冯建平
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生物制品中猪细环病毒污染检测方法的建立和初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的最低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。
- 吴雪伶赵龙冯建平樊金萍赵翔孟淑芳
- 关键词：荧光PCR细胞
- 流感疫苗生产用新型细胞基质 MDCK细胞的质量控制研究被引量：6
- 2013年
- 目的：对流感疫苗生产用新型细胞基质MDCK细胞进行全面地质量控制检测，并对检测项目及结果进行汇总和分析。方法根据《中国药典》三部，对待检MDCK细胞进行细胞鉴别、内、外源因子和致瘤性检测，同时根据国际新要求对MDCK细胞的裂解物及细胞DNA的致癌性进行检测。结果待检MDCK细胞为贴壁、上皮样细胞形态，犬细胞来源，平均染色体数为80±1；未发现细菌、真菌、支原体污染，内、外源病毒的污染检测结果显示，待检细胞中未发现有致细胞病变、产生血吸附、血凝或致动物死亡的非特异性病毒，逆转录病毒、牛源性病毒和犬特异性病毒检测均为阴性；取107个活细胞接种每只裸鼠，观察12周后，接种部位未发现结节，大体解剖显示主要脏器亦未出现结节，病理检查显示与对照组无明显差异，细胞未显示具有致瘤性。以等量细胞的裂解物和细胞DNA接种裸鼠，均未致裸鼠产生结节，病理检查结果与对照组无明显差异，提示细胞未显示致癌性。结论待检MDCK细胞具有生产流感疫苗的潜在可能性。
- 吴雪伶冯建平樊金萍李秀华付瑞孟淑芳
- 关键词：MDCK细胞鉴别
- PCR方法与经典药典方法在细胞培养物支原体污染检测中的比较
- 背景传代细胞目前广泛应用于疫苗生产、组织工程及单抗制备等诸多领域,而支原体污染是长期困扰细胞培养的严重问题。支原体污染细胞后,可导致细胞形态、结构及核型发生改变,细胞的生物学活性无法正常发挥,严重影响生产及检定工作的顺利...
- 樊金萍冯建平孟淑芳
- 关键词：PCR支原体细胞培养物
- 文献传递
- 生产用细胞基质中猪细小病毒污染检测方法的建立及应用
- 2015年
- 目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出限等参数进行验证，并分析待测样品对试验的干扰。将PPV毒种感染ST细胞，制备病毒。以ST细胞为敏感细胞，建立PPV ST细胞感染性试验，并将ST细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合，建立ST细胞感染-PCR法，分析感染-PCR方法的灵敏度。利用所建立的方法进行生产用细胞样本的初步应用研究。结果 PPV荧光定量PCR法的特异性较好，与其他种属的细小病毒、猴SV40病毒及其他猪源病毒无明显的交叉反应，在109～104拷贝／μl范围内线性较好，R2达到0．98以上，灵敏度为1×10^4拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度均＜5％，试验内病毒定量拷贝数的精密度为5％～15％，试验间为30％～40％，最低感染性病毒滴度检测限为1CCID50／ml。待测细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。 ST细胞感染-PCR法的灵敏度为0．01CCID50／ml。利用荧光定量PCR法对22份细胞样品进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了PPV荧光定量PCR检测法及ST细胞感染-PCR法，能够用于细胞中PPV的检测，有助于进一步提高生产用或治疗用细胞的安全性。
- 吴雪伶樊金萍冯建平赵翔孟淑芳
- 关键词：猪细小病毒荧光定量PCRST细胞
- 重组细胞中鼠细小病毒检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2012年
- 目的建立生物技术产品用重组细胞中鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)污染的检测方法,并进行验证及初步应用。方法以NB324K细胞为指示细胞,建立MMV感染性检测方法,并以不同CCID50的MMV分别感染NB324K细胞,验证方法的灵敏度;通过设计针对编码非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)保守序列的引物和探针,建立用于重组细胞中MMV检测的实时荧光定量PCR,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度、最低检测限及试验可行性和干扰性进行验证;将NB324K细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合,建立NB324K细胞感染-PCR法,并通过对大量样本的检测,分析荧光定量PCR法和NB324K细胞感染-PCR法的可行性。结果 NB324K细胞感染试验的灵敏度为0.2 CCID50;荧光定量PCR检测方法最佳线性范围为1×108～1×104拷贝/μl,R2达0.99以上,特异性良好,与其他种属的细小病毒均无交叉反应,试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均小于5%,试验内病毒定量拷贝数的CV在20%～30%之间,试验间病毒定量拷贝数的CV在20%～50%之间,灵敏度为5×103拷贝/μl,最低感染性病毒颗粒检测限为2 CCID50。该方法能够用于细胞样品中MMV的检测,部分样品基质对病毒的检测具有一定的干扰性。NB324K细胞感染-PCR法的灵敏度为0.02 CCID50,检测时间可缩短为96 h,与荧光定量PCR法分别对47份样品进行检测,结果均为阴性。结论成功建立了MMV荧光定量PCR检测方法和NB324K细胞感染-PCR法,可应用于重组细胞中MMV污染的检测,为进一步提高生产用重组细胞的安全性奠定了基础。
- 吴雪伶樊金萍冯建平宋丽京孟淑芳李德富
- 关键词：荧光定量PCR细胞
- 支原体检查的核酸检测方法及方法学验证的思考被引量：8
- 2018年
- 支原体是生物制品的最常见外源因子污染物之一,《中国药典》2015年版收录的两种支原体检测方法虽然可灵敏地检测出活的支原体,但因检测时间较长,对实验室设置及实验室人员的技术均有一定要求,且对一些特定的样本及需要快速放行的样本有一定的局限性,如目前研究热点之一的CAT-T细胞治疗产品的过程或放行检验。因此,越来越多的新兴领域的研发者更倾向于采用支原体污染快速检测方法用于中间品放行检测,甚至作为CAR-T细胞等治疗产品的放行检验的补充或替代方法。由此,也带来了另一个药品监管机构所关注的重要问题安全性,即所用的方法是否具有与经典方法相同的灵敏度可以保证产品的安全性。本文总结了近年来我国生物制品采用药典方法检测的支原体污染的现状,分析了支原体核酸检测(NAT)方法的需求与研究现状以及国内外法规对支原体核酸检测方法使用的态度,简述了国外法规对支原体验证的相关要求,并针对目前我国支原体核酸检测法方法学验证的现状提出解决的思路,以期对我国支原体核酸扩增法检测的研发者及使用者提供借鉴。
- 赵翔冯建平冯建平
