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肉毒神经毒素轻链的结构与功能: 2003年; 肉毒神经毒素 (BoNT)是由肉毒梭菌产生的一类外毒素 ,它是目前自然界所发现的生物毒素中毒性最强的物质。近年来 ,BoNT制剂在临床治疗上呈现出广阔的应用前景。具有生物活性的BoNT由 50kD的轻链 (LC)和 10 0kD的重链 (HC)组成双链结构 :LC具有锌内肽酶活性 ;HC为细胞结合和转位结构域。本文综述了BoNT的LC在一级结构。; 贾宏丽王景林; 关键词：肉毒神经毒素肉毒梭菌轻链

重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析被引量：1: 2004年; 目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。; 贾宏丽杨利敏王景林康琳王利春孙嗣梅; 关键词：抗原性

A型肉毒毒素轻链基因的克隆及其结构分析被引量：2: 2003年; 以文献报道的A型肉毒毒素基因全序列为标准,设计并合成一对引物,自肉毒梭菌基因组中扩增出肉毒毒素轻链基因片段,并将扩增产物与pGEM-T载体在体外连接,构建测序重组质粒,进行测序和基因结构分析。PCR扩增获得了产物为1364bp的DNA片段,测序结果与DNA数据库对照检索分析证明,此基因片段与GenBank中的A型肉毒毒素LC基因的一致性达99.9%以上,可以认为克隆的基因为A型肉毒毒素LC基因。; 贾宏丽赵金红王景林康琳; 关键词：A型肉毒毒素轻链基因克隆基因结构毒性肉毒梭菌

抗肉毒神经毒素A(BoNT/A)单克隆抗体的制备与鉴定(英文)被引量：1: 2004年; 目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结果 :获得 3株杂交瘤细胞株 :命名为4A8、2F7和 4F2 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,腹水mAb的效价在 1× 10 -4～ 1× 10 -6之间。其中 ,4A8和 4F2能稳定分泌抗BoNT AmAb,并可特异性地识别重组BoNT/A和天然BoNT/A ,特别是 4A8可保护小鼠抵抗 10LD50 BoNT/A的攻击。结论 :成功地制备 3株特异性抗BoNT/AmAb ,并有 1株属于中和性mAb 。; 王景林康琳贾宏丽; 关键词：肉毒杆菌毒素单克隆抗体

重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)蛋白的表达、纯化与鉴定被引量：2: 2005年; 　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻链,转化E.coliBL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western印迹鉴定重组BoNT/A轻链。结果:经PCR获得的BoNT/A轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达 99. 9%以上。表达工程菌BL21 /pET21a ALC于 37℃经 0. 7mmol/LIPTG诱导 6h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的 23%。经过镍离子螯合次氨基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A轻链的纯度可达 97%以上。Western印迹结果表明,重组BoNT/A轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A轻链片段,其抗原性良好。; 贾宏丽王景林; 关键词：轻链克隆表达

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贾宏丽