- rAAV-CD151基因在大鼠缺血后肢血管再生中的作用及血管造影评分被引量：3
- 2005年
- 目的:研究肌肉转染重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生和血运重建的作用。方法:分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。Wistar大鼠12只,随机分为实验组和对照组,每组各6只。实验组大鼠左下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP,基因转染2周后行股动脉切除术建立左侧大鼠后肢缺血模型。通过后肢血管造影和缺血肌肉组织毛细血管密度检测,观察缺血肢体血管再生和评价血运重建情况。Western blot检测两组大鼠局部缺血肢体CD151表达。结果:股动脉切除术4周(基因转染6周)后,后肢血管造影结果显示实验组缺血侧血管评分平均为2.56±0.37,对照组平均为1.57±0.39;实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度为(609.00±83.89)/mm2,对照组为(517.00±70.65)/mm2;两组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达为对照组的2.96倍。结论:局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血组织的血运重建;CD151将为缺血性疾病的血管再生治疗提供新的靶点。
- 黄畦刘正湘蓝荣芳宋玉娥刘晓春张欣汪道文
- 关键词：血管造影术重组腺相关病毒血管再生
- 重组腺相关病毒介导CD151基因治疗心肌梗死后侧支循环形成
- 2009年
- 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导的CD151基因转染对小型猪心肌梗死模型后侧支循环重建的影响。方法中国实验用小型猪（清洁级，由华中农业大学种猪场提供）26头，随机分为：（1）正常对照组（n=4），健康小型猪，不进行任何手术处理；（2）rAAV-GFP组（n=7），结扎冠状动脉左前降支（left anterior descending，LAD）制备小型猪急性心肌梗死模型，心电监护显示Ⅰ、aVL导联ST段持续抬高20min为模型制备成功，同时，在左心室前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAV-GFP（1×10^11pfu／点）；（3）rAAV-CD151组（n=7），结扎LAD，左室前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAv-CD151；（4）rAAV-anti-CD151组（n=8），结扎LAD，左室前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAV-anti-CD151。8周后用Western Blot测定心肌组织CD151蛋白的表达，冠脉造影评价冠脉侧支循环形成情况。氯化三苯基四氮唑（TIC）染色显示心肌梗死面积。运用单因素方差分析进行统计学分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与正常对照组和rAAV-GFP组比较，rAAV-CD151组心肌组织局部CD151蛋白表达增加（P〈0．05）。冠状动脉造影证实CD151基因转染明显促进闭塞动脉的侧支循环建立。rAAV-CD151组心肌梗死面积百分比明显小于rAAV-GFP组[（12．82±2．26）％vs．（23．14±2．83）％，P〈0．05]，rAAV-anti-CD151组心肌梗死面积百分比（32．52±3．47）％明显大于rAAV-GFP组和rAAV-CD151组（P〈0．05）。结论CD151基因转染可以明显促进小型猪急性心肌梗死后侧支循环的建立，减小心肌梗死面积。
- 刘晓春左后娟刘正湘刘涛文莎刘少文汪道文张欣
- 关键词：急性心肌梗死模型重组腺相关病毒介导CD151基因治疗心肌梗死面积
- rAAV-CD151转染心肌梗死小型猪增加缺血心肌血流灌注
- 2009年
- 目的:观察CD151重组腺相关病毒转染心肌梗死小型猪模型对缺血心肌血流灌注的影响,以明确CD151在体内血运重建中的作用。方法:结扎小型猪左前降支建立心肌梗死动物模型。包装CD151、antiCD151和GFP重组腺相关病毒,分点注射至梗死心肌及周围心肌进行基因转染。8周后13N-NH3PET评价心肌血流灌注。结果:CD151基因转染促进心肌组织局部CD151表达增高,明显促进缺血心肌血流灌注。rAAV-CD151组灌注图像心肌缺血总分值为10.82±2.36,明显小于rAAV-GFP组19.33±1.67(P<0.01),而rAAV-an-tiCD151组缺损总分值25.18±2.73,明显大于rAAV-GFP组和rAAV-CD151组(P<0.01)。结论:CD151在体内具有明显的促血管生成作用,能明显促进心肌梗死后血运重建并增加缺血心肌血流灌注。
- 刘晓春左后娟刘正湘曾和松刘涛文莎汪道文张欣
