刘雨田
- 作品数：69 被引量：320H指数：8
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金引进国际先进农业科技计划青岛市自然科学基金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学哲学宗教更多>>
- 鹿慢性消耗性疾病免疫组织化学检测方法的建立与优化
- 2012年
- 【目的】在自主研制的抗鹿朊蛋白单克隆抗体基础上,建立和优化了鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)诊断方法。【方法】按照常规石蜡病理切片制作方法制备阴性和阳性切片,应用ABC法对获得的5株单抗进行免疫组织化学检测。【结果】试验结果表明,5株单抗(编号分别为5A5、3B2、6D12、5E3、1F5)中只有5E3和3B2可以与CWD的阳性鹿延髓切片发生特异性免疫反应,而且5E3的反应较强烈,3B2的反应较弱,其它3株单抗则在试验的浓度范围内无特异性免疫反应。此外,5E3的稀释比例为1:10 000时,免疫反应效果达到最佳状态。【结论】实验结果表明,单抗5E3可以用于我国CWD的监测。
- 张鑫鑫刘焕奇刘雨田孙成友迟田英于小静邓明义王志亮
- 关键词：单抗免疫组织化学
- 免疫组织化学方法检测牛海绵状脑病(BSE)和羊痒病(Scrapie)
- 2004年
- 按照本实验室建立的牛海绵状脑病免疫组织化学方法 ,将自制单克隆抗体4C11与PK酶消化处理的牛海绵状脑病阳性切片和羊痒病阳性切片进行反应 ,发现单抗4C11不仅能与牛海绵状脑病阳性切片发生强烈的免疫反应 ,而且也能与羊痒病阳性切片发生强烈的免疫反应。从阳性切片和阴性切片的实验来看 ,单克隆抗体4C11没有非特异性染色反应 ,并且也没有背景染色。用瑞士进口单抗6H4进行的对照实验获得了同样的结果。因此 ,可以用自制的单克隆抗体4C11替代昂贵的进口单抗6H4来监测我国的牛海绵状脑病和羊痒病。
- 刘雨田吴晓东邹艳丽王志亮
- 关键词：免疫组织化学方法牛海绵状脑病BSE羊痒病SCRAPIE
- 痒病诊断技术
- 本标准规定了痒病临床诊断和实验室诊断的技术要求。 本标准适用于绵羊和山羊的痒病诊断。
- 王志亮刘雨田吴●三吴晓东于建敏邹艳丽王树双
- 关键词：痒病
- 文献传递
- 中国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30基质蛋白基因和融合蛋白基因的分子特征分析被引量：5
- 2010年
- 对我国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30进行基质蛋白(M)和融合蛋白(F)基因序列测定,并进行分子生物学特征分析。首先应用逆转录聚合酶链式反应扩增出M和F基因片段,对聚合酶链式反应产物进行直接测序,然后对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析。China/Tib/Gej/07-30的M基因由1483个核苷酸组成,编码335个氨基酸,与其他分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.4%～97.7%和97.0%～98.2%。F基因由2411个核苷酸组成,编码546个氨基酸,与其他分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85.5%～96.1%和94.3%～98.2%。China/Tib/Gej/07-30的F蛋白含有信号肽序列和跨膜结构域,序列高度变异。F蛋白第104～108位和第109～133位氨基酸位点分别是高度保守的裂解位点和融合肽结构域。F蛋白还含有序列高度保守的三个七肽重复区。China/Tib/Gej/07-30的M基因3′端的非编码区(UTR)长度为443个核苷酸,GC含量高达68.4%,与其他PPRV毒株的同源性为82.4%～93.5%。China/Tib/Gej/07-30的F基因5′UTR区长度为634个核苷酸,GC含量高达70.0%,与其他PPRV毒株序列相似性为76.2%～91.7%。
- 包静月赵文姬王志亮李林吴国珍吴晓东刘春菊王君玮刘雨田李金明王英丽
- 关键词：小反刍兽疫病毒野生株基质蛋白非编码区
- 两种PrP截短型多肽的神经毒性
- 2005年
- PrP106～126和PrP118～135分别对应于人PrPC序列中106～126残基和118～135残基,两个肽段在试验中具备PrPSc的部分病理特症,因此PrP106～126和PrP118～135就成为了研究PrPSc神经细胞毒性致病机制的合适的模型。
- 袁志栋王志亮刘雨田吴晓东刘海生
- 关键词：神经细胞毒性
- 麋鹿重组朊蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：1
- 2012年
- 为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrPc)为免疫原免疫PrPc基因敲除小鼠(PrPc-null mice)。两次加强免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用3次有限稀释法实现杂交瘤细胞的亚克隆,筛选出5株能稳定分泌针对麋鹿重组成熟朊蛋白特异性单克隆杭体(McAbs)的杂交瘤细胞株5A5、3B2、6D12、5E3、1F5,其腹水ELISA效价均达到1∶10000以上。经鉴定,5株单抗均为IgG抗体,5A5、6D12、5E3株为IgG1亚类,3B2、1F5株为IgG2a亚类。Western blotting鉴定结果表明,获得的McAbs均能特异性识别麋鹿重组成熟朊蛋白和健康麋鹿脑组织匀浆中的PrPc。本研究制备了CWD腹水McAbs,同时也为CWD的研究及其诊断方法的建立奠定了基础。
- 张鑫鑫刘雨田吴晓东刘焕奇王志亮
- 关键词：麋鹿单克隆抗体WESTERNBLOTTING
- 关于近来国际疯牛病状况的分析与评论被引量：4
- 2006年
- 刘雨田邹艳丽洪伟华
- 关键词：疯牛病病状技术壁垒肉骨粉稳定带
- 免疫组化法检测我国疯牛病结果初报被引量：12
- 2002年
- 将固定好的脑组织样品 ,按常规方法制备成石蜡切片。切片脱蜡入水 ,用蛋白酶K消化去除正常PrP蛋白 ,留下异常PrP蛋白。然后用适当工作浓度的兔抗牛PrP血清孵育切片 ,再用DAKOChemMateTM检测试剂盒处理。同时结合H·E染色法检测我国疯牛病。实验发现 ,在1131例国内样品中免疫组化的实验结果均为阴性 ,H·E染色的结果均未发现有特征性海绵状空泡变化。实验进一步证实 ,免疫组织化学方法是一种操作简单、结果容易判断、价格低廉的检测手段 。
- 刘雨田邹艳丽王志亮
- 关键词：免疫组织化学牛脑
- 一种高灵敏度检测动物布鲁氏菌病的方法
- 本发明公开了一种微滴数字PCR法检测布鲁氏菌病的引物、探针及检测方法，其中引物和探针适用于微滴数字PCR法检测，并且能够准确地检测出布鲁氏菌质粒，与猪链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、苍白念球菌、牛分...
- 张皓博樊晓旭刘雨田孙明军刘婷婷亓菲邵卫星田莉莉孙翔翔迟庆安冯淑芳仵国政孙世雄刘蒙达付树芳焉鑫张培培魏润宇王毓秀孙淑芳范伟兴
- 文献传递
- 我国朊病毒及朊病毒病的研究现状
- 我国朊病毒及朊病毒病的研究主要包括CJD(克雅氏症)、Scrapie(羊痒病)和BSE(疯牛病)的研究,而其他朊病毒病如TME(水貂传染性脑病)和CWD(麋鹿慢性消耗性疾病)的研究还未见报道.本文介绍我国朊病毒及朊病毒病...
- 刘雨田王志亮
- 关键词：朊病毒朊病毒病羊痒病疯牛病
- 文献传递
