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黄路: 作品数：29 被引量：48H指数：5; 供职机构：中山大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生理学生物学更多>>

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尤文肉瘤EWS-FLI1基因原核表达质粒的构建及鉴定被引量：2: 2010年; 目的:构建尤文肉瘤EWS-FLI1基因原核表达质粒。方法:从人尤文肉瘤A673细胞中提取总RNA,以RT-PCR法扩增EWS-FLI1基因序列,目的基因两侧引入SacⅠ和HindⅢ酶切位点,克隆至pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆作PCR鉴定、酶切鉴定及测序鉴定。再将EWS-FLI1基因亚克隆至原核表达载体pQE30中,构建重组原核表达质粒pQE30-EWS-FLI1,酶切及测序鉴定。所构建的重组质粒转化JM109,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳后转印到NC膜上,进行Western blot鉴定。结果:PCR结果显示扩增片段大小约为1.5kb,双酶切鉴定目的基因片段大小约为1.5kb,阳性克隆测序结果显示目的基因序列与预期相同。所构建重组质粒在大肠杆菌中表达出与预期大小相符的54kD蛋白,经鉴定系EWS-FLI1蛋白。结论:成功构建了pQE30-EWS-FLI1,并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。; 陈文昭黄路黄山虎曹凯舒勇韩智敏安洪; 关键词：尤文肉瘤原核表达质粒

miR-140通过作用HDAC4/HIFα通路在骨肉瘤中担当抑癌基因: 实验目的：微小RNA(microRNAs,miRNAs)在多种肿瘤的进展中发挥重要作用,其中miR-140在多种肿瘤组织中担当抑癌基因,但是其在骨肉瘤中的作用目前尚未见文献报道。实验方法：本文将运用RT-PCR法检测mi...; 肖前仁黄路张中卒陈翔罗家全张战民陈少卿舒勇韩志敏曹凯; 关键词：骨肉瘤

人LMP-1基因腺病毒重组体的构建及其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达: 2012年; 目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达。方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序。双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达。线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1。通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度。用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达。结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组。通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5×109pfu/ml。荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组。结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础。; 刘会文黄路韩智敏罗嘉全杨东詹平戴闽曹凯; 关键词：LIM矿化蛋白-1 重组腺病毒载体表达载体构建骨肉瘤细胞

一种基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针及其制备方法和应用: 本发明公开了一种基于DNA链置换原理的SERS‑荧光双模探针，由一定粒径的四氧化三铁磁性复合材料修饰的DNA1‑2双链与另一条DNA3单链互补配对制得；所述DNA1<...; 张卓旻黄路李攻科; 文献传递

人偏肺病毒分离株蛋白质特性的初步探讨被引量：2: 2007年; 目的:初步明确人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)主要蛋白质的基本特性。方法:以纯化的hMPV重庆分离株CHN05-01灭活病毒为抗原,免疫家兔获得抗血清。用此抗血清为一抗通过免疫印迹法检测hMPV蛋白。用NetNGlyc 1.0 Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos 2.0 Server分析hMPVA型标准株CAN97-83氨基酸序列,预测hMPV蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位点。结果:ELISA检测显示所制备的抗血清与hMPV的蛋白反应效价达1:500以上,可有效识别hMPV蛋白。软件分析示G蛋白糖基化位点最多,而P蛋白磷酸化位点最多。以兔抗hMPV血清为一抗的免疫印迹法提示CHN05-01的G蛋白糖基化水平较一致,与CAN99-80和CAN99-81不同,其分子量介于55至72ku之间,约68ku;F蛋白F1亚单位分子量介于40至55ku,约为48ku。结论:初步明确了hMPV两个主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特点,为后续蛋白功能研究奠定了基础。; 黄路赵晓东张琴赵耀丁媛; 关键词：偏肺病毒 F蛋白抗血清

