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王树双: 作品数：60 被引量：362H指数：10; 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>; 发文基金：科技基础性工作专项国家科技基础性工作专项公益性行业科研专项更多>>; 相关领域：农业科学哲学宗教生物学经济管理更多>>

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非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用被引量：11: 2013年; 本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白,并进一步将其用于ELISA试验研究。参考非洲猪瘟病毒Con09/Bzz020株P54基因(E183L)的核苷酸序列,通过序列优化后合成P54基因,克隆至表达载体pET-30c(+),构建重组质粒pET-30c(+)-p54。结果显示,pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架,可高效表达分子量约20.7ku的p54蛋白,该蛋白表达稳定,具有可溶性,易于纯化,纯度高达900μg·mL-1,所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020株p54蛋白氨基酸序列相同;Western blot试验显示,表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应;ELISA试验显示,p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67。研究结果证实p54蛋白表达产量高,易于纯化,具有较好的抗原性,可用于非洲猪瘟ELISA诊断。; 龚振华王丽萍臧京帅张康刘春菊吴晓东张启迪秦晓冰陈琳琳单虎王树双王志亮; 关键词：非洲猪瘟病毒 ELISA

一株猪细小病毒7群的鉴定和分离被引量：1: 2019年; 猪细小病毒7群(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为弄清我国猪群中是否存在PPV-7,本文用PPV-7特异性的实时荧光定量PCR和常规PCR方法对采集的10份猪流产胎儿和10份保育仔猪病料分别进行检测,结果发现其中1份保育仔猪样品的常规PCR和实时荧光定量PCR检测结果均为阳性,常规PCR扩增出的246 bp特异性条带测序和分子遗传演化时发现,该序列与PPV-7参考毒株KU5637332和KY996757的同源性分别为99.6%和98.0%,表明该样品中含有PPV-7,进一步用PK-15细胞分离病毒,连续传代5次后PK-15细胞都没有出现典型的细胞病变,但其上清液用实时荧光定量PCR方法都可以检测到该病毒。本研究结果证实我国猪群中存在PPV-7的感染,且检测到的PPV-7毒株能在PK15细胞中增殖。; 张志张丽丽刘爽吴发兴李晓成王树双; 关键词：实时荧光定量PCR 常规PCR

无规定动物疫病区标准.第9部分:无牛海绵状脑病区: GB/T 22330的本部分规定了无牛海绵状脑病(BSE)区的认定条件。本部分适用于无牛海绵状脑病的监测、无疫认定和国际无疫申请。; 魏荣黄保续杨承谕蔡丽娟王树双于丽萍; 关键词：畜牧业家畜疾病检疫; 文献传递

鸡腺胃型传染性支气管炎研究初报被引量：55: 1997年; １９９６年９月以来青岛地区发生一种新病，我们进行了流行病学调查、临床症状、病理剖检、实验室诊断、病毒分离、电镜观察、回归试验、疫苗研制等一系列研究。确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎。; 王玉东张子春王永玲范根成蒋贻海刘相娥丁江王树双; 关键词：腺胃型传染性支气管炎鸡病

牛巴贝斯虫核酸探针检测中血样处理优化试验: 1997年; 分别采用光敏生物素，地高辛标记的牛巴贝斯虫ＤＮＡ探针检测三种血样处理方法提取的虫体ＤＮＡ，结果表明：ＴｒｉｔｏｎＸ－１００／乙酸处理方法与全血提取法有相同检测水平；但前者操作简便；皂素处理法不能回收全部虫体。; 田玉冰吴鉴三王志亮张肖正王树双周立桥; 关键词：探针牛病

