚发育过程敲减神经型钙黏蛋白表达对视顶盖神经元迁移及神经丝蛋白的影响被引量：2
- 2013年
- 目的 阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白（NF）表达的影响。 方法 鸡胚正常培养到第3天（E3），采用鸡胚带壳开窗培养方法，取出3～4ml蛋清，开窗培养至E5，将N-cadherin干扰载体pGPU6-GFP-neo-N-cadherin-shRNA通过活体电转基因技术导入视顶盖，电转后继续培养到E12，每组收集3个胚胎，取材，固定，包埋，切片后进行荧光免疫组织化学分析相关蛋白的表达。结果 鸡胚发育过程，敲减N-cadherin表达影响神经元迁移，被敲减的细胞主要停留在室管膜区，在N-cadherin受到抑制表达的区域，NF的表达也受到抑制，其表达明显减弱。 结论 N-cadherin的抑制表达可导致神经元的迁移发生紊乱，影响NF的表达。
- 杨慈清李琼付苏雷李晗范义峰郭志坤林俊堂
- 关键词：视顶盖神经丝蛋白鸡胚
