刘俊
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定
- 2014年
- 目的:验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法:在缺失片段两侧设计引物,利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA;构建Zwint-1 v7 3′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEXKG-GST-Z7,转化入BL21菌种诱导表达,菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化,融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠,收获多克隆抗血清Anti-Z7,采用Dot b lot检测多克隆抗体的效价,Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果:PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段;SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带;Dot blot结果表明1∶5 000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7;Western blot结果表明,1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论:本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1 v7。
- 苏景华李蕊刘俊周艳琳陈小璇代剑平王革非李康生
- 关键词：HELA细胞原核表达多克隆抗体制备
- APOBEC-3F和APOBEC-3G与乙肝核心抗原的相互作用研究
- 2015年
- 目的:人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC-3F(A3F)和APOBEC-3G(A3G)可抑制HBV复制,并参与HBV基因组的超突变,其中HBc Ag被认为是潜在作用位点,为此本文研究A3F和A3G与HBcAg可能存在的蛋白相互作用方式。方法:RT-PCR克隆人A3F和A3G的cDNA,并构建相应酵母双杂交表达载体pGADT7-A3F/-A3G;PCR克隆HBV ayw亚型HBcAg基因,构建其酵母双杂交表达载体p GBKT7-HBc Ag。p GBKT7-HBc Ag分别与p GADT7-3G和p GADT7-3F共转化AH109酵母菌,利用营养二缺平板及四缺平板培养及α-半乳糖苷酶活性测试,检测HBc Ag与A3F和A3G的直接作用情况。构建含有HBcAg、人A3F和A3G基因的多种标签融合真核表达质粒,脂质体法转染HeLa细胞后进行免疫共沉淀实验(Co-IP),并通过Western blot检测免疫共沉淀产物确定HBcAg与A3F和A3G之间是否存在间接相互作用。结果:酶切及DNA测序分析表明成功克隆HBcAg、人A3F和A3G,并成功构建酵母双杂交、真核表达及亚细胞定位相关的表达质粒。通过酵母双杂交实验对α-半乳糖苷酶定性和定量检测显示,A3F和A3G与HBcAg无显著的直接相互作用。Western blot及Co-IP实验结果表明A3F和A3G与HBcAg均存在相互作用。结论:A3F和A3G蛋白与HBcAg蛋白之间确实存在相互作用,推测这种作用不是通过两个蛋白直接结合实现的。
- 王革非曾祥兴李蕊苏景华刘俊周艳琳李康生
- 关键词：乙肝核心抗原酵母双杂交免疫共沉淀
- 外周感染流感病毒WSN33对小鼠自发行为的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:研究外周感染流感病毒H1N1 WSN33后,小鼠在旷场自发行为中的变化规律,探讨外周感染流感病毒对小鼠情绪的影响。方法:通过滴鼻感染H1N1 WSN33或生理盐水,记录BALB/c小鼠两周内的体重变化,以及在旷场行为箱体内5 min的行走总路程、平均运动速度、中央区域运动路程及粪便排泄情况等。结果:外周感染H1N1 WSN33引起小鼠体重急速下降,从第8天开始逐渐恢复。旷场试验中WSN33感染组小鼠行走总路程减少,在感染后的5到10 d总路程减少量差异性比较显著;平均运动速度无统计学差异性;粪便粒数波动较大,无统计学差异。结论:外周感染流感病毒H1N1 WSN33后,BALB/c小鼠自发活动量减少,活动速度基本不变,启示流感病毒感染过程中伴随一定程度的抑郁、焦虑、紧张等情绪,在流感病毒感染的急性期和恢复初期表现比较明显,而紧张情绪表现不太显著。
- 周艳琳李蕊谷李铭刘俊陈燕霞李康生王革非
- 关键词：小鼠旷场试验
- HMMR预测肝细胞癌预后的生物信息学分析被引量：1
- 2022年
- 目的探讨透明质酸介导的运动受体(HMMR)在肝细胞癌中的表达及在临床预后中的作用。方法从癌症基因组图谱计划(TCGA)和国际癌症基因组联合体(ICGC)数据库中下载肝细胞癌转录组数据、HMMR的表达信息以及609例患者的临床资料,采用Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis检验和Logistic回归分析临床特征与HMMR表达之间的关系,同时使用Kaplan-Meier生存分析、单因素和多因素COX回归分析评估HMMR预测肝细胞癌预后的价值。利用基因富集分析(GSEA)预测HMMR高风险组主要富集的生物学功能和通路。结果在TCGA和ICGC两组数据库中都表明HMMR在肝细胞癌组织中高表达,且其表达水平与临床分期有一定的相关性。生存分析显示,HMMR高表达患者生存时间更短;单因素和多因素COX回归分析表明,HMMR可以作为肝细胞癌的独立预后因子。GSEA显示,HMMR高风险组主要富集通路包括DNA复制、P53信号通路、癌症通路、凋亡通路等。结论HMMR在肝细胞癌中高表达,且HMMR有可能成为肝细胞癌预后的生物标志物及治疗的靶点。
- 吴良银李文丽刘俊
- 关键词：肝细胞癌生物信息学生物标志物
