李晓艳 作品数:96 被引量:314 H指数:10 供职机构: 中山大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
转化生长因子β1及其信号蛋白在大鼠急性腹膜炎模型腹膜组织中的表达及作用 被引量:14 2004年 目的 通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)及其信号蛋白Smads的表达水平和活性状况,探讨其在细菌性腹膜炎介导腹膜纤维化过程中的可能作用。方法 通过腹腔注射E.coli ATCC25922造成大鼠急性细菌性腹膜炎的动物模型。应用激光共聚焦显微镜检测TGF-β1、p-Smad2/3和Smad7在大鼠腹膜组织的表达和活化,以单位面积的平均荧光强度半定量地分析其蛋白水平的表达及动态变化。应用RT-PCR的方法分析TGF-β1、Smad3和Smad7在基因水平的表达。结果 E.coli腹腔注射后大鼠血白细胞显著降低而腹水白细胞显著升高。组织学显示间皮下层水肿样增厚,脏层和壁层腹膜大量炎症细胞灶性浸润。免疫荧光结果显示TGF-β1和p-Smad2/3广泛表达于炎症细胞、间皮细胞和血管内皮细胞。半定量的免疫荧光结果显示TGF-β1、p-Smad2/3和Smad7的表达都呈双峰样上调,但Smad7的整体表达水平一直很低。TGF-β1、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平与其蛋白表达水平基本一致。结论炎症状态下腹膜组织TGF-β1/Smad信号通路显著上调和激活。腹膜间皮细胞的活化以及其TGF-β1和p-Smad2/3的高表达,抑制性信号蛋白Smad7的低表达,可能参与了腹膜炎介导腹膜纤维化的过程。 王欣 余学清 贾占军 郑智华 陈文芳 李晓艳 彭文兴 窦献蕊 孙辽关键词:TGF-Β1 SMAD7 SMAD2 腹膜组织 信号蛋白 腹膜透析液诱导结缔组织生长因子在大鼠腹膜间皮细胞表达 被引量:20 2006年 目的研究应用不同腹膜透析液对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)合成的影响。方法分离培养的RPMC分为6组,分别以不同腹膜透析液[1.5% Dextrose(低糖组)、2.5%Dextrose(中糖组)、4.25%Dextrose(高糖组)、7.5%Icodextrin(糊精组)] 进行刺激培养,而无血清DMEM为阴性对照(对照组),TGF-β1(2.5 ng/ml)为阳性对照(阳性对照组)。刺激培养24 h后,RT-PCR法检测RPMCs的CTGF mRNA、胶原I mRNA、α-SMA mRNA 表达。Western印迹法检测RPMCs的CTGF、胶原I、α-SMA蛋白表达以及培养上清中的CTGF蛋白表达。结果各组均见CTGF mRNA表达,高糖组、阳性对照组CTGF mRNA表达水平显著高于中糖组、低糖组及对照组(P<0.05);中糖组与糊精组CTGF mRNA表达亦显著上调(P< 0.05)。各组细胞均检测到CTGF蛋白质表达,为相对分子质量38 000及25 000的2种亚型,与 RT-PCB结果一致。高糖组、阳性对照组CTGF蛋白表达水平显著高于糊精组、中糖组、低糖组及对照组(P<0.05)。RPMCs培养上清液中检测出CTGF 38 000亚型的表达,其表达强弱趋势与 CTGF在细胞中表达一致。高糖组、阳性对照组胶原I mRNA、蛋白质的表达水平显著高于对照组 (P<0.05),其余各组间无显著性差异。各组α-SMA mRNA、蛋白质表达未见显著性差异(P> 0.05)。结论正常培养的RPMCs表达低水平的CTGF。腹膜透析液、尤其是高浓度葡萄糖透析液,能明显上调CTGF表达的水平,这可能是导致长期腹膜透析过程中腹膜结构改变的机制之一。糊精腹膜透析液生物相容性可能优于高浓度葡萄糖透析液。 