刘华
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 三甲基化组蛋白H3赖氨酸4对调节性T淋巴细胞foxp3基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法。方法使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+CD25+Treg。对CD4+CD25+Treg分别进行0 d、3 d、7 d培养,其中0 d为阴性对照组,3 d为阳性组1,7 d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0 d、3 d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3K4me3及DNA水平变化。结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg.L-1时为最佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用最为显著。nTreg细胞培养0 d、3 d、7 d的表型变化呈递减趋势。随着培养时间(0 d、3 d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3K4me3表达逐渐减少。2.采用ChIP-PCR法对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞检测与H3K4me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化。DNA凝胶电泳图显示,0 d、3 d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7 d有模糊条带或无条带。三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3K4me3减少有关。
- 何敏李兴花刘华陈宁宁于艳辉卢思广刘健胜
- 关键词：调节性T淋巴细胞
- 雷帕霉素对TGF-β1诱导的Treg细胞的体外影响被引量：1
- 2010年
- 目的体外观察雷帕霉素(Rapa)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的CD4+CD25+Treg细胞(i Treg)扩增的有效性及其相关性。方法以抗原提呈细胞(APC)、植物血凝素(PHA,10μg.L-1)、TGF-β1(7.5 ng.L-1)联合刺激诱导CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg细胞,培养第5日添加不同浓度Rapa刺激培养3d作为实验组,设阴性对照组(不加Rapa)和空白对照组(RPMI 1640培养基),FCM检测各组中CD4+CD25+T细胞比例变化情况;MTT法测定各组诱导细胞的抑制功能。结果①阴性对照组CD4+CD25+T细胞比例较空白对照组增高(P<0.01),而实验组CD4+CD25+T细胞比例显著升高,Rapa(100 ng.mL-1)增殖效应显著(P<0.01),CD4+CD25+T细胞增殖比例达到42.6%;②实验组i Treg细胞能够明显抑制同型CD4+CD25-T细胞的增殖(P<0.01)且不同浓度Rapa之间存在差异,100 ng.mL-1Rapa抑制效应最明显(P<0.01)。结论在体外条件下,Rapa可以促进TGF-β1诱导分化的Treg细胞增殖,且具有免疫抑制功能,这为体外回输Treg细胞治疗疾病开辟了新途径。
- 刘华何敏刘建胜卢思广
- 关键词：雷帕霉素转化生长因子-Β1
