包士中
- 作品数：27 被引量：28H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
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- 一种抑制志贺毒素的短肽及其用途
- 本发明公开了一种抑制志贺毒素的短肽，该短肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示，可以通过化学合成或基因重组表达的方法进行大量制备，可以在短肽N端和C端通过添加化学基团、氨基酸、多肽、蛋白质、PEG、标记物等物质进行各种化学或...
- 王慧包士中荫俊史晶侯晓军蔡昆
- 文献传递
- 志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应
- 2008年
- 目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。
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- 关键词：模拟表位
- 人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达被引量：4
- 2007年
- 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。
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- 关键词：原核表达
- 抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体、其制备方法及用途
- 本发明公开了抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体，还公开了该抗体的人源化改构体。上述抗体通过以下方法制备：首先通过分子生物学或其它方法制备抗体的CDR区或可变区或IgG部分或全基因，在原核细胞如大肠杆菌等，真核细胞如酵母菌...
- 王慧史晶荫俊侯晓军蔡昆包士中王琴
- 文献传递
- 鼠源抗B型肉毒毒素Fab抗体库的构建及初步筛选
- 2007年
- 目的:应用重组噬菌体抗体库技术制备抗B型肉毒毒素Fab抗体。方法:用重组B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc)免疫BALB/c小鼠,从其脾淋巴细胞扩增免疫球蛋白Fd段和κ链基因,克隆至表达载体pComb3中,并将抗体Fab段表达于噬菌体表面,建立容量为5.96×106cfu的噬菌体抗体库。以BoNTB/Hc为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选,获得与B型肉毒毒素特异性结合的克隆,并进行序列测定。结果:构建了抗B型肉毒毒素Fab抗体库,筛选出特异性克隆1个。结论:从鼠源噬菌体免疫抗体库中初步获得了特异性抗B型肉毒毒素的Fab抗体。
- 杨秀清王慧史晶侯晓军包士中荫俊
- 关键词：B型肉毒毒素FAB噬菌体抗体库
- 抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体、其制备方法及用途
- 本发明公开了抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体，还公开了该抗体的人源化改构体。上述抗体通过以下方法制备：首先通过分子生物学或其它方法制备抗体的CDR区或可变区或IgG部分或全基因，在原核细胞如大肠杆菌等，真核细胞如酵母菌...
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- 文献传递
- 梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型
- 2006年
- 目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论：设计了针对A，B，E，F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物，以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物（BonAB—P01／P02，BonB-P01／P02，BonE-P01／P02，BonF-P01／P02，TET-P01／P02，TY-P01／P02）。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验，检测特异性良好，没有交叉反应；通用扩增结果显示均得到1100bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到（1～3）×10^3个菌。该检测方法特异性强，灵敏度高，可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。
- 杨慧盈王慧包士中史晶荫俊
- 关键词：PCR检测特异性灵敏度
- 一种抗I型志贺毒素IgY抗体、及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种抗I型志贺毒素的IgY抗体，该抗体可以通过以下方法制备：化学合成或基因重组表达的方法制备无毒性的志贺毒素免疫抗原，通过免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，应用生物化学方法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。该抗体具...
- 王慧侯晓军王琴包士中蔡昆史晶荫俊
- 文献传递
- 人源抗狂犬病毒糖蛋白稳定型抗体精氨酸密码子突变株的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2008年
- 目的:对人源抗狂犬病毒糖蛋白(GPRV)单链二硫键稳定抗体(ScdsFv)进行精氨酸密码子修饰,实现其在酵母中的分泌表达,并检测其生物学活性。方法:参照巴斯德毕赤酵母偏好密码子,对抗GPRV ScdsFv原核表达基因进行密码子修饰,并通过点基因融合技术构建ScdsFv重组酵母表达基因,连接pPIC9K构建重组表达质粒pPIC9K-ScdsFv,电转化毕赤酵母GS115,经筛选后进行甲醇诱导表达。结果:SDS-PAGE及Western blot检测到重组表达质粒在30℃经甲醇诱导表达的蛋白相对分子质量为30000;荧光抗体试验验证ScdsFv能靶向结合GPRV;MTT试验说明ScdsFv能中和狂犬病毒,具有一定的细胞保护作用。结论:重组ScdsFv在酵母系统中可以有效表达,具有较好的生物学活性。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 人源抗A型肉毒神经毒素基因工程抗体及其制备方法与用途
- 本发明公开了人源抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体，该抗体具有序列表中序列35所示的氨基酸序列，本发明还公开了上述抗体的改构体，其重链的氨基酸序列如序列表中序列36所示，轻链的氨基酸序列如序列表中序列37所示。上述抗体通过以下...
- 王慧荫俊史晶侯晓军包士中王忠泽蔡昆
- 文献传递