- 关键词：心肌梗死CD151基因转染
- 高表达CD151细胞系的构建被引量：2
- 2004年
- 目的构建高表达CD151细胞系Tca8113CD151,为研究CD151在肿瘤细胞迁移及肿瘤转移中的作用和相关机制提供实验模型。方法构建pcDNA31CD151HA重组体,采用磷酸钙共沉淀法转染Tca8113细胞,经G418筛选抗性克隆。通过RTPCR和Westernblot分别检测这些克隆CD151基因的转录和翻译。结果成功构建真核表达重组体pcDNA31CD151HA;Tca8113CD151细胞系在mRNA和蛋白质水平高表达外源CD151。结论构建了稳定高表达CD151的细胞系Tca8113CD151,为探讨CD151基因在肿瘤转移中的作用及其相关机制奠定了实验基础。
- 蓝荣芳刘正湘宋玉娥刘晓春张欣
- 关键词：CD15细胞系TCA8113PCDNA3重组体
- CD151基因对心肌梗死心肌细胞凋亡和心功能的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨腺相关病毒介导的CD151在急性心肌梗死(AMI)对小型猪心肌细胞凋亡及心功能的影响。方法建立猪AMI模型,随机分为4组,分别给心肌内注入腺相关病毒介导的GFP基因(rAAV-GFP)6只、腺相关病毒介导的CD151基因(rAAV-CD151)8只、腺相关病毒介导的反义CD151基因(rAAV-antiCD151)6只,假手术组(Con-trol)6只为对照,动物在心梗后第56d处死,处死前应用超声心动图测量心功能参数,末端原位标记TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果心功能参数(射血分数(EF))rAAV-CD151组(65.65±4.61)低于Control组(73.26±4.24)(P<0.05),高于rAAV-GFP组(54.71±5.26)及rAAV-antiCD151组(37.45±3.96)(P<0.05)。凋亡指数rAAV-CD151组(2.21±0.35)小于rAAV-GFP组(14.05±0.17)及rAAV-antiCD151组(18.20±0.73)(P<0.05),rAAV-CD151组略多于Control(1.83±0.98),两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论腺相关病毒介导的CD151基因治疗能明显减少心肌细胞凋亡,改善心功能。
- 刘涛秦瑾刘正湘左后娟汪道文张欣
- 关键词：CD151心肌细胞凋亡心功能
- 一氧化氮合酶在门脉高压脾脏及脾静脉中的分布被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨一氧化氮 (NO)在门脉高压发病机制中的作用。方法 运用还原型辅酶Ⅱ 黄递酶 (NADPH d)组织化学法对门脉高压患者及动物模型的脾脏及脾静脉中一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)进行定位研究 ,并以正常大鼠及外伤性脾破裂脾切除患者作为对照。结果 门脉高压组脾脏及脾静脉内NOS阳性细胞较对照组明显增多 ,染色增强 ,计算机图像半定量分析示两组灰度及光度值具显著性差异 (P <0 0 1)。
- 王天才张欣唐望先梁扩寰
- 关键词：一氧化氮合酶脾静脉发病机制组织化学法
- AAV介导的CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生和血运重建的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的研究肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生和血运重建的作用。方法分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。将12只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组各6只。实验组大鼠左下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。基因转染2周后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型。通过后肢皮肤温度测定、后肢血管造影和缺血肌肉组织毛细血管密度检测,观察缺血肢体血管再生和评价血运重建情况。Western blot检测两组大鼠缺血肢体局部CD151的表达。结果股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度为(32.92±0.63)℃,对照组为(31.22±0.87)℃;后肢血管造影结果显示实验组缺血侧血管评分平均为(2.56±0.37),对照组平均为(1.57±0.39);实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度为(609.00±83.89)/mm2,对照组为(517.00±70.65)/mm2;两组比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达为对照组的2.96倍。结论局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血器官的血运重建和功能恢复。CD151将为缺血性疾病的血管再生治疗提供新的靶点。