猪伪狂犬病毒野毒株套式PCR检测方法的建立和应用被引量：3: 2015年; 为建立能鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒株和疫苗株的实用方法,本文以疫苗株缺失的3.5kb片段为靶基因,设计了2对PCR引物,建立了能够特异性检测PRV野毒株的套式PCR方法。与常规PCR相比,该方法检测极限可达10个病毒拷贝/μL,是常规PCR的1000倍,并与猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒等不存在交叉反应现象。在对临床150份样品检测时,套式PCR的阳性率为21.33%,常规PCR的阳性率为10%。这表明该方法具有特异性高、敏感性强的特点,是一种值得基层推广应用的快速诊断技术,可用于PRV的诊断和流行病学调查等。; 张志樊雅婷吴发兴刘爽董雅琴邵卫星段纲王树双李晓成; 关键词：猪伪狂犬病病毒野毒株套式PCR

牛双芽巴贝斯虫病补体结合试验研究被引量：1: 1989年; 用单一株双芽巴贝斯虫高染虫率红细胞,经有控制的低渗溶解获得完整裂殖体,超声裂解和高速离心获得补体结合试验抗原。本研究提供了用这种抗原作小量法补体结合试验的程序。检查人工感染12天的牛血清,补反抗体已达到1:10的效价。研究初步证明了这种方法的特异性、敏感性和实用性。; 吴鉴三张肖正王树双; 关键词：双芽巴贝斯虫补体结合

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒山东分离株S基因的克隆及序列分析被引量：3: 2015年; 为研究3株鸡腺胃型传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株(青岛腺胃株QX株、东营腺胃株DY株、肥城腺胃株FC株)病毒纤突蛋白基因(S基因)的核苷酸特征,与呼吸型M41标准株及肾型IBV进行S基因核苷酸进行同源性比较。采用RT-PCR技术方法,对IBV分离株(QX、DY、FC)及标准毒株M41株S基因进行克隆和序列测定,对其中QX和DY株S基因核苷酸分别用3种方法(Clustal V method、Jotun Hein method和Clustal W method)对获得的基因核苷酸序列进行分析。结果显示,QX株和DY株的S基因核苷酸与标准毒株M41株S基因核苷酸的同源性最高为79.3%和79.2%,最小差异性为24.5%和22.3%。QX株和DY株与肾型IB分离株HD同源性最高为78.4%和78.9%,最小差异性均为22.7%。HD株与M41株的同源性最高达到80.8%。通过对S基因进化关系分析,说明腺胃型IBV山东分离株(QX、DY株)与呼吸型和肾型IBV是引起不同组织嗜性的IBV变异株,与呼吸型IBV和肾型IBV有明显的差异,是在IBV遗传变异进化过程中具有重要地位的进化阶段。; 王玉东刘俊辉郑增忍王君玮王永玲王晓燕王树双牛钟相; 关键词：传染性支气管炎病毒腺胃型 S基因

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒(QX IBV)的分离和鉴定被引量：56: 1998年; １９９６年９月份以来，青岛地区鸡群发生一种新病，通过鸡胚盲传５代—６代，电镜观察、动物回归和免疫保护试验、用气管环组织培养进行理化特性测定、毒价测定、中和试验，证明目前流行的以腺胃肿大为主要特征的传染病的病原是冠状病毒，因为引起腺胃的特征性的病理变化，将此病暂定名为腺胃型传染性支管炎，将青岛分离株定为ＱＸ株。; 王玉东王永玲张子春范根成蒋贻海刘相娥丁江王树双; 关键词：腺胃型病毒鸡病

猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量RT—PCR检测方法的建立被引量：9: 2014年; 本为快速特异地检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),根据猪流行性腹泻病毒N基因序列设计合成引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT—PCR检测PEDV的方法。用阳性质粒10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,结果显示,该方法的标准曲线的相关系数为0.99,检测敏感性达到26.1拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,对猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测结果均为阴性,批内和批间变异系数均小于2.5%。对43份现地病料的检测结果也表明该方法(检出28份)比常规RT—PCR方法(检出12份)敏感性更高,为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段。; 张志刘自立董雅琴于美芳刘爽吴发兴邵卫星李晓成王树双; 关键词：猪流行性腹泻病毒 TAQMAN探针

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