刘萃萃
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。
- 刘萃萃王璐璐赵卫卫彭攸王玉平孙振亮冯景
- 关键词：乳腺癌EZH2EZH2
- 乳腺癌细胞中miR-15b靶向调控EZH2基因表达的研究
- 研究背景与目的 乳腺癌是一种由乳腺导管和乳腺小叶内细胞增殖和分化异常引起的一类复杂疾病,主要发生在女性人群,男性中十分少见。绝大多数的乳腺癌呈现一种散发的趋势,同时也具有一定的遗传倾向。乳腺癌每年有一百万的新生病例...
- 刘萃萃
- 关键词：乳腺癌
- 文献传递
- 胃蛋白酶原筛查慢性萎缩性胃炎与胃癌的临床意义被引量：6
- 2015年
- [目的]探讨胃蛋白酶原(PG)检测在筛查萎缩性胃炎(CAG)和胃癌(GC)的临床意义。[方法]264例患者均行胃镜病理活检诊断及血清PGⅠ、PGⅡ测定,并计算PGⅠ/PGⅡ比值(PGR),其中非萎缩性胃炎(CSG)患者140例,CAG患者99例,GC患者25例。对PGⅠ、PGⅡ、PGR进行独立样本检验及ROC曲线分析。[结果]CAG、GC患者PGⅠ、PGR水平显著低于CSG患者(P<0.01)。以CSG为对照组的研究中,PGⅠ、PGR诊断CAG的ROC曲线下面积分别为0.711、0.614(P<0.01);PGⅠ、PGR诊断GC的ROC曲线下面积分别为0.783、0.673(P<0.01)。以CAG为对照组的研究中,PGⅠ、PGR诊断GC的ROC曲线下面积差异无统计学意义。[结论]CAG与GC患者的PGⅠ、PGR水平显著低于CSG患者,作为临床筛查CAG、GC的指标具有一定的临床意义,但在胃癌前病变人群中并没有显著的临床意义。
- 屠军李慧瑛敖洪峰刘萃萃朱金水
- 关键词：胃蛋白酶原萎缩性胃炎胃癌
- EZH2基因3'非翻译区慢病毒载体构建及重组体筛选被引量：1
- 2013年
- 目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR,构建携带EZH2基因3'UTR的重组慢病毒载体CTX-Lentivirus-EZH2 3'UTR,脂质体法将重组的慢病毒载体和包装载体混合物共转染工具细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。用裂解液裂解病毒颗粒,根据慢病毒载体上的CMV启动子表达量检测病毒滴度。用慢病毒颗粒感染乳腺癌MCF-7细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定整合的乳腺癌细胞MCF-7,用Real-Time PCR和Western blotting方法检测EZH2基因3'UTR是否整合入细胞MCF-7中。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序结果证实,EZH2基因3'UTR成功定向克隆到慢病毒载体上。Real-Time PCR检测病毒滴度为4.3×109拷贝/mL。筛选稳定整合MCF-7细胞的最佳浓度为0.2μg/mL。重组慢病毒转导MCF-7后,Real-Time PCR和Western blotting方法分别检测EZH2基因3'UTR整合到乳腺癌细胞MCF-7基因组中。慢病毒感染实验组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建携带EZH2基因3'UTR慢病毒筛选载体,实现重组体在乳腺癌MCF-7细胞中稳定整合。
- 赵卫卫彭攸李晓娇卢晓佳王玉平刘萃萃王璐璐冯景
- 关键词：EZH2非翻译区慢病毒载体MCF-7
- miRNA-21在子宫颈鳞癌组织中表达的初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨微小分子RNA(microRNA-21,miR-21)在宫颈癌患者组织中的表达情况。方法选择宫颈鳞癌20例作为宫颈癌组,其中12例HPV16阳性,8例HPV16阴性;正常宫颈16例作为对照组,采用实时定量PCR方法检测miR-21在各组中的表达情况。结果 MiR-21在宫颈癌和对照组中的相对表达量为4.019±0.002;MiR-21在HPV16阳性宫颈癌组和阴性组的相对表达量分别为2.376±0.034和2.002±0.024,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-21在宫颈癌组织中呈高表达,可能与宫颈癌发生、发展有关。
- 韩英张蓉俞丹华刘萃萃彭莜
- 关键词：子宫颈癌实时荧光定量PCR法人乳头瘤病毒
- EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义被引量：7
- 2015年
- 目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。
- 武萍萍陶然彭攸赵卫卫刘萃萃王璐璐胡朝晖王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNA甲基转移酶1
- microRNA-136影响静脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制
