张永红
- 作品数：10 被引量：16H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鲁西黄牛α干扰素基因的原核表达及其抗血清的制备
- 2009年
- 采用PCR方法从鲁西黄牛基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含1个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后免疫昆明系小鼠2次,制备高滴度的牛IFN-α抗血清。结果从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,实现了高效表达和纯化,并制备了鼠抗牛IFN-α,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
- 张永红王长法李景鹏
- 关键词：黄牛抗血清
- 乙醇脱氢酶Ⅰ类基因全长cDNA的克隆与表达被引量：1
- 2007年
- Ⅰ类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1,ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶Ⅰ类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过其在340 nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1,ADH2和ADH3的酶活力分别为2.0±0.3,0.8±0.2,1.5±0.2 U.mg-1。
- 周文婷崔羽王晓燕张永红李世荣李景鹏
- 关键词：基因克隆原核表达
- 动物γ干扰素基因研究进展被引量：1
- 2009年
- 干扰素(IFN)是细胞和机体受到病毒感染,或者受核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等作用后,由受体细胞分泌的一种广谱抗病毒糖蛋白,具有种属特异性、作用广谱性及无害性等生物学性质。IFN不仅有免疫活性,而且还是体内一种递质和激素样物质,具有抗病毒繁殖、抗细胞分裂增殖及调节机体免疫三大基本功能。本文就白兔、牛、马、犬、鸡的干扰素γ基因进行综述。
- 张永红朱丽鄂晓丹
- 关键词：干扰素Γ基因
- 鲁西黄牛α干扰素成熟蛋白基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 根据GenBank上发表的牛α干扰素基因序列,设计了一对特异性引物。提取黄牛血液中白细胞基因组DNA,PCR扩增出α干扰素基因,并与pMD18-T克隆载体相连。测序结果表明,扩增片段含有498个核苷酸,编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型最相近,氨基酸序列同源性为97.6%。获得BoIFNα-成熟蛋白基因,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
- 张永红王长法杨少华高运东王洪梅李景鹏仲跻峰
- 关键词：鲁西黄牛克隆
- 乙醇脱氢酶Ⅰ类基因全长cDNA的克隆与表达(英文)
- 2007年
- 目的:克隆编码人Ⅰ类乙醇脱氢酶基因,并探讨Ⅰ类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中的作用。方法:从胎儿肝,肾提取的总RNA;经RT-PCR扩增得到cDNA并克隆至pGEM-T载体。cDNA序列用Kpn I和Pst I酶切鉴定,并检测其在大肠杆菌中表达活性。通过吸光法检测酶的活性。结果:成功克隆了人Ⅰ类乙醇脱氢酶并在大肠杆菌中获得稳定表达。经检测其酶活性分别为0．81～1．31U/mg、0．09～0．15U/mg和0．76～1．11U/mg。结论:cDNA克隆成功,并发现其与肝脏中分离的酶具有相似的活性。
- 周文婷李景鹏崔羽张永红李世荣
- 关键词：CDNA克隆酶活性检测
- 鲁西黄牛α干扰素基因克隆表达及其活性研究
- 张永红
- 关键词：鲁西黄牛抗病毒活性抗血清
- 鲁西黄牛α干扰素基因的克隆及表达被引量：7
- 2007年
- 提取黄牛血液基因组DNA,PCR扩增α干扰素基因,重组到pET32a+表达载体中。测序结果表明,扩增片段含有498bp的ORF,可编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。构建原核表达载体pET32a+/BoIFN-α,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为40ku,表达量占菌体总蛋白的26.7%。结果从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,构建原核表达质粒,并实现了高效表达,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
- 张永红王长法杨少华高运东李爱芹王洪梅李景鹏仲跻峰
- 关键词：黄牛克隆
- 重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究被引量：7
- 2007年
- 通过PCR从鲁西黄牛(Yellowcattle)基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后在MDBK/VSV上的活性为5×105u/mg。重组牛IFN-α(rBoIFN-α)对牛轮状病毒(BRV)有一定的抑制作用,抗BRV病毒活性为1.5×105u/mg。结果显示从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,并实现了高效表达,获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
- 张永红王长法杨少华高运东王洪梅李景鹏仲跻峰
- 关键词：黄牛抗病毒活性
- 鲁西黄牛IFN-α基因克隆及其真核表达质粒的构建
- 2006年
- 为研发牛α干扰素制剂，根据已发表的牛α干扰素基因序列设计一对引物。提取黄牛血液中白细胞基因组DNA，PCR扩增出α干扰素基因，并克隆到pMD18-T载体。测序结果表明，扩增片段含有570bp核苷酸，编码189个氨基酸，与已报道的牛α干扰素亚型氨基酸序列同源性在93．1％～95．2％之间。该基因与真核表达载体pcDNA3．1＋相连，构建真核表达质粒，为牛α干扰素的临床应用奠定了基础。
- 张永红王长法杨少华王洪梅高运东李景鹏仲跻峰
- 关键词：Α干扰素真核表达鲁西黄牛
- 鲁西黄牛α干扰素基因分析
- 2009年
- 本研究通过PCR从鲁西黄牛基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并进行了测序。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。
- 张永红
- 关键词：黄牛测序
