王玉平
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究被引量：1
- 2013年
- 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。
- 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNMT1MCF-7MDA-MB-231
- 术前外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值在乳腺癌诊断中的作用被引量：9
- 2018年
- 目的探讨术前外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)在乳腺癌诊断中的最佳临界值及其在临床诊断中的作用。方法选取131例行手术治疗的乳腺癌患者(乳腺癌组)和120例乳腺良性病变患者(乳腺良性疾病组),并以95名女性体检健康者作为正常对照组。采用SYSMEX XT-800i全自动血液分析仪计数中性粒细胞(NE)和淋巴细胞(LY),计算NLR;采用电化学发光法检测外周血糖类抗原15-3(CA15-3)、糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)水平。根据受试者工作特征(ROC)曲线确定最佳临界值。结果乳腺癌组术前NLR、NE、LY、CA15-3明显高于正常对照组和乳腺良性疾病组(P<0.05)。NLR的曲线下面积(AUC)为0.935,最佳临界值为1.995,敏感性为85.2%,特异性为87.1%。以NLR为检测基础,联合CA15-3诊断乳腺癌的敏感性为98.0%,特异性为92.6%。结论 NLR诊断乳腺癌的最佳临界值为1.995,联合CA15-3能增加乳腺癌诊断的敏感性和特异性,对乳腺癌的诊断、病情评估具有指导意义。
- 赵卫卫肖林林刘秀芬彭攸黄丁丁王玉平冯景
- 关键词：糖类抗原15-3乳腺癌
- EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义被引量：7
- 2015年
- 目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。
- 武萍萍陶然彭攸赵卫卫刘萃萃王璐璐胡朝晖王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNA甲基转移酶1
- miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。
- 刘萃萃王璐璐赵卫卫彭攸王玉平孙振亮冯景
- 关键词：乳腺癌EZH2EZH2
- 人EZH2基因编码区及3'非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3'UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。
- 彭攸赵卫卫李晓娇王玉平卢晓佳邬美玉冯景
- 关键词：EZH2基因红色荧光蛋白
- EZH2基因3'非翻译区慢病毒载体构建及重组体筛选被引量：1
- 2013年
- 目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR,构建携带EZH2基因3'UTR的重组慢病毒载体CTX-Lentivirus-EZH2 3'UTR,脂质体法将重组的慢病毒载体和包装载体混合物共转染工具细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。用裂解液裂解病毒颗粒,根据慢病毒载体上的CMV启动子表达量检测病毒滴度。用慢病毒颗粒感染乳腺癌MCF-7细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定整合的乳腺癌细胞MCF-7,用Real-Time PCR和Western blotting方法检测EZH2基因3'UTR是否整合入细胞MCF-7中。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序结果证实,EZH2基因3'UTR成功定向克隆到慢病毒载体上。Real-Time PCR检测病毒滴度为4.3×109拷贝/mL。筛选稳定整合MCF-7细胞的最佳浓度为0.2μg/mL。重组慢病毒转导MCF-7后,Real-Time PCR和Western blotting方法分别检测EZH2基因3'UTR整合到乳腺癌细胞MCF-7基因组中。慢病毒感染实验组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建携带EZH2基因3'UTR慢病毒筛选载体,实现重组体在乳腺癌MCF-7细胞中稳定整合。
- 赵卫卫彭攸李晓娇卢晓佳王玉平刘萃萃王璐璐冯景
- 关键词：EZH2非翻译区慢病毒载体MCF-7
