付钰广
- 作品数：35 被引量：47H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪树突状细胞表面分子CD103的表达及其抗血清的制备
- 2021年
- 为制备抗猪树突状细胞表面分子CD103蛋白的多克隆抗体,首先从NCBI基因库中获取查找猪源CD103的基因序列,并设计引物;其次,采集猪呼吸道淋巴结样品,提取RNA反转录为cDNA,通过PCR的方法扩增得到CD103基因片段;然后将所获扩增的CD103基因克隆入原核表达载体pET-30a(+)并构建表达重组质粒pET-30a-CD103,将构建的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导蛋白表达,用NI-NTA亲和层析的方法纯化目的蛋白;最后,将纯化的目的蛋白与ISA206佐剂混合乳化后通过背部皮下免疫途径免疫BALB/c小鼠,经3次加强免疫后收集血清获得多克隆抗体。利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验评价制备的多克隆抗体的效价和反应性。结果表明,本研究成功扩增得到猪CD103基因并成功构建重组表达质粒;利用原核表达系统成功表达了猪CD103目的蛋白。Western blot以及IFA结果显示,本研究制备的多克隆抗体特异性高,能与CD103蛋白发生特异性结合;经ELISA滴定结果显示,制备的多克隆抗体在稀释至1∶25 600倍时依旧具有良好的反应性。综上表明,本研究成功制备抗猪CD103蛋白多克隆抗体,为后期制备抗CD103单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中CD103阳性树突状细胞的相关研究奠定了基础。
- 张韬付钰广李宝玉王金泉刘光亮
- 关键词：树突状细胞多克隆抗体
- 猪博卡病毒VP1蛋白的多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2021年
- 旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus, PBoV)VP1蛋白的多克隆抗体。利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。纯化后的目的蛋白与ISA206佐剂混合后通过背部皮下免疫日本大耳白兔,3次加强免疫后,收集兔血清,利用间接ELISA、Western blot与间接免疫荧光(IFA)的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果显示,成功获得PBoV VP1蛋白目的基因,利用原核表达系统大量表达了VP1蛋白,并制备多克隆抗体;ELISA滴定结果显示,该抗体在稀释至12 800倍时反应性依旧良好;Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体可与VP1蛋白条带发生特异性结合;将PBoV感染的猪肠道组织制备冰冻切片,IFA检测结果表明,该抗体与PBoV具有良好的反应性。上述结果表明,本研究成功制备了针对PBoV VP1蛋白的兔多克隆抗体,为深入研究PBoV的VP1蛋白生物学功能奠定了一定物质基础。
- 张韬李茂林邹抒洁Manita Aryal刘光亮付钰广
- 关键词：VP1蛋白多克隆抗体
- 一种鸭坦布苏病毒检测试剂盒
- 本发明公开一种用于鸭坦布苏病毒的一步法SYBRGreen荧光定量PCR检测试剂盒。本发明的鸭坦布苏病毒检测试剂盒内包含有根据鸭坦布苏病毒E基因保守区设计的两条特异性引物SEQ1和SEQ2。采用本发明的试剂盒进行检测，简化...
- 朱启运付钰广刘宗梁吉艳红郭建宏才学鹏
- 莱姆病两种检测方法的建立
- 莱姆病是一种自然疫源性人兽共患病,由伯氏疏螺旋体引起,通过传介蜱叮咬人或动物传播。该病临床表现复杂多样,可引起人体多系统、多器官的损害,严重者终生致残甚至死亡,除威胁人类健康外,还通过危害家畜健康对畜牧业的发展构成了威胁...
- 付钰广
- 关键词：伯氏疏螺旋体莱姆病人兽共患病自然疫源
- 鸭坦布苏病毒非结构蛋白1(NS1)拮抗IFN-β信号通路的分子机制
- 鸭坦布苏病毒(DTMUV)2010年在我国首次报道、致易感鸭群发病的新发病原,已给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。我们的前期研究发现,DTMUV感染能抑制宿主细胞β干扰素(IFN-β) mRNA表达水平。然而,其抑制天然...
- 王俊勇雷曹琦付钰广吉艳红李郁魏建忠舒红兵朱启运
- 关键词：IFN-ΒVISA
- VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法
- 本发明涉及一种应用反向遗传操作技术生产的Ⅶ型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法，属于生物制品和生物技术领域，VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株毒力均明显减弱，同时在鸡胚上具有高滴度、遗传性能稳定、与流行病...
