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肺炎链球菌培养及其荚膜多糖的制备被引量：4: 2004年; 　肺炎链球菌荚膜多糖是肺炎疫苗的有效组分,采用自制培养基以15L立瓶和100L发酵罐对流行肺炎链球菌进行培养,探讨其生长和荚膜多糖产生情况.结果表明肺炎链球菌以上述两种方式大量培养均生长良好.采用7～9h的培养物上清液经超滤浓缩,以乙醇沉淀法制备荚膜多糖,所获多糖基本符合《欧洲药典》规定要求.立瓶培养的6B、18C、19F及23F荚膜多糖产量分别达112mg/L、123mg/L、115mg/L及103mg/L,这些数据均高于欧洲专利Yavordios所述72mg/L的产量.用立瓶培养时多糖收量较低的1、5和14型(收量分别为40mg/L、43mg/L及25mg/L)肺炎链球菌进行发酵罐培养的多糖收量与立瓶培养的相似.; 王剑虹乔瑞洁王欣茹沈荣赵萍; 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖纯化

C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物制备方法的比较被引量：4: 2015年; 目的对C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)蛋白结合物的5种制备方法进行比较。方法以GCMP作为多糖抗原,破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和重组绿脓杆菌外毒素A(recombinant exoprotein A from Pseudomonas aeruginosa,r EPA)作为载体蛋白,采用5种结合路线制备7种结合物,并对其生化指标、免疫原性及磷酸铝佐剂的免疫增强效果进行检测。结果不同的结合方法均可将不同载体蛋白与多糖有效结合,在小鼠体内均具有良好的免疫原性。7种结合物的分子大小分布、游离多糖含量、多糖/蛋白值、回收率及免疫原性等指标有较大差异;采用相同结合方法,以TT和r EPA作为载体蛋白制备的结合物的生化指标及免疫原性无差异;磷酸铝佐剂可显著提高结合物的免疫原性。结论在选择GCMP蛋白结合物制备方法时应综合考虑原料多糖的化学结构、载体蛋白类型、结合路线、结合物纯化方法、质量控制方法和剂型等因素。本实验为GCMP蛋白结合物制备路线的选择提供了实验依据。; 于旭博孔素娟袁菲王晶罗树权王欣茹李阿妮方红春赵志强谢贵林; 关键词：破伤风类毒素免疫原性

人血清抗肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法的建立与验证被引量：9: 2013年; 目的建立WHO推荐的检测人血清抗肺炎链球菌（ Streptococcus pneumoniae ）荚膜多糖抗体IgG定量ELISA（PnPSELISA）。方法依照WHO推荐的Pn PS ELISA标准操作要求，优化荚膜多糖的包被浓度，筛选合格的ELISA板和二抗；在检测WHO参考实验室提供的质量控制血清验证实验条件的基础上，分别在WHO参考实验室和兰州生物制品研究所有限责任公司（LIBP）实验室检测16份由LIBP制备的质控血清中抗13种肺炎链球菌血清型（1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F）的荚膜多糖IgG抗体浓度。同时，在LIBP实验室建立了实验室内部质控血清907的检测范围，并评价了LIBP实验室实验间检测值的精确度。结果在WHO参考实验室和LIBP实验室分别检测的16份LIBP质控血清的抗13种肺炎链球菌血清型荚膜多糖IgG抗体浓度具有良好的相关关系（slope=0．94，r=0．97，P〈0．05）。LIBP实验室的检测值有81％落在WHO参考实验检测值±40％范围内，符合评价实验室之间所用方法的75％的数据在±40％的检测值范围内的标准。建立了LIBP实验室内部质控血清907的抗13种肺炎链球菌血清型荚膜多糖抗体IgG的检测值范围。LIBP实验室质控血清的各血清型IgG抗体浓度的实验间检测值的变异系数（CV）均〈30％。结论LIBP实验室成功建立了WHO推荐的检测人血清中抗肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法，并确定了LIBP实验室日常用质控血清907的检测值范围。; 王欣茹石继春林纪胜李茂光王春娥刘方蕾叶强赵志强谢贵林; 关键词：肺炎链球菌酶联免疫吸附试验

C群脑膜炎球菌结合物小鼠免疫原性的研究被引量：1: 2016年; 目的比较C群脑膜炎球菌多糖蛋白质结合物(简称结合物)的相对分子质量大小和免疫剂量对其在小鼠体内免疫原性的影响,为结合物的分子大小的质控和结合疫苗成品免疫剂量的选择提供实验依据。方法利用CDAP活化法制备C群脑膜炎球菌结合物,通过硫酸铵盐析进行纯化,然后利用Sepharose CL-4B凝胶过滤层析分析,并根据化学检测结果将结合物分为KD0-0.2(组分1)、KD0.2-0.4(组分2)、KD0.4-0.7(组分3)等3个不同相对分子质量组分,每份分别采用1.0μg、0.2μg的免疫剂量免疫小鼠,并对血清进行ELISA分析。结果采用1.0μg免疫剂量时,3种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物均能产生较高水平的抗体,具有典型的加强效应,第2剂免疫即可产生高水平的抗体,而第2、3剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义;采用0.2μg免疫剂量时,三种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物只有在第3剂免疫后才能产生较高水平抗体,第1、2剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义,组分1和组分2在第3剂免疫后产生的抗体水平优于组分3;对于相同相对分子质量结合物,用1.0μg免疫小鼠产生的抗体水平优于0.2μg免疫组,而且有显著的统计学意义。结论高剂量时,多糖相对分子质量大小对C群脑膜炎球菌结合物的免疫原性没有显著性影响;低剂量时,小相对分子质量结合物对其免疫原性有影响。同等相对分子质量时,1.0μg比0.2μg的免疫剂量可以激发更高的抗体水平。; 孔素娟袁菲王欣茹王晶刘爱萍于旭博吴兵罗树权侯亚莉谢贵林; 关键词：免疫剂量免疫原性免疫应答

