丁笠
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究被引量：2
- 2011年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)3连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-LayerInterferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。
- 丁笠王秀云齐海迪李海鑫周雅琼陈耀祖张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
- 一种靶向治疗和检测双功能的抗肿瘤双特异性小型化抗体
- 本发明属于生物工程制药、蛋白质多肽类药物及生物医学工程领域，涉及对人类表皮生长因子受体EGFR1和HER2均具有高亲和力的小型化融合抗体的设计、构建及其在肿瘤靶向诊断和治疗中的应用。该双特异性抗体由HER2特异性结构域和...
- 顾月清丁笠
- 文献传递
- 一种靶向治疗和检测双功能的抗肿瘤双特异性小型化抗体
- 本发明属于生物工程制药、蛋白质多肽类药物及生物医学工程领域，涉及对人类表皮生长因子受体EGFR1和HER2均具有高亲和力的小型化融合抗体的设计、构建及其在肿瘤靶向诊断和治疗中的应用。该双特异性抗体由HER2特异性结构域和...
- 顾月清丁笠
- 文献传递
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究
- 丁笠
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
