刘上峰
- 作品数：15 被引量：121H指数：8
- 供职机构：中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- DNA指纹技术在可疑精子标本等鉴定中的应用
- 2004年
- 目的 :应用DNA指纹技术对精子库供精者中来源可疑的精子标本进行鉴定 ,并对供精者的后代进行亲子鉴定。方法 :分别对本研究室所涉及的 6名供精者的精子标本及其对应可疑精子标本各一份 ,同时志愿者精子和其儿子外周血各一份提取DNA ,应用PCR扩增 ,PAGE胶电泳检测DNA指纹图。结果 :通过DNA指纹图分析 ,5个可疑精子标本被确定为对应同一供精者精子标本 ,余 1例被确认为非同一供精者精子标本来源 ;志愿者和其儿子被确定为亲子关系。结论 :应用DNA指纹图技术对精子库供精者的可疑精子标本和供精者精子及对应供精者精子和后代外周血进行分析 。
- 朱文兵傅俊江刘上峰范立青李麓芸卢光琇
- 关键词：标本精子库DNA指纹图DNA指纹技术PCR扩增PAGE
- 人类睾丸生殖细胞凋亡相关新基因TSARG2及小鼠同源基因SRG2的分子克隆及功能的初步研究
- 睾丸生殖细胞的凋亡是一个由多基因参与的复杂过程。目前有关睾丸生殖细胞凋亡的研究尚处于起步阶段，迄今为止，尚未克隆出特异性的睾丸生殖细胞凋亡基因。而克隆新的特异性的睾丸凋亡相关基因是进一步了解生殖细胞凋亡机制和生物学过程的...
- 刘上峰
- 关键词：基因克隆凋亡分子信标
- 文献传递
- 小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因SRG2的分子克隆及其在隐睾中的表达特征被引量：3
- 2003年
- 从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (BE6 4 4 5 4 2 )入手 ,利用网上生物信息学克隆了SRG2基因全长 ,GenBank登录号为AF395 0 83。从小鼠睾丸cDNA文库中分离出该基因完整阅读框cDNA ,SRG2基因的cDNA全长为 10 88bp ,为编码 2 95个氨基酸、分子量为 335 79kD、等电点为 9 6 4的蛋白质 ,与人类同源基因TSARG2相似性为 78% ,而与其他已知蛋白质无明显同源性。RT PCR结果表明 :该基因只在睾丸中有高表达。应用新型的分子信标检测该基因在不同时期隐睾中的mRNA表达水平 ,发现该基因呈明显上调 。
- 刘上峰李麓芸莫亚勤傅俊江刘刚邢晓为卢光琇
- 关键词：隐睾凋亡分子信标
- 睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析被引量：14
- 2003年
- 从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (GenBank登录号 :BE64 45 3 8)出发 ,利用生物信息学和实验技术 ,克隆了小鼠睾丸生精细胞凋亡相关新基因Mtsarg1及相应的人类新基因TSARG1,Gen Bank登录号分别为AF3 99971和AY0 3 2 92 5。小鼠Mtsarg1与人类TSARG1基因在氨基酸水平有 5 5 %的一致性和 61%相似性 ,与其他已知蛋白质无明显同源性。小鼠 10种组织的RT -PCR分析结果表明 ,Mtsarg1基因在睾丸中高表达 ,在附睾中呈微弱表达 ,在其他组织不表达 。
- 傅俊江卢光琇李麓芸刘刚邢晓为刘上峰
- 关键词：睾丸生精细胞凋亡相关基因分子克隆表达谱分析
- 双向电泳技术原理及其应用被引量：24
- 2002年
- 双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一 ,本文对其基本原理、分辨率、可重复性、相关数据库、减法分析等作了介绍 。
- 刘上峰傅俊江李麓芸
- 关键词：双向电泳蛋白质组数据库
- 粘多糖贮积症Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶基因常见突变的检测被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨并建立粘多糖贮积症 型 (mucopolysaccharidosis ,MPS )患者艾杜糖 - 2 -硫酸酯酶 (iduronate- 2 - sulphatase,IDS)基因常见突变的检测方法。方法 应用聚合酶链反应 -单链构象多态性(polymerase chain reaction- single strand conformation polymorphism,PCR- SSCP)对 IDS基因突变热点外显子 3、8和 9进行点突变检测 ;应用 DNA测序对 PCR- SSCP检出的突变进行序列分析 ;应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism,PCR-RFL P)对 DNA测序的结果进行检测。