刘红梅
- 作品数：93 被引量：175H指数：7
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 鸡β-防御素2在大肠杆菌中的串联表达及抗菌活性分析被引量：4
- 2016年
- 利用基因串联技术表达鸡β-防御素2(AvBD2)重组蛋白,分析其生物结构活性以及蛋白表达量变化。构建了重组串联表达载体p ET-28a-AvBD2op-AvBD2,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达融合蛋白,经镍柱纯化后进行Western-blot检测、Tricine-SDS-PAGE分析和MALDI-TOF-MS质谱分析。结果显示,单表达工程菌和串联表达工程菌均在9500 u处有特异性条带;采用BCA法测得的单、串联表达工程菌纯化后的蛋白质量浓度分别为0.258和0.769 mg/m L;通过凝胶成像系统分析,单表达工程菌中目标蛋白的表达量约占上清总蛋白的10.3%,而串联表达的约占上清总蛋白的18.3%;MALDI-TOF-MS质谱分析结果表明,单、串联表达蛋白产物的分子质量分别为4 300、7 811 u;琼脂孔穴扩散抑菌法检测证明纯化蛋白对多种微生物具有不同的抗菌活性。
- 石水琴魏海婷祁克宗涂健吕小龙刘红梅薛挺周秀红
- 关键词：抑菌活性质谱分析
- 表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性
- 本文将增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)与鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的VP2基因融合,插入马立克氏病毒(MDV)CVI988/Rispens的非必需区US10片段中,成功构建表达VP2融合蛋白的MDVCVI988转...
- 刘红梅秦爱建刘岳龙金文杰叶建强陈鸿军邵红霞李迎晓
- 关键词：CVI988传染性法氏囊病病毒VP2融合蛋白
- 文献传递
- 安徽地区2011年～2014年小鹅瘟的病毒分离及其流行情况被引量：6
- 2016年
- 为了解近年安徽地区小鹅瘟的流行情况，本研究对2011年-2014年安徽省11个地区的36份疑似小鹅瘟的，临床样品进行鹅胚接种、琼脂扩散试验和PCR检测，同时在分离的阳性株中选取10个分离株进行VP基因测序并绘制遗传进化树。结果共分离鉴定出31例鹅细小病毒（GPV）分离株，这些分离株几乎遍布安徽地区所有鹅的养殖品种，发生时间以春季为主，发病地区以中部和西部居多；遗传进化树分析表明GPV安徽分离株与国内大部分分离株属于同一分支，明显不同于国内疫苗株SYG61v和台湾疫苗株82—0321v，并且均属于强毒株。本研究数据显示GPV在安徽地区并未出现明显的变异。
- 王传钧汪凯韩梅杨志伟王浩王桂军祁克宗潘玲刘红梅
- 关键词：小鹅瘟病毒VP基因
- 鸡、猪BPI氨基端的基因克隆和鉴定
- 目的克隆杀菌／通透性增加蛋白(BPI)N端cDNA,构建重组体pMD18-T-BPI,进行序列鉴定．方法应用RT-PCR技术,参照Genbank报道的预测序列,从鸡多形核白细胞(PMN) mRNA中扩增出杀菌／通透性增加...
- 程玉磊祁克宗刘红梅涂健
- 关键词：克隆
- 文献传递
- J亚群禽自血病病毒超感染抗性鸡胚成纤维细胞系建立
- 将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-J env)插入pcDNA3.1真核表达载体构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞。细胞经传30代后,冻存。13个...
- 叶建强秦爱建邵红霞刘红梅金文杰刘岳龙
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ENV基因细胞系抗病毒感染
- 安徽地区蛋鸡肿瘤性疾病的诊断及病理组织学观察
- 【研究目的】马立克氏病(Marek’s Disease,MD)、禽白血病(Avian leukosis,AL)和网状内皮增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是家禽养殖中最为常见的三种由病毒诱发的肿瘤...
- 黄学婷刘苗苗赵宇邵颖刘红梅祁克宗
- 文献传递
- 利用Red重组系统敲除APEC毒力岛irp2基因被引量：4
- 2012年
- 应用质粒pKD46介导的Red同源重组系统,以质粒pKD3为模板,设计irp2基因序列敲除引物,引物5′端有51 bp的拟敲除基因的同源臂,3′端为扩增引物,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,通过第1次同源重组将拟敲除的irp2基因替换为氯霉素抗性基因,再通过重组酶质粒pCP20在FRT位点发生第2次同源重组,消除抗性基因。结果表明,利用该重组系统成功敲除了禽致病性大肠杆菌HPI毒力岛irp2基因。为深入研究irp2基因在禽致病性大肠杆菌致病过程中所发挥的作用打下基础。
- 李叶芳涂健邵颖刘红梅祁克宗
- 关键词：禽致病性大肠杆菌
- APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定被引量：1
- 2021年
- 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室前期预测了新的ETT2伴侣分子YgeG,为了获得大量有活性的YgeG蛋白,对其功能进行鉴定,并筛选出与其相关的具有活性的ETT2分泌效应蛋白,将对目的蛋白原核表达条件进行优化。以禽致病性大肠杆菌菌株81(AE81)为模板对基因ygeG进行扩增,将扩增产物克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,构建重组质粒pGEX-6p-1-ygeG,并进行测序鉴定。经鉴定正确后的重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化。SDS-PAGE及Western Blot鉴定结果显示,本试验中表达的最佳条件为:IPTG终浓度为0.25 mmol/L,16℃诱导16 h。重组蛋白大小约为44 ku,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,主要以可溶性蛋白的形式存在,并且具有良好的免疫原性和反应原性。成功表达了AE81-YgeG蛋白,为该蛋白的结构和功能及ETT2的深入研究奠定基础,为禽大肠杆菌病的防治提供理论依据。
- 姜楠郑倩倩李倩文涂健宋祥军邵颖刘红梅祁克宗
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用被引量：11
- 2006年
- 应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。
- 刘红梅秦爱建许小琴李迎晓陈鸿军叶建强金文杰刘岳龙邵红霞
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2
- 一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法
- 本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法，利用鸭坦布苏病毒全基因序列设计一对引物以扩增NS1基因，构建蛋白表达载体，通过IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达获得重组表达蛋白包涵体，以包涵体经纯化、复性、...
- 王桂军周祺徐前明刘红梅宋祥军苏观志许泽军顾香雪黄荣
- 文献传递
