张亚波
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院植物病理学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 嗜热子囊菌光孢变种内切葡聚糖酶I基因在毕赤酵母中的表达及部分酶学性质被引量：2
- 2009年
- 嗜热子囊菌是一种嗜热真菌,可以产生具有很高工业价值的内切葡聚糖酶.本研究成功表达了嗜热子囊菌内切葡聚糖酶Ⅰ基因,并获得热稳定的重组内切葡聚糖酶.提取嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)总RNA,通过RT-PCR方法克隆出内切-β-葡聚糖酶eg1基因的成熟肽编码序列.采用基因重组的方法构建该基因的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K-eg1,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达内切葡聚糖酶Ⅰ的毕赤酵母工程菌株GpN24.该菌株采用甲醇诱导120h后,内切葡聚糖酶Ⅰ的活力可达570.7U/mL,最适温度为55℃,在90℃的条件下保温30min后仍具有60%的酶活力;最适pH为5.0,在pH3.0～5.0的条件下酶活力保持稳定.
- 张亚波刘连盟徐荣燕李多川
- 关键词：纤维素酶内切葡聚糖酶嗜热子囊菌光孢变种嗜热真菌毕赤酵母
- 纤细齿梗孢丝氨酸蛋白酶cDNA克隆及其序列分析和表达被引量：1
- 2010年
- 纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌。丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用。根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段。其可读框为1554bp(GenBank登录号为EU368754),编码517个氨基酸的蛋白质。比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构。将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml。重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD。其反应的最适温度为60℃,最适pH为8。
- 刘连盟张亚波李安娜李多川
- 关键词：菌寄生真菌丝氨酸蛋白酶CDNA克隆毕赤酵母
- 嗜热真菌热稳定纤维素酶的分子改造
- 纤维素是地球上分布最广、蕴藏量最丰富的生物质，也是最廉价的可再生资源，但是其中有大部分不能直接利用，成为纤维素废物。我国几乎所有的纤维素废物，如作物秸秆、废纸、废木料等，白白烧掉或直接丢弃。这种处理方式不但造成数十亿直接...
- 张亚波
- 关键词：嗜热真菌基因表达分子改造纤维素
- 文献传递
