李毅
- 作品数：20 被引量：40H指数：3
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 用巢式PCR法检测武汉地区育龄妇女细小病毒B19感染的研究
- 人类细小病毒B19(human parvovirus B19,简称B19),属细小病毒科,细小病毒亚科,红细胞病属,是一种单链、线状DNA病毒。B19感染多发生在秋末、春季和夏初,几乎呈世界范围分布。B19可引起许多临床...
- 邓雪锋朱云云菅新艳冯志鸿董衍明李毅
- 文献传递
- 细小病毒磷脂酶(vPLA2)：抗病毒药物的靶标
- 人类细小病毒 B19(human parvovirus B19)分布广,危害很大,但目前在我国还没有引起应有的关注。再生障碍危象和儿童传染性红斑症(第五号症)是 B19 病毒感染后最常见的临床症状。许多疾病与该病毒有关,...
- 李毅
- 文献传递
- 黑胸散白蚁(Reticulitermes chinese Snyder)肠道纤维素酶GHF7基因的克隆与分析
- 纤维素是地球上最为丰富的生物资源,也是重要的工业原料和可再生性能源物质。白蚁是自然界能够降解纤维素的为数不多的昆虫之一,其对纤维素的降解与体内不同来源的纤维素酶密切相关。本文报道了以广泛分布于我国的黑胸散白蚁(Retic...
- 杜蕾蕾杨红彭建新李毅李爱英洪华珠
- 文献传递
- 人细小病毒B19-VP1u保守区外C端氨基酸对sPLA2活性的影响
- 2012年
- 为探寻人细小病毒B19-VP1u保守区外氨基酸序列对sPLA2活性的影响,依次截短B19-VP1u保守区外C端的氨基酸序列,表达纯化截短突变的蛋白后分别检测其sPLA2活性。结果显示,截短7个氨基酸时,酶活性没有明显变化;截短15个氨基酸时,酶活性显著降低;截短23个氨基酸时,几乎没有酶活性。表明保守区外C端的第8～24个氨基酸之间的序列对酶活性有显著影响,推测其在维持酶的正确三维结构中起重要作用。
- 黄玉赵丹李毅
- 关键词：B19SPLA2C末端
- 用巢式PCR检测育龄妇女人群人细小病毒B19感染的研究被引量：4
- 2010年
- 目的调查人类细小病毒B19在武汉地区普通人群，尤其是育龄妇女中的感染状况。方法采集武汉地区2家医院的血液样本1700份，分为两组。以血清中提取的DNA为模板，进行巢式PCR扩增。结果第Ⅰ组（普通组，包括男性和女性）阳性检测率为4．50％，第Ⅱ组（妇女组）阳性检测率为8．33％。结论武汉地区育龄妇女的B19感染率高于普通人群，很有必要对孕妇进行诊断从而预防新生儿感染B19病毒。另外，由于巢式PCR具有灵敏、特异、简便等优点，适合于用来检测血液样本中的人细小病毒B19。
- 邓雪锋朱云云营新艳冯志鸿董衍明李毅
- 关键词：人类细小病毒B19巢式PCR
- 家蚕浓核病毒(伊那株)(Bombyx Mori Densovirus,BmDNV-1)非结构蛋白基因NS2的克隆与表达
- 2009年
- 本文对家蚕浓核病毒伊那株的非结构基因NS2进行了克隆和表达,以期进一步研究其功能。以伊那株的全基因组为模板,PCR扩增出NS2基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,转化到DH5a感受态细胞中培养筛选阳性克隆pET-28a-NS2,并抽提质粒进行验证。重组质粒经BamHI和HindIII双酶切和测序证实正确,然后转化到表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)中。用IPTG诱导表达NS2融合蛋白,通过10%SDS-PAGE检测表明:经1mMIPTG诱导4h后,目的蛋白的表达量最大,得到的NS2融合蛋白约56.0KD,并经Western blot进一步验证正确。
- 王媛李毅
- 关键词：NS2克隆
- 人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:克隆、表达、纯化人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1,制备抗NS1多克隆抗体。方法:利用PCR扩增HBoV非结构蛋白NS1基因,将其克隆至pMAL-c2X表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌DH10B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Amylose Resin亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA法检测抗体效价。结果:原核表达融合蛋白MBP-NS1,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶32000。结论:在原核表达系统中表达、纯化了融合蛋白,制备抗NS1多克隆抗体,为进一步研究该病毒非结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具。
- 孙彬李京京欧阳锦凤陈莹李毅
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 人类博卡病毒结构蛋白基因VP2的克隆与表达被引量：1
- 2010年
- 采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测、Western Blot分析,证明目的蛋白得到了表达。可为目的蛋白的纯化及结构和功能的研究、相应抗体的制备打下坚实的基础。
- 陈莹张丹李京京李毅
- 关键词：人类博卡病毒克隆
- 人细小病毒B19VP1u多克隆抗体的制备及其保守区外N端氨基酸对sPLA2活性影响的初步研究被引量：1
- 2014年
- 【目的】制备人细小病毒B19-VP1u的多克隆抗体,探究VP1u多克隆抗体及其保守区外N端氨基酸对病毒磷脂酶A2活性的影响。【方法】首先通过分子克隆方法构建相应原核表达载体;利用原核表达系统纯化含MBP标签的VP1u全长及N端系列截短突变融合蛋白;接着免疫新西兰大白兔制备全长VP1u蛋白的多克隆抗体;最后利用磷脂酶A2活性检测试剂盒检测了纯化蛋白的磷脂酶A2活性。【结果】Western blot及免疫荧光实验证实制备的多克隆抗体具有较高的特异性;磷脂酶A2活性检测发现全长VP1u-MBP融合蛋白具有一定的活性,该活性可以被VP1u的抗体抑制;N端保守区外截短系列蛋白的酶活检测发现,N端截掉12个氨基酸时酶活降低53%,截掉67个氨基酸时酶活性几乎完全丧失。【结论】首次发现VP1u保守区外N端氨基酸,尤其是第12个氨基酸前的区域以及第22-67个氨基酸之间的区域,对sPLA2活性的保持具有重要意义,推测该区域可能对维持正常的蛋白构象起重要的作用;而其特异性多克隆抗体的制备也为进一步研究B19病毒VP1u在病毒复制周期的作用奠定基础。
- 王媛董衍明易千慧赵丹李毅
- 关键词：人细小病毒B19多克隆抗体磷脂酶A2
- 浓核病毒研究概述被引量：3
- 2011年
- 浓核病毒属于细小病毒科浓核病毒亚科,病毒颗粒为二十面体,无包膜,直径在18～30nm左右,基因组为单链DNA,末端具有发卡结构,大小为4～6kb,只感染无脊椎动物细胞。本文介绍了浓核病毒基因组的表达策略、宿主域及其决定因子、昆虫对浓核病毒的抗性机制,以及浓核病毒在卫生和农业领域潜在的应用价值。此外,也概括了浓核病毒对无脊椎动物养殖业潜在的威胁。
- 刘凯于彭建新洪华珠李毅
- 关键词：浓核病毒抗性基因组进化