- 朱启运吉艳红付钰广
- 文献传递
- 黑龙江尚志地区莱姆病伯氏疏螺旋体的鉴定与遗传进化分析被引量：8
- 2010年
- 自我国黑龙江省尚志市野外采集的蜱体内分离出1株莱姆病伯氏疏螺旋体,并对其进行了形态观察及分子生物学分析。利用BSK H分离培养法,经暗视野显微镜和姬姆萨染色观察,菌体呈螺旋状。根据已报道的伯氏疏螺旋体16S rRNA基因序列设计引物,结合参考文献设计的外膜蛋白A(OspA)基因引物经PCR扩增并测序,与GenBank中的各种伯氏疏螺旋体基因型建立系统发生树并进行同源性分析。结果表明,16S rRNA基因核苷酸序列与GenBank中的伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii)DK27(X85193)具有较高的同源性,可达99.5%;OspA基因核苷酸序列与报道的Borrelia gariniiKhab(AY502600)有较高的同源性,为93.6%。根据序列分析结果,认为该分离株属于Borrelia garinii基因型,命名为SZ,该菌株16SrRNA基因和OspA基因核酸序列已提交到GenBank(登录号分别为HM007279和HM007278)。
- 牛庆丽杨吉飞关贵全付钰广马米玲李有全刘军龙刘志杰刘爱红任巧云郝雪峰罗建勋殷宏
- 关键词：伯氏疏螺旋体系统发生树
- 小反刍兽疫病毒China／Tib／07株V蛋白的原核表达及纯化被引量：2
- 2013年
- 为获得小反刍兽疫病毒(PPRV)V基因在大肠杆菌中的表达产物,根据GenBank中China/Tib/07株的V基因序列人工合成了V基因,然后将其克隆至表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-V,经酶切鉴定和测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达和GST亲和树脂柱纯化融合蛋白。SDS-PAGE检测结果显示,使用0.8mmol/L的IPTG在30℃、130r/min条件下诱导8h后,分子质量约为58ku的融合蛋白以可溶性状态大量表达;SDS-PAGE及Western-blot分析表明,用含有1mmol/L还原性谷胱甘肽的GST洗涤缓冲液洗涤8次并用2mmol/L的还原性谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱时可获得纯度较高的融合蛋白,且此融合蛋白可被抗GST标签的抗体所特异性识别。结果表明,成功表达并纯化了小反刍兽疫病毒的V蛋白,该项工作为研究其生物学功能积累了资料。
- 张学虎马旭升付钰广曾巧英才学鹏朱启运
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达纯化
- 一种猪病毒性腹泻病毒5重RT-PCR检测试剂盒
- 本发明公开一种“猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪嵴病毒”的5重RT‑PCR检测方法以及试剂盒。本发明的试剂盒中包括有10条特异性扩增引物，在其使用时以待检样品的总RNA，利用6碱基随机引物...
- 刘光亮李宝玉付钰广陈佳宁兰喜丁光明
- 文献传递
- 猪源多聚免疫球蛋白受体的表达及抗血清的制备
- 2022年
- 为了制备猪源pIgR蛋白的多克隆抗体,分析NCBI提供的猪源pIgR的胞外区基因序列并设计引物,经过PCR、酶切、连接,将目的序列克隆入原核表达载体pET-30a(+),测序验证成功后,将带有目的片段的重组质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了较为纯净的pIgR蛋白。用纯化后的pIgR与佐剂混合后免疫日本大白耳兔,制备兔源的多克隆抗体。结果显示,本研究正确构建了带有pIgR基因的重组质粒,并成功表达pIgR蛋白,预测的分子质量约为82 ku;ELISA测定结果显示,pIgR蛋白免疫日本大白耳兔获得的多克隆抗体效价高,且在稀释至1∶3200时依然具有良好的反应性;Western-blot和IFA检测结果显示,制备的pIgR多克隆抗体特异性高、敏感性好。结果表明,本次研究为后续深入探索猪机体黏膜免疫过程中pIgR相关的分子机制奠定了基础,为后期制备猪源p Ig R的单克隆抗体提供了前期的物质准备。
- 邹抒洁付钰广张韬黄鑫王金泉刘光亮
- 关键词：原核表达多克隆抗体