测定唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法的建立及验证被引量：6: 2016年; 目的建立测定脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物及结合物中唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法,并进行验证。方法以《中国药典》三部（2015版）测定多糖中唾液酸含量的间苯二酚-盐酸法为基础进行改良,去除有机相萃取步骤,优化方法中的检测波长（300~900 nm）及煮沸时间（10、15、20、25、30、35和40 min）;并对建立方法的线性范围、中间精密度及准确度进行验证。比较改良法与《中国药典》法对样品唾液酸含量及其层析分部产物中唾液酸含量测定结果的差异,同时检测乳糖对改良法测定唾液酸含量的影响。结果方法中最佳检测波长为569 nm,最佳煮沸时间为30 min。唾液酸对照品浓度在5~40μg/ml范围内与569 nm吸收值呈良好的线性关系,R2均〉0.999;3位实验人员在3个不同时间对样品中唾液酸含量测定9次结果的CV均〈3%;外加5、10、20μg/ml浓度的N-乙酰神经氨酸的回收率均在95%~105%之间。改良法与《中国药典》法检测的样品唾液酸含量差异无统计学意义（P〉0.05）,且两种方法的层析分部图谱一致。乳糖溶液浓度超过100μg/ml时对唾液酸测定结果的干扰较大。结论本实验建立的改良唾液酸测定法具有良好的线性、精密度和准确度,可用于脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物和结合物唾液酸含量的测定。; 袁菲于旭博孔素娟王晶王欣茹吴兵刘方蕾谢贵林; 关键词：唾液酸含量

肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体定量ELISA检测及质量控制要求被引量：5: 2014年; 检测肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)特异性抗体的酶联免疫吸附试验多年来经历了两次主要改进。介绍了WHO推荐的人血清抗肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(Pn PS ELISA)检测方法、关键试剂、局限性以及方法验证等内容。ELISA定量检测法,为预防肺炎链球菌的婴幼儿侵袭性疾病提供准确的抗体水平,并对肺炎链球菌疫苗的临床评价提供血清学证据。人血清中肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG是判断肺炎链球菌疫苗效力的重要指标。; 王欣茹赵志强谢贵林; 关键词：肺炎链球菌酶联免疫吸附试验

不同方法制备的1型肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗生化及免疫学特性比较被引量：5: 2007年; 目的对两种方法制备1型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗的生化及免疫学特性进行比较。方法分别采用溴化氰活化法与胺还原法制备结合物,并对其进行生化及免疫学检测。结果采用溴化氰活化法制备的结合物,较胺还原法具有较高的结合率及高分子结合物含量,免疫小鼠产生的抗体效价较胺还原法明显提高。结论采用溴化氰活化法制备1型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗优于胺还原法。; 张萍王欣茹侯亚莉张新庄杜琳谢贵林; 关键词：结合疫苗生化特性免疫学特性

载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究被引量：1: 2014年; 目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。结果经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85%左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95%以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45%以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性。结论经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并最大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性。本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。; 吴兵范锋锋刘方蕾于旭博王欣茹罗树权方红春李燕婷陈作江谢贵林赵志强; 关键词：破伤风类毒素柱层析免疫原性

14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的研制被引量：8: 2007年; 将14型肺炎球菌的荚膜多糖(PS)与破伤风类毒素(TT)通过化学方法结合,制备成多糖-蛋白结合疫苗(PS14-TT)。用该结合疫苗免疫小鼠,在小鼠体内产生了高滴度的PS-IgG抗体和TT-IgG抗体,且再次注射后有加强应答效应,表明制备的结合疫苗保留了完好的抗原性,具有胸腺依赖性抗原的特性。; 张萍王欣茹侯亚莉张新庄杜琳谢贵林; 关键词：肺炎球菌荚膜多糖破伤风类毒素结合疫苗

A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法的建立及其验证被引量：1: 2014年; 目的建立A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法 (serum bactericidal assay,SBA),并进行验证。方法对SBA中活菌收获时间、靶菌的制备、反应时间及补体进行优化,并确定质控血清Men10的质控范围。对优化后的方法进行特异性、线性、精密度验证。结果确定A600值为0.5~0.8时为收获细菌最佳收获时间;冻存菌种可替代新鲜制备菌种作为靶菌;最佳杀菌反应时间为60 min;17830和84321N批补体均可用于试验。质控血清Men10的质控范围A群为521~4 689,C群为1 047~9 423,W135群为1 779~16 008,Y群为1 416~12 741。A、C、W135和Y同群多糖吸收血清样品后能够抑制≥80%的同群SBA滴度,而异群多糖则<20%;血清样品稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-0.90^-1.10之间,Pearson相关系数在0.90~1.0之间,P均<0.001;同一实验内相同样品检测结果 CV≤25%,实验间相同样品的95%的检测结果落在检测值中位数3倍(一个稀释度)的范围内,CV≤40%,不同实验室间相同样品的检测结果至少有70%落在美国CDC公布结果的3倍(一个稀释度)范围内。结论建立了标准化的具国际间可比性的A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌SBA,该方法特异性、线性和精密度良好。; 乔瑞洁赵志强王浩王欣茹刘佳刘方蕾吴兵于旭博林纪胜李亚南叶强谢贵林; 关键词：脑膜炎奈瑟菌

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王欣茹

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