- 2016年
- 目的探讨microRNA-136(miR-136)对静脉平滑肌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法建立大鼠颈总动脉自体移植静脉模型,并于体外培养静脉平滑肌细胞。采用CCK(cell counting kit)-8和EDU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)实验检测细胞增殖情况,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移情况,荧光定量PCR检测移植1、2、4周后和体外培养静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量,免疫印迹法检测Steap3蛋白质表达量,免疫荧光法检测蛋白Steap3在细胞内的定位情况。通过microRNAs专业网站预测筛选可能的下游基因,并利用双荧光素酶报告基因验证。结果荧光定量PCR结果显示,移植1、2周后移植静脉miR-136的相对表达量分别为0.46±0.33、0.37±0.30,显著低于对侧未处理静脉(P值分别<0.05、0.01);移植4周后移植静脉miR-136的相对表达量为1.39±0.82,与对侧未处理静脉的差异无统计学意义(P>0.05);处于增殖状态的静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量为0.11±0.01,显著低于处于非增殖状态的细胞(P<0.05)。CCK-8实验结果显示,阴性对照(NC)+血清组的光密度(D)值为0.96±0.03,显著高于NC组的0.62±0.02和模拟物+血清组的0.76±0.08(P值均<0.05)。EDU实验结果显示,NC+血清组EDU标记的阳性细胞百分比为(52.71±2.57)%,显著高于NC组的(13.91±3.43)%和模拟物+血清组的(32.56±3.26)%(P值均<0.01)。Transwell实验结果示,NC+血清组细胞迁移数为(53.13±16.36)个/视野,显著多于NC组的(8.09±5.44)个/视野和模拟物+血清组的(8.08±0.85)个/视野(P值均<0.05);细胞划痕实验结果显示,NC+血清组细胞24h迁移率为(45.40±1.17)%,显著高于NC组的(19.27±0.31)%和模拟物+血清组的(22.36±5.55)%(P值均<0.01)。免疫印迹法检测结果显示,NC+血清组的Steap3蛋白质相对表达量为0.91±0.07,显著高于NC组的0.52±0.10和模拟物+血清组的0.15±0.01(P值均<0.01)。免疫荧光染色结果显示,Steap3蛋白质主要定位于细胞�
- 杨立国刘萃萃谭娟娟马江伟张立葛广豪刘化进严志强乔增勇
- 关键词：新生内膜增生增殖迁移
- 基于网络药理学研究柴胡达胸合剂治疗新型冠状病毒肺炎的作用机制被引量：5
- 2020年
- 目的基于网络药理学方法探讨柴胡达胸合剂治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在药理作用机制。方法利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)筛选柴胡达胸合剂活性成分和对应的作用靶点,并通过Uniprot数据库标准化靶点名称;在GeneCards和OMIM数据库检索冠状病毒相关基因,并与柴胡达胸合剂作用靶点取交集,筛选出治疗作用靶点;利用Cytoscape 3.7.2软件,构建和分析"药材-活性成分-靶点"网络图;通过String平台分析靶点蛋白相互作用,并使用R软件的相关包进行GO基因注释和KEGG信号通路分析。结果筛选出165个有效成分和51个作用靶点,进一步分析发现主要活性成分为β-谷甾醇和11个黄酮类化合物,核心作用靶点为CASP3、MAPK3、IL-6、MAPK8、IL-10、CXCL8、MAPK1、IL-1B等。GO基因注释得到GO条目共1 722个(P<0.05),其中生物学过程条目1 612个,细胞组成条目30个,分子功能条目80个。KEGG信号通路筛选出信号通路156条(P<0.05),富集基因较多的信号通路为糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、甲型流感、IL-17信号通路、TNF信号通路和乙型肝炎。结论该研究初步揭示了柴胡达胸合剂多成分、多靶点、多通路对COVID-19发挥治疗作用的特点,为进一步阐明柴胡达胸合剂治疗COVID-19的药理作用机制提供理论依据。
- 肖志军刘萃萃陆赛花蔡建徐峰
- 关键词：网络药理学分子机制信号通路
- 人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究被引量：1
- 2013年
- 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。
- 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNMT1MCF-7MDA-MB-231