郭群英 李晓艳 余学清 阳晓 陈伟英 陈崴 郑勋华 董秀清关键词:腹膜透析 结缔组织生长因子 腹膜透析液 生物相容性 Survivin和RhoA双基因沉默对卵巢癌细胞的增殖与侵袭影响 被引量:1 2013年 目的:探讨RNA干扰(RNAi)双向沉默Survivin和RhoA基因表达对人卵巢癌HO8910PM细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:构建Survivin和RhoA基因的串联microRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA),通过脂质体介导转染人卵巢癌HO8910PM细胞作为实验组,对照组为空载体转染组。转染48小时后,RT-PCR检测Survivin和RhoA的mRNA表达,Western-Blot检测Survivin和RhoA的蛋白质表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞术检测转染后卵巢癌细胞的增殖、侵袭及凋亡情况。结果:Survivin-RhoA-microRNA明显抑制了HO8910PM细胞中Survivin和RhoA基因mRNA和蛋白的表达:转染48小时后,实验组Survivin mRNA和RhoA mRNA表达抑制率分别为68.82%、90.23%,Survivin和RhoA蛋白表达抑制率分别为63.91%、88.47%;MTT分析显示实验组细胞OD490的值为0.706±0.177,较对照组(1.172±0.241)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测实验组细胞凋亡率为36.41±3.34%,较对照组(2.92±0.78%)明显升高(P<0.01);实验组细胞侵袭百分比为12.56±6.17%,较对照组(32.96±5.14%)明显降低(P<0.05)。结论:成功构建Survivin和RhoA串联microRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA)。Survivin和RhoA双基因沉默显著抑制了卵巢癌HO8910PM细胞的增殖和侵袭能力,并增加其凋亡率,两者具有协同作用,为双靶点治疗卵巢癌提供了新的思路和策略。 刘筱群 刘启才 康佳丽 李晓艳 付欣关键词:靶向沉默 卵巢癌 SURVIVIN RHOA 细胞侵袭 NP9基因在鼻咽癌中的表达及对CNE1细胞生长的影响 被引量:9 2004年 刘启才 李晓艳 韦拔雄 方嬿关键词:鼻咽癌 基因表达 恶性肿瘤 流行病学 TRAF-2在免疫复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子中的作用 目的我们曾报道SLE患者外周血单个核细胞TNFα信号通路中主要受体衔接蛋白TRADD、RIP和TRAF-2的表达显著降低且与狼疮活动指数呈负相关关系,并且Ⅲ型和Ⅳ型狼疮肾炎(LN)患者肾活检组织中TNFα、 朱浪静 阳晓 李晓艳 孔庆瑜 董秀清 余学清文献传递 糖基化终产物对肾小管上皮细胞TGF-β/Smads信号通路及其基质生成的影响 目的从TGF—β/Smads信号通路的角度,探讨糖基化终产物促进肾小管上皮细胞转分化及基质生成的分子机制。方法糖基化终产物(AGE—BSA)的制备:牛血清白蛋白(BSA40mg/ml)溶解于含有0.2M D-葡萄糖的PB... 孙辽 余学清 祝胜郎 陈文芳 娄宁 贾占军 王欣 窦献蕊 李晓艳文献传递 狼疮肾炎病人尿蛋白刺激肾小管上皮细胞发生表型改变和Ⅰ型胶原的表达上调 被引量:3 2007年 目的探讨狼疮性肾炎尿蛋白引起肾小管间质纤维化的发生机制。方法收集初发狼疮性肾炎病人的尿液(6例)提纯总蛋白,体外与 HK-2细胞培养不同时间(0、1、2、12、24、48 h),应用逆转录-聚合酶链式反应法检测 HK-2细胞转化生长因子β_1(TGF-β_1)、Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)及仪平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA 的表达;应用 Western 印迹及间接免疫荧光法检测 TGF-β_1、COL Ⅰ及α-SMA 的蛋白表达。