朱嵩
- 作品数：24 被引量：39H指数：4
- 供职机构：济南大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学核科学技术自动化与计算机技术更多>>
- pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定
- 2018年
- 目的构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。方法根据HBs Ag基因序列和pc DNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBs Ag基因,经酶切、连接、转化,利用HBs Ag基因替换p30基因,构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBs Ag-ROP2片段与p EGFP-N1真核表达载体相连,构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBs Ag片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与Gen Bank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论成功构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。
- 马荣肖婷李瑾孙慧徐超徐超尹昆尹昆赵桂华崔勇朱嵩刘功振魏庆宽
- 关键词：乙型肝炎PEGFP-N1质粒构建
- 弓形虫表面抗原IMP1的克隆原核表达及免疫学鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的克隆刚地弓形虫强毒RH株的表面抗原免疫作图蛋白1(Immune mapped protein-1,IMP1),并对其进行原核表达纯化、鉴定。方法采用逆转录法合成刚地弓形虫RH株的第一链c DNA,以此为模板,用PCR法扩增野生型IMP1基因的最大开放阅读框(ORF)序列,TA克隆测序鉴定后,插入原核表达载体p ET28b中,构建重组表达载体p ET28bIMP1,经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达携带6×组氨酸标签的IMP1融合蛋白,改变温度、诱导时间和IPTG浓度以优化诱导表达条件并测定蛋白可溶性,通过镍离子螯合(Ni2+-NTA)亲和层析纯化IMP1融合蛋白,经Western blotting验证重组蛋白的特异性。结果在弓形虫RH株速殖子c DNA中成功调取了IMP1基因的ORF序列,并通过TA克隆和测序鉴定了IMP1基因的正确性,在此基础上构建了原核表达重组质粒p ET28b-IMP1,经双酶切和测序验证了重组载体的正确性,并通过条件筛选确定了IMP1的最佳表达条件为20℃下0.3 mmol/L IPTG诱导9 h。经镍柱亲和层析纯化后,IMP1全蛋白表达量和可溶性均较好,与镍柱填料有较高的亲和力,能实现高效纯化。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,IMP1具有良好的免疫活性。结论新型强毒弓形虫RH株的表面抗原IMP1可在大肠杆菌原核表达系统中高效表达,全长蛋白可溶,性状稳定。本研究为进一步制备IMP1多克隆抗体,进行后续的体内表达研究以及抗弓形虫感染亚单位疫苗的构建和IMP1晶体结构研究奠定了基础。
- 寇景轩赵桂华魏庆宽徐超朱嵩尹昆
- 关键词：弓形虫表面抗原原核表达
- 3种方法提取血膜疟原虫DNA的比较研究被引量：1
- 2014年
- 目的对3种提取血膜疟原虫DNA的方法进行比较研究，筛选出从血膜中提取疟原虫DNA的最佳方法。方法血膜依次经过二甲苯脱油和乙醇脱色处理，然后分别采用NazHPO。法、Chelex-100法和试剂盒法提取DNA。根据疟原虫小亚基核糖体RNA编码基因（18SSSUrRNA）保守区设计套式PCR引物，分别以3种方法提取的疟原虫DNA为模板进行套式PCR扩增，并对扩增产物进行测序分析。结果疟原虫新血膜（保存1年内）3种方法提取的DNA经PCR扩增后均呈阳性且测序成功，与镜检结果一致。Chelex-100法提取的旧血膜（保存1～5年）标本和试剂盒法提取的旧血膜和陈旧血膜（保存6～10年）的DNA经PCR扩增后均呈阳性且测序成功，与镜检结果一致。结论3种方法均可成功提取新血膜疟原虫DNA，Chelex-100法可提取旧血膜的疟原虫DNA，试剂盒提取法适用于旧血膜和陈旧血膜的疟原虫DNA的提取。
- 肖婷徐超李瑾魏庆宽尹昆朱嵩孔祥礼赵长磊黄炳成
- 关键词：疟原虫血膜提取DNA
- 乙肝表面抗原和弓形虫棒状体分泌抗原多功能真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化、酶切、连接等技术,将HBsAg基因替换pcD-NA3-p30-ROP2中的p30基因,并进行酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增出约0.7 kb的目的基因HBsAg,成功构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组载体。PCR、酶切结果与理论相符,重组体包含了HBsAg和ROP2基因的完整序列。结论利用体外扩增乙肝表面抗原,可成功构建乙肝和弓形虫多功能重组载体pcDNA3-HBsAg-ROP2。
- 魏庆宽肖婷李瑾马丽萍王林王英婷闫运琴高建丽朱嵩仲维霞尹昆付斌张佃波闫歌黄炳成
- 关键词：弓形虫基因重组
- pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
- 2018年
