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重组E.coli解旋酶Ⅱ(UvrD)的DNA结合及解螺旋功能分析: 2007年; E.coli解旋酶Ⅱ(UvrD)是一种在甲基定向错配修复(methyl-directed mismatchrepair,MMR)和核苷酸切除修复(nucleotide excisionrepair,NER)中起重要作用的3′→5′解旋酶.本研究对大肠杆菌的UvrD进行了重组表达和纯化,并检测其ATP酶比活性(87U/mg).利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)方法实时检测了UvrD与同源双链DNA分子(homoduplex DNA)和异源双链DNA分子(heteroduplex DNA)结合的动态过程以及镁离子对此过程的影响.结果显示,UvrD与DNA的平衡解离常数在10-7mol/L水平.DNA分子中错配碱基的存在,在一定程度上影响了二者的结合,而镁离子不是两者结合的必要因素.本研究还利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)方法在单分子水平上观察到UvrD将双链DNA解链形成单链DNA的中间体.此研究得到的UvrD与DNA结合的动力学信息数据以及解螺旋中间体的单分子可视化,为进一步深入研究UvrD在修复过程中的作用机制奠定了基础.; 张泓泰陈媛媛侯剑马涛毕利军; 关键词：错配修复动力学

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侯剑