尤文肉瘤EWS-FLI1蛋白HLA-A2.1限制性CTL表位的预测、筛选及鉴定被引量：5: 2010年; 目的预测、筛选及合成尤文肉瘤EWS-FLI1蛋白HLA-A2.1限制性细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T Lymphocyte,CTL）表位,初步鉴定EWS-FLI1表位肽。方法综合运用BIMAS、SYFPEITHI、Predep和IEDB方案对EWS-FLI1蛋白进行HLA-A^＊0201限制性CTL表位的预测,应用多项式方案、量化基序方案对预测的CTL表位进行筛选,并将筛选的CTL表位与HLA-A^＊0201分子进行动力学模拟,应用标准Fmoc方案合成CTL表位肽;通过表位多肽刺激CTL释放颗粒溶素的检测,以及靶细胞杀伤实验验证表位多肽的免疫效应。结果综合预测得出了8个可能的表位肽,进一步筛选确定其中4个肽为候选合成表位,应用分子动力模拟初步验证了4个候选表位肽与HLA-A2.1分子的结合力,合成的各条肽经色谱分析纯度均在98%以上,经质谱分析各肽的分子量测定值与理论值相符,颗粒溶素释放实验及靶细胞杀伤实验证实了筛选的表位均能产生刺激效应,其中,表位肽QIQLWQFLL（EWS-FLI1 304）的刺激效应最为显著。结论综合运用多个方案可提高预测效率,分子动力学模拟可初步验证表位肽与HLA-A^＊0201的结合力,所合成的多肽为高纯度肽,通过免疫学实验初步鉴定了EWS-FLI1的表位。; 赵金华黄路陈文昭曹凯安洪袁铿舒勇黄山虎廖翔张战民邓高荣; 关键词：CTL表位多肽合成尤文肉瘤

miR-140在骨肉瘤组织中表达降低及其过表达可促进骨肉瘤U2细胞的凋亡被引量：7: 2016年; 目的探讨骨肉瘤组织中miR-140的表达,以及过表达miR-140后对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测40例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miR-140的表达。用脂质体法瞬时将人工合成的成熟miR-140片段(miR-140 mimic)转染至骨肉瘤U2细胞中;用qRT-PCR法检测细胞中miR-140的表达,CCK-8法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,Western印迹法检测miR-140靶基因组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)的表达。结果 72.5%(29/40)的骨肉瘤组织miR-140表达明显低于瘤旁组织(P<0.05)。转染miR-140 mimic后U2细胞miR-140的表达水平明显上调(P<0.05),细胞增殖能力明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞中HDAC4蛋白的表达水平明显下降(P<0.05)。结论 miR-140在骨肉瘤中低表达;过表达miR-140后可抑制骨肉瘤U2细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。这一作用可能部分依赖于miR-140靶向抑制HDAC4的表达。; 陈翔黄路张中卒肖前仁陈少卿舒勇曹凯; 关键词：骨肉瘤凋亡

尤文肉瘤EWS-FLI1融合蛋白B淋巴细胞表位的预测及鉴定: 2011年; 目的:预测及鉴定尤文肉瘤EWS-FLI1融合蛋白的B淋巴细胞表位。方法:采用综合法预测EWS-FLI1蛋白的二级结构及B淋巴细胞表位,运用标准Fmoc方案合成预测的表位肽,HPLC和MS进行表位肽的纯度分析及分子量鉴定,ELISA法检测表位肽的抗原性,并测定表位肽特异性免疫血清效价,Western blot鉴定免疫血清与EWS-FLI1蛋白亲合力。结果:通过综合法预测得到3个高分值的B淋巴细胞表位,HPLC分析合成的表位肽纯度>85%,MS鉴定表位肽的分子量无误,ELISA法检测证实3个B淋巴细胞表位肽均可获得强的抗原抗体反应,其中表位肽P2的抗原性最强,在1∶40时A450=2.46,达到最高,1∶10 240稀释后抗原抗体反应仍呈阳性;用这3个B淋巴细胞表位肽免疫新西兰兔也能获得理想的抗体效价,其中表位肽P2获得的抗体效价最高,1∶512 000稀释时A450=1.11;Western blot鉴定表位肽P1、P2免疫血清能够结合EWS-FLI1蛋白。结论:尤文肉瘤EWS-FLI1蛋白的B淋巴细胞表位肽P1、P2具有潜在的抗原性和免疫原性。; 黄路罗嘉全刘会文张战民廖翔邓高荣曹凯安洪舒勇韩智敏; 关键词：尤文肉瘤融合蛋白嵌合蛋白

一种基于DNA水凝胶的SERS-FL双模传感器的制备与应用: 本发明公开了一种基于DNA水凝胶的SERS‑FL双模传感器的制备与应用，其包括以DNA框架为骨架的水凝胶和附着于所述水凝胶中的空腔中的Au@Ag纳米颗粒和纳米量子点。该传感器具有性质稳定，制备简单，便捷高效等优点，特异性...; 张卓旻黄路李攻科

Lenke2型青少年特发性脊柱侧弯患者双肩与躯干平衡控制的关键外科技术: 曹凯周松黄路韩智敏潘志敏罗嘉全段平国李志云虞志明; 该课题来源于国际脊柱侧弯学会GOP项目、日本武田科学基金会、江西省科技厅人才计划、江西省青少年发展基金会项目，属外科学技术领域，该成果应用于Lenke2型青少年特发性脊柱侧弯(adolescent idiopathic ...; 关键词：; 关键词：特发性脊柱侧弯生物力学手术治疗

黄路

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