王虹
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学更多>>
- 畜牧微生物学课程开放式、多方式实验教学的实践与探索
- 2012年
- 为提高畜牧微生物学实验教学的效率和效果,结合目前的教学实际,以强调提高学生的学习热情、培养学生科学思维能力和创新能力,以及应用知识解决实际问题的能力为改革的核心。探索建立了逐级提高的"基本技能与验证性实验-综合性实验-探索与设计性实验"3大模块,打破传统实验教学模式的单一性,使畜牧微生物学实验教学形式多样化,取得了良好的教学效果。
- 王爱华孟祥敏齐雪峰王虹
- 关键词：畜牧微生物学实验教学
- 牛SREBP1基因shRNA序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2013年
- 【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并在293A细胞包装扩繁得到高滴度腺病毒,GFP标记法测定病毒滴度。最后将病毒侵染牛前体脂肪细胞,实时荧光定量法(qRT-PCR)检测干扰效率。【结果】筛选出靶向牛SREBP1基因干扰效率为87.4%的shRNA-1053。构建了pAd-1053和阴性对照pAd-NC重组腺病毒载体并包装得到Ad-1053和Ad-NC高滴度病毒,测定得到的病毒滴度分别为7×108 GFU·mL-1和9×108 GFU·mL-1。Ad-1053和Ad-NC分别侵染牛前体脂肪细胞,qRT-PCR检测结果显示Ad-1053可显著降低SREBP1基因的mRNA水平(干扰率>85%),而Ad-NC对SREBP1基因表达无明显影响。【结论】成功筛选得到靶向干扰牛SREBP1基因的有效shRNA,并包装扩繁获得相应的高滴度重组病毒。
- 付常振昝林森王虹成功王洪宝李耀坤姜碧杰高建斌杨宁
- 关键词：SHRNA重组腺病毒
- 应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法
- 本发明公开了一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法，该方法包括以下步骤：A1，克隆秦川牛固醇调控元件结合蛋白1基因（SREBP1）；A2，psiCHECK-Ⅱ-SREBP1表达载体的构建...
- 昝林森付常振成功王洪宝王虹
- 文献传递
- 牛CCAAT增强子结合蛋白家族（C/EBPs）诱导细胞转分化的研究
- 牛肉作为一种高蛋白、低胆固醇的肉类食品倍受人们青睐,其嫩度和风味可随着肌内脂肪含量的增加而得到改善。而动物脂肪的形成与沉积是受多种转录因子调控的复杂生理过程,与脂肪细胞的增殖分化密切相关。CCAAT增强子结合蛋白家族(C...
- 王虹
- 关键词：转分化重组腺病毒
- 文献传递
- 一种诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法
- 本发明公开了一种诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，克隆牛转录因子CCAAT增强子结合蛋白C/EBPβ基因，构建C/EBPβ基因过表达载体并包装获得重组腺病毒。腺病毒侵染牛成纤维细胞、成肌细胞实现上述细胞快...
- 成功昝林森王虹
- 文献传递
- 秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子的SNPs检测及其与肉质性状的相关性被引量：5
- 2011年
- 【目的】对秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子进行SNPs检测,并研究其与秦川牛肉质性状的相关性。【方法】采用DNA直接测序技术并结合PCR-SSCP方法,对324头2~3岁秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子进行多态性分析,用最小二乘法拟合线性模型对Chemerin基因不同基因型与秦川牛肉质性状（宰前活质量、胴体质量、背膘厚、大理石花纹评分、系水力、眼肌面积和嫩度）进行关联分析。【结果】秦川牛Chemerin基因第2外显子868 bp处发生了A→G突变,第6外显子2 948 bp处发生了C→G突变;用PCR-SSCP方法检测得到AA、AG、GG、EE和EF 5种基因型,其基因型频率分别为0.219 1,0.432 1,0.348 8,0.348 4和0.651 6,均处于中度多态,其中C2948G位点处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态（P〈0.01）。关联分析结果表明,秦川牛Chemerin基因第2外显子AA基因型与眼肌面积、背膘厚、大理石花纹评分和系水力均显著相关（P〈0.05）;第6外显子各基因型与供试肉质性状间没有相关性（P〉0.05）。【结论】Chemerin基因第2外显子可能是影响秦川牛眼肌面积、系水力和大理石花纹评分等肉质性状的主效QTL或与之紧密连锁,可以尝试将其用作秦川牛品质改良的辅助选择标记。
- 宋付标昝林森王洪程王洪宝田万强王虹钟昕
- 关键词：PCR-SSCP多态性肉质性状
- 秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：5
- 2013年
- 【目的】旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备。【方法】根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeⅠ线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacⅠ酶切鉴定。将经过PacⅠ线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度。【结果】经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一致。酶切鉴定、绿色荧光观察、PCR及测序检测均证明,重组腺病毒载体构建成功并获得重组腺病毒AD-FABP4,病毒滴度为1.58×109PFU.mL-1。【结论】成功构建了秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体并获得高滴度的重组腺病毒。
- 魏胜娟昝林森王洪宝成功季舒涵王虹付常振姜碧杰
- 关键词：腺病毒
- 应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法
- 本发明公开了一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法，该方法包括以下步骤：A1，克隆秦川牛固醇调控元件结合蛋白1基因（SREBP1）；A2，psiCHECK-Ⅱ-SREBP1表达载体的构建...
- 昝林森付常振成功王洪宝王虹
- 文献传递
- 秦川牛SREBP1基因重组腺病毒载体的构建与病毒包装被引量：5
- 2013年
- 克隆秦川牛的SREBP1基因并构建重组腺病毒表达载体,包装扩繁获得高滴度病毒,拟为在细胞水平上开展基因功能的研究奠定基础。本试验以秦川牛脂肪组织为试验材料,提取总RNA并反转得到cDNA,以Gen-Bank收录的牛的SREBP1基因mRNA序列设计引物,PCR扩增SREBP1基因与克隆载体pMD19-T Simple连接并测序鉴定。挑选测序正确的SREBP1基因酶切后连接到腺病毒穿梭载体上构建pAdTrack-CMV-SREBP1表达载体,用PmeⅠ限制酶酶切线性化,然后转染到含有骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态进行同源重组,得到腺病毒重组载体pAd-SREBP1。用PacⅠ限制酶酶切线性化pAd-SREBP1载体并回收质粒大片段,转染293A细胞包装病毒并扩繁提高病毒滴度,绿色荧光蛋白(GFP)标记法测定腺病毒的滴度。本试验成功克隆了秦川牛的SREBP1基因,测序结果与GenBank收录的牛的基因序列比较有2处位点突变,均已排除扩增酶的保真性不高等外界因素造成的。将SREBP1基因与穿梭载体连接构建了pAdTrack-CMV-SREBP1表达载体,并与骨架载体重组得到重组腺病毒载体pAd-SREBP1,用PacⅠ酶切线性化包装病毒,扩繁得到病毒滴度为1.5×109 GFU·mL-1高滴度病毒。本研究成功克隆秦川牛SREBP1基因并重组成病毒重组子,包装扩繁得到高滴度腺病毒。
- 付常振昝林森王虹姜碧杰成功王洪宝朱光星李耀坤王洪程
- 关键词：腺病毒