结果 经 PCR- SSCP发现该患者的 IDS基因外显子 9有明显异常泳动的条带 ;DNA测序发现患儿的外显子 9发生点突变 (C16 72 T) ,从而导致患者艾杜糖 - 2 -硫酸酯酶蛋白发生氨基酸替换 (R46 8W) ;PCR- RFL P电泳检测结果显示粘多糖贮积症 型患者仅出现 5 5 4bp 1条带 ,而患儿父母出现 2 5 7bp和 2 97bp 2条带 ,进一步验证了序列分析的结果。结论 PCR- SSCP分析、DNA序列分析和 PCR- RFL P分析是诊断 MPS 的有效方法 ,三者联合使用可以相互验证、互为补充 ,提高基因诊断的准确率和成功率。
- 刘上峰李麓芸傅俊江钟昌高卢光琇
- 关键词：聚合酶链反应-单链构象多态性基因突变
- 粘多糖贮积症Ⅱ型患者IDS基因的一个新突变被引量：10
- 2004年
- 目的 研究粘多糖贮积症 型 ( mucopolysaccharidosis type ,MPS )患者的艾杜糖 - 2 -硫酸酯酶 ( iduronate- 2 - sulfatase,IDS)基因的基因突变。方法 应用聚合酶链反应 -单链构象多态性( polymerase chain reaction- single strand conformation polymorphism,PCR- SSCP)对患者的 IDS基因可能的常见突变第 2、3、5、7～ 9外显子进行检测 ,并对 PCR- SSCP检出的突变进行直接测序 ,测序发现的突变进行 PCR-限制性酶切分析验证。结果 经 PCR- SSCP和 DNA序列分析发现该患者的第 7外显子发生新的点突变 ( G12 5 3T) ;聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 ( PCR- RFL P)电泳检测示患者和母亲出现突变导致的酶切位点 ,进一步验证了序列分析结果。结论 筛查所得的点突变 G12 5 3T可能是该 MPS
- 张春芽李麓芸刘上峰傅俊江卢光琇
- 关键词：基因突变PCR-SSCP
- 人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3的克隆被引量：6
- 2003年
- 目的 克隆人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3。方法 从已获得的小鼠隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的表达序列标签片段 (BE64 45 3 7)入手 ,构建人同源表达序列标签重叠群 ,应用基因特异性引物和载体特异性引物 ,在睾丸cDNA文库的DNA中进行巢式PCR扩增、测序 ,对测序结果进行生物信息学分析。结果 从睾丸cDNA文库中分离出人类睾丸凋亡相关基因的 5′末端而获得全长cD NA ,命名为TSARG3 ,GenBank登录号为AF4192 91(保密期为 1年 ) ,同时应用相同方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因 ,GenBank登录号为AF4192 92。结论 获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3 ,该基因可能与人类睾丸生精细胞凋亡有关。
- 刘刚卢光琇傅俊江刘上峰邢晓为李麓芸
- 关键词：巢式聚合酶链反应睾丸精子男性不育
- 人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中的表达研究(英文)被引量：2
- 2003年
- 果蝇是结构基因组学和功能基因组学研究的最为理想的一种模式生物 ,采用同源克隆的策略 ,应用生物信息学分析和实验技术相结合的方法分别从人和小鼠中克隆了同源于果蝇MLE蛋白的新基因DDX36和Ddx36。为进一步研究DDX36和Ddx36基因与精子发生的关系 ,再应用Northernblotting、RT PCR和组织原位杂交技术探讨了DDX36和Ddx36基因的表达情况 ,结果发现人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中高表达。初步证明DDX36和Ddx36基因在精子发生中亦可能发挥重要作用。
- 傅俊江李麓芸刘上峰邢晓为刘刚卢光琇
- 关键词：精子发生睾丸组织RT-PCR原位杂交
- 变性梯度凝胶电泳的原理、应用及其进展被引量：27
- 2002年
- 变性梯度凝胶电泳 (DGGE)主要是基于突变型和野生型核酸序列的不同而导致其变性浓度的差异 ,利用变性梯度胶进行分离。恒定变性凝胶电泳 (CDGE)、瞬时温度梯度电泳 (TTGE)和温度梯度凝胶电泳 (TGGE)是由 DGGE经改进而成。
- 刘上峰傅俊江
- 关键词：变性梯度凝胶电泳