- 康基顺刘正湘蓝荣芳宋玉娥刘晓春张欣汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒后肢缺血血管再生
- rAAV-CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生的功能评价
- 2006年
- 目的:观察肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生作用并进行功能评价。方法:实验于2003-01/2005-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管研究室暨基因治疗研究中心完成。①分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。②Wistar大鼠12只,采用随机数字法分为实验组和对照组,每组各6只。③实验组大鼠右下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。④基因转染2周后行股动脉切除术建立右侧大鼠后肢缺血模型。心内注入红四氮唑观察大鼠下肢变化,根据组织染色的部位或染色的深浅程度判断后肢缺血模型建立是否成功。⑤于模型建立术前、术后2d、术后1,2,3,4周进行缺血后肢的损伤评分,分为0～3分,3分为患肢爬行托拽,或者肢体有缺血性坏疽;0分为抗牵拉时患侧足底与对侧肢体外观无明显区别。⑥采用Westernblot检测两组大鼠局部缺血肢体CD151的表达。⑦股动脉切除术4周后,采用非致冷红外热成像仪分别检测大鼠后肢皮肤温度、免疫组织化学检测缺血肌肉组织毛细血管密度,观察缺血肢体血管再生情况。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度高于对照组((32.92±0.63),(31.22±0.87)℃,P<0.05)。②Westernblot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达显著高于对照组。③实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度显著大于对照组(609.00±83.89),(517.00±70.65)/mm2,P<0.05)。④术后4周肢体功能的损伤评分实验组显著低于对照组(0.67±0.21,1.67±0.32,P<0.05)。结论:局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血肢体的血运重建和功能恢复。
- 刘曌宇刘正湘宋玉娥刘晓春张欣
- 关键词：基因腺病毒科
- 重组腺相关病毒介导CD151转染心肌梗死小型猪促进心肌功能性血管形成被引量：1
- 2009年
- 目的观察重组腺相关病毒（rAAV）介导的CD151基因转染促小型猪心肌梗死后心肌血管形成的有效性。方法结扎小型猪冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，梗死区及梗死周围心肌分别注射rAAV—CD151、rAAV—anti-CD151和rAAV-绿色荧光蛋白（rAAV-GFP）。8周后用Western blot分析心肌组织CD151蛋白表达，免疫组化检测心肌微血管密度和小动脉密度，用13^N-NH3电子发射计算机断层心脏显影（PET）评价心肌血流灌注。结果CD151基因转染促进心肌组织局部CD151高表达。rAAV—CD151组心肌微血管密度为（83．8±6．7）个／mm^2，明显高于正常对照组的（33．2±4．5）个／mm^2和rAAV—GFP组的（41．6±5．6）个／mm^2，均P〈0．05；rAAV—CD151组小动脉密度为（16．4±2．5）个／mm^2，也明显高于正常对照组的（6．6±2．3）个／mm^2和rAAV—GFP组（8．4±1．6）个／mm^2，均P〈0．05。rAAV—anti—CD151组心肌微血管密度和小动脉密度明显低于其他各组。13^N-NH3PET心肌血流灌注显像示rAAV—CD151组缺血区心肌血流灌注明显增加，rAAV-anti-CD151组血流灌注减少。结论CD151基因转染能增加小型猪局部心肌组织的CD151表达，明显增加缺血心肌微血管和小动脉的生成，并显著增加心肌血流灌注。
- 左后娟刘正湘刘晓春曾和松文莎刘涛汪道文张欣
- 关键词：心肌梗死腺相关病毒
- CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响被引量：17
- 2005年
- 背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。
- 蓝荣芳刘正湘宋玉娥张欣汪道文
- 关键词：TCA8113细胞重组腺相关病毒细胞迁移
