倪洪波
- 作品数：7 被引量：19H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金公益性行业(农业)科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 结核分枝杆菌csdA基因的原核表达及其免疫原性
- 2010年
- 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出1 690 bp的csdA(cold-shock dead-box protein A)基因,经限制性酶切后,与pET28a载体连接,转化到大肠杆菌BL21中后,重组菌经0.2 mmol/L IPTG诱导表达了csdA蛋白及Ni-His-resin纯化蛋白,经Western-blot分析,鉴定了目的蛋白的反应原性。试验结果表明,重组质粒的双酶切鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在64 ku处获得一目的条带,具有很好的免疫原性。证实,成功构建了重组表达质粒pET28a-csdA,获得了高纯度的重组蛋白,为深入研究csdA蛋白的功能奠定了基础。
- 王华南亓英芳杜艳芬刘慧芳司微于申业王加明杨盛李素兰冯拥军倪洪波王春来刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 牛分枝杆菌细胞壁相关蛋白表达及免疫原性分析
- 牛结核病是由牛分枝杆菌引起的严重危害奶牛业的人畜共患病,可以通过吸入含菌气溶胶或食用受污染的乳制品而从牛传染到人,对人类的健康也造成了威胁.传统的BCG苗保护力低,因此研究更加特异准确的结核病新型诊断方法并加快新型疫苗的...
- 亓英芳杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌OMPAWESTERN-BLOT免疫原性
- 文献传递
- 禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素被引量：17
- 2010年
- 为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。
- 欧阳凤菊李兆利赫明雷刘慧芳司微刘思国王春来倪洪波王宇曲娟娟
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜
- 比较蛋白组学分析两株不同基因型的结核分枝杆菌
- 本文应用双向电泳技术，对来源于同一牛群的这2株不同基因的结核分枝杆菌的胞内蛋白进行了分离，挑选了26个有表达差异的蛋白进行解析，利用串联质谱技术鉴定出21个差异蛋白。其中，15个蛋白与生物体的多个关键代谢过程有关，包括小...
- 亓英芳王春来刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳赫明雷司微尹录欧阳凤菊倪洪波
- 关键词：结核分枝杆菌基因表达双向电泳技术
- 文献传递
- 牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析被引量：1
- 2009年
- 为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。用glutathione sepharose4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性。结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性。
- 亓英芳黄瑛杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达纯化WESTERNBLOT
- 禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素
- 摘要为了确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法 ,对一株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同条件(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进...
- 欧阳凤菊刘慧芳司微王春来赫明雷倪洪波刘思国
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜
- 文献传递
