何桂林
- 作品数：6 被引量：14H指数：4
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Calmodulin及其突变体与去磷酸化的Cav1.2钙通道片段CT1的结合情况
- 目的研究Calmodulin(CaM)及其突变体与去磷酸化CT1的结合情况。方法本实验中研究的CaM突变体包含CAM12(N-lobe上的两个Ca结合发生突变)、CAM34(C-lobe上的两个Ca结合发生突变)和CAM...
- 王红梅何桂林邵冬雪封瑞孙威郝丽英
- 文献传递
- 体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究被引量：4
- 2013年
- 目的纯化CaV1.2不同蛋白片段并研究其与CaM的相互作用。方法质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段;采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段;GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量。结论成功纯化CaV1.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础。
- 何桂林邵冬雪印丹丹胡慧媛郭凤王红梅郝丽英
- 关键词：CAM融合蛋白
- 重组钙调蛋白及其突变体蛋白的分离纯化及活性鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的建立一种简单稳定高效分离纯化体外重组钙调蛋白(CaM)及其突变体蛋白的方法。方法将CaM及其三种钙结合位点突变体的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CaM及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度;采用膜片钳技术检测纯化后蛋白的活性。结果纯化的CaM及突变体蛋白具有较高的纯度;CaM及突变体蛋白得到了大量表达;纯化后蛋白可恢复已"run-down"心肌细胞膜钙通道的活性。结论本研究成功建立了一种稳定高效简单的重组CaM及其突变体蛋白的分离纯化方法,为深入研究CaM的生物学功能奠定了基础。
- 何桂林郭凤封瑞胡慧媛邵冬雪郝丽英
- 关键词：钙调蛋白GST突变体膜片钳
- CaM与Cav1.2通道Ca2+依赖性结合的分子机制
- L-型钙通道通过控制钙离子进入细胞，从而引起膜电位的改变，并且在心肌细胞动作电位的产生、兴奋收缩耦联、激素和神经递质的释放以及功能依赖性的基因转录中起着重要作用。Ca2+在细胞内信号通路中不仅是一种有效的激动剂，当它超载...
- 何桂林
- 关键词：钙调蛋白钙离子L-型钙通道分子机制
- 文献传递
- 遗传性癫痫大鼠海马组织Ca^(2+)/Ca_V1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路的异常变化被引量：4
- 2013年
- 目的研究遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马组织电压门控性L型钙离子通道α1C亚单位(CaV1.2)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化情况。方法应用West-ern blot法与免疫荧光双标法检测TRM海马CA1、CA3和DG区CaV1.2、CaM和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的蛋白表达及分布;激光共聚焦显微镜检测TRM海马组织中[Ca2+]i。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM海马组织中CaV1.2和CaM的蛋白表达明显升高(P<0.01),而p-CaMKⅡ的蛋白表达明显下降(P<0.01);免疫荧光双标法结果显示:CaV1.2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG区的颗粒细胞群表达丰富,同时CaV1.2与CaM、p-CaMKⅡ与CaM在海马各区域均存在共定位;激光共聚焦显微镜检测TRM海马细胞[Ca2+]i明显增强(P<0.01)。结论Ca2+/CaV1.2/CaM/CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展。
- 吕昕瞳封瑞蔡际群徐晓雪马丽华何桂林胡慧媛赵金生赵美眯郭凤
- 关键词：海马电压门控性钙通道细胞内钙离子浓度癫痫
- 豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察被引量：4
- 2010年
- 目的分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性。方法Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流。结果酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上。全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms。全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流。结论该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究。
- 赵美眯赵金生高青华何桂林郝丽英
- 关键词：膜片钳技术全细胞记录动作电位L型钙通道电流