- 目的构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体并进行293T细胞的转染表达。方法根据pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2重组质粒设计引物,进行PCR扩增,获得HBsAg-p30-ROP2融合基因并进行酶切,酶切片段与pEGFP-N1载体连接,构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体,酶切和测序鉴定后转染293T细胞,采用荧光、Western blot和ELISA检测其蛋白表达效率;分别用P30单抗腹水、ROP2鼠源多抗、乙肝患者血清进行ELISA,检测融合蛋白的免疫反应性。结果 PCR扩增HBsAg-p30-ROP2基因片段约2 600bp,与理论值相符。构建的重组质粒pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2经双酶切获到约4 700bp和约2 600bp的两条片段,与预期相符。对重组载体测序,HBsAg基因的252位C→A,345位T→C,ROP2基因的695位A→T,且3个碱基突变均为同义突变。免疫荧光法检测pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2转染成功并正确表达,细胞蛋白浓度2.40mg/ml。提取的融合蛋白能被弓形虫p30单抗腹水、ROP2鼠源多抗和乙肝患者血清识别。结论成功构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体,并在293T细胞中过表达,表达蛋白具有免疫反应性,为乙肝和弓形虫联合疫苗的研制奠定了基础。
- 肖婷毛德华李瑾黄炳成徐超尹昆王龙江赵桂华崔勇朱嵩刘功振魏庆宽孙慧
- 关键词：PEGFP-N1
- siRNA腺病毒体内抑制Survivin基因表达诱导裸鼠肿瘤细胞凋亡的研究被引量：2
- 2008年
- 目的利用腺病毒siRNA载体介导的RNA干扰技术,在免疫缺陷鼠肝癌肿瘤动物模型中通过靶向沉默细胞凋亡因子Survivin的表达,探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用。方法利用肝癌细胞株HepG2构建裸鼠肝癌肿瘤细胞动物模型,并按照病毒注射剂量分组,将已构建的Survivin-siRNA重组腺病毒注射入裸鼠肿瘤内,观察肿瘤生长状况并绘制肿瘤生长曲线,利用TUNEL反应测定肿瘤组织细胞内DNA的片段化观察细胞凋亡。结果注射AdsiR- NA-Survivin高、低剂量组肿瘤生长明显受到抑制,且抑制程度与注射的腺病毒浓度呈正相关;TUNEL实验表明注射AdsiRNA-Survivin高、低剂量组的肿瘤组织标本可见大量细胞核呈黄褐色、核质浓缩、细胞形态不规则的凋亡细胞。高剂量组、低剂量组、AdsiRNA-U6组、PBS组凋亡细胞数依次减少。结论腺病毒siRNA载体系统可应用于活体动物试验中;AdsiRNA-Survivin对裸鼠人肝癌移植瘤有明显抑制作用,与肿瘤感染数或浓度成正比,且能促进人肝癌肿瘤细胞的凋亡。
- 尹昆刘俏俏朱嵩闫歌
- 关键词：SURVIVIN裸鼠动物模型凋亡
- 输入性恶性疟原虫耐药相关基因Pfcrt和Pfmdr1单倍型及突变分析被引量：2
- 2016年
- 目的了解目前山东省输入性恶性疟原虫抗药性基因Pfcrt和Pfmdr1的单倍型,分析突变基因型及其分布情况。方法根据恶性疟原虫Pfcrt和Pfmdr1基因序列设计套式PCR引物,对采自全省非洲务工返乡的输入性恶性疟感染者血样扩增,并对其产物进行基因测序和序列对比分析。结果 68例样本Pfcrt基因第72~76位点和Pfmdr1基因第86、1 042和1 246位点目的片段全部成功扩增和测序。Pfcrt基因中69.12%为野生单倍型CVMNK,30.88%为突变单倍型,突变型包括CVIET、CVIDT及混合型,其中CVIET数量最多。Pfmdr1基因中69.12%为野生单倍型NND,30.88%为突变单倍型,即YND及混合基因型。6个非洲输入来源国样本中,除几内亚Pfcrt基因全部为野生型外,其它国家Pfcrt和Pfmdr1基因均有突变型存在。5例样本Pfcrt和Pfmdr1基因共同表现为突变单倍型。结论山东省输入性恶性疟Pfcrt和Pfmdr1基因突变单倍型具有多样化特征。Pfcrt和Pfmdr1突变型比例均低于野生型,提示目前该省流行的输入性恶性疟未出现严重的氯喹耐药性。
- 徐超魏庆宽李瑾肖婷尹昆孔祥礼王用斌崔勇孙慧赵桂华朱嵩闫歌黄炳成
- 关键词：恶性疟原虫输入性病例单倍型
- 刚地弓形虫在终末宿主阶段的研究进展被引量：6
- 2019年
- 弓形虫病在我国人群及动物间广泛流行,感染率逐年上升,危害严重。其原因之一是我国饲养猫及流浪猫的数量不断增加。猫在弓形虫病的传播流行过程中承担重要的角色,它是弓形虫最为常见的终末宿主,在其体内进行有性生殖,产生大量卵囊;饲养猫、接触猫以及接触卵囊感染的水、土壤和食物是人类及动物感染弓形虫病的重要危险因素。但目前缺少有效的治疗药物及预防措施,为探寻有效降低或阻断弓形虫病在我国广泛流行的预防措施,本文分析了弓形虫病在我国猫体内的流行状况及特点,对弓形虫在终末宿主内的发育及卵囊、裂殖子的研究进展进行综述。
- 赵桂华姚营营徐超朱嵩尹昆
- 关键词：刚地弓形虫终末宿主卵囊裂殖子
- 靶向弓形虫Rop18的小分子抑制剂骨架及活性
- 目的 Rop18是强毒Ⅰ型弓形虫株的毒力决定因子，可通过其激酶活性结合宿主胞内免疫相关GTP酶IRGs和转录因子ATF6β，分阶段抑制宿主的先天和获得性免疫反应。筛选靶向Rop18激酶结构域的小分子抑制物，可为开发生物活...
- 赵桂华徐超朱嵩肖婷尹昆
- 关键词：激酶抑制剂药效团
- 弓形虫免疫作图蛋白1在大肠埃希菌中的重组表达及纯化
- 目的:克隆刚地弓形虫强毒RH株的免疫作图蛋白1(IMP1),并在大肠埃希菌内进行重组表达、纯化和鉴定.
方法:以刚地弓形虫RH株的cDNA为模板,PCR(聚合酶链反应)扩增IMP1基因的完整开放阅读框(ORF序...
- 尹昆刘功振李瑾徐超朱嵩李琛琛赵桂华
- 关键词：弓形虫大肠埃希菌可溶性表达蛋白纯化
- 文献传递