结果狼疮性肾炎尿蛋白可以刺激 HK-2细胞 TGF-β_1、COL Ⅰ及α-SMA mRNA及蛋白表达上调[(0,48 h 分别为 TGF-β_1 mRNA 0.39±0.03 vs 0.27±0.02(P<0.01),TGF-β_1蛋白0.37±0.03 vs 0.27±0.04,(P<0.01);COL Ⅰ mRNA 0.38±0.02 vs 0.22±0.03,(P<0.01),COL Ⅰ蛋白0.44±0.03 vs 0.19±0.02,(P<0.01);α-SMA mRNA 0.66±0.04 vs 0.44±0.03,(P<0.01),α-SMA 蛋白0.43±0.02 vs 0.24±0.03,(P<0.01)]。结论狼疮性肾炎尿蛋白诱导 HK-2细胞发生表型转化及产生细胞外基质增多,可能是肾间质性纤维化的发生机制之一。 刘冠贤 邓安国 余学清 段文娟 文琼 骆宁 李晓艳NP9对鼻咽癌细胞系CNE1基因表达谱的影响 被引量:5 2008年 目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差异。结果:所分析的14500个基因中,266个检测出有表达差异,其中82个基因呈现表达上调(RA>1),184个基因显示表达下调(RA<1)。显著上调和下调的基因分别为34个(RA>1.5)和75个(RA<1.5)。结论:NP9基因的表达导致了CNE1细胞中与细胞周期调控、细胞增殖和分化、细胞信号转导、细胞黏附相关基因表达的改变,为NP9的功能及分子机制研究提供了新的线索。 刘启才 李晓艳 彭燕 李晓岩 李冰关键词:鼻咽肿瘤 基因 基因表达 CNE1细胞 幽门螺杆菌Cag A对AGS细胞生物学行为的影响 目的探讨幽门螺杆菌 Cag A 对 AGS 细胞生物学行为的影响。方法以 CagA 野生型幽门螺杆菌菌株和 CagA 突变型幽门螺杆菌菌株(同基因突变体)为实验对照诱导体系,采用电子显微镜、侵袭实验 宋鑫 陈惠新 陈洁 白爱平 李晓艳 胡品津 陈旻湖文献传递 一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A表达的影响 2008年 目的:探讨在体外一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A(SP-A)mRNA和蛋白表达的影响。方法:Ⅱ级SD雄性大鼠,腹腔注射25ml0.25%胰蛋白酶消化液后,2h后处死大鼠,获取的腹膜间皮细胞用DMEM/F12培养液(含10%FBS)培养于6孔培养板中,待细胞传致第3代时,加入不同浓度的SNAP(nirtic oxide donor)分为:正常对照组、0.6μmol/LSNAP组、0.9μmol/L SNAP组、1.2μmol/L SNAP组、2.4μmol/L SNAP组,每个组6孔,培养24h后提取细胞RNA及蛋白;另外,将1.2μmol/L SNAP与腹膜间皮一起培养,分别于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h及48h时提取细胞RNA及蛋白。分别用RT-PCR及Western blot检测腹膜间皮细胞SP-A mRNA的表达和蛋白的合成。结果:与正常对照组相比,SNAP能抑制SP-A mRNA的表达和蛋白的合成(P<0.05),且随着SNAP浓度的增高而增加,当SNAP浓度为1.2μmol/L时,随着培养时间的增加,SP-A mRNA的表达和蛋白的合成也逐渐被抑制。结论:一氧化氮能抑制腹膜间皮细胞SP-AmRNA的表达和蛋白的合成,且呈剂量及时间依赖性。 黄胜 阳晓 李晓艳 彭文兴 罗福漳 曾健 李幼姬关键词:一氧化氮 腹膜间皮细胞 表面蛋白