占利生
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金湖南省卫生厅资助项目湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pEGFP/MOMP真核表达重组体的构建及表达
- 2005年
- 目的:克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建pEGFP/MOMP真核表达重组质粒,为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据。方法:用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中,阳性重组子经BamHI、KpnI双酶切、PCR扩增及测序鉴定;并经脂质体介导转染HeLa细胞,36h后观察瞬时表达情况。结果:PCR扩增得到约1.2kb的特异性MOMP基因片段;序列测定证实与GenBank登录的D型沙眼衣原体一致;筛选鉴定出真核表达重组体pEGFP/MOMP。结论:成功地构建了pEGFP/MOMP真核表达重组体,并在HeLa细胞中表达了MOMP。
- 粟盛梅李忠玉余敏君占利生唐双阳
- 关键词：PEGFPMOMP真核表达重组质粒主要外膜蛋白脂质体介导
- 问号状钩端螺旋体外膜蛋白Loa22的克隆、表达及对豚鼠的免疫保护作用研究被引量：4
- 2007年
- 目的构建问号状钩体强毒赖型56601株外膜蛋白Loa22的重组质粒,表达Loa22蛋白,研究该蛋白对豚鼠的保护作用。方法以问号状赖型钩体56601株基因组为模板扩增目的基因,将Loa22基因克隆至原核表达载体PQE-31,构建PQE31-Loa22重组体,将其转入大肠杆菌M15中诱导表达目的蛋白。于0、2、4周将蛋白及对照PBS分别经豚鼠腹股沟、腋下免疫豚鼠。每次剂量为蛋白50μg/只,末次免疫后2周,用培养3d的56601株钩体从腹腔攻击各免疫组豚鼠(1ml/只)。连续观察15d,观察各免疫组豚鼠发病情况,并取各免疫组豚鼠的肺、肝、肾做病理切片。分析蛋白Loa22对豚鼠的免疫保护作用。结果成功扩增出Loa22基因,构建原核重组质粒PQE31-Loa22。重组质粒能在大肠杆菌M15中高效表达Loa22蛋白。用Loa22蛋白主动免疫的豚鼠用56601株钩体攻击,结果显示无发病现象,而免疫对照组的豚鼠中出现了食欲不振、活动减少等现象,病理切片有明显改变。结论成功构建了Loa22重组原核表达质粒,表达纯化的蛋白可以使豚鼠抵抗同型钩体的攻击,免疫保护作用为82%。
- 张连英何汉江尹卫国汪文玉占利生谭立志
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白免疫保护
- 衡阳地区STD患者病原体检测结果分析被引量：2
- 2006年
- 目的了解衡阳地区性传播疾病(STD)患者病原体感染情况及特征。方法淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)采用培养法;沙眼衣原体(CT)、人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)核酸采用PCR法;梅毒螺旋体(TP)采用RPR、TPPA法,对2 420例可疑STD患者进行检测分析。结果确诊STD 922例,各种病原体阳性检出率为UU(29.6%)>CT(20.8%)>HPV(17.8%)>NG(17.4%)>MH(6.3%)>HSV(4.2%)>TP(3.9%)。结论本组STD患者中UU感染率最高,CT、HPV感染率次之,TP感染率最低。
- 粟盛梅吴移谋曾铁兵余敏君占利生
- 关键词：性传播疾病病原体
- 钩端螺旋体lipL21基因真核表达质粒的构建及其在HeLa细胞中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL21基因片段的真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染HeLa细胞,探讨其在体外真核细胞中的表达情况,为寻找新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子提供实验依据。方法应用PCR技术从钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增lipL21基因,纯化回收后克隆入pUCM-T载体,再亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+),运用脂质体2000将重组体pcDNA3.1(+)-lipL21转染入HeLa细胞,细胞免疫组化法观察目的基因的表达。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建了lipL21真核表达重组体pcDNA3.1(+)-lipL21,DNA测序显示重组质粒含有561bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变。重组质粒pcDNA3.1(+)-lipL21体外在HeLa细胞中能有效表达目的蛋白LipL21。结论成功构建了钩端螺旋体lipL21基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-lipL21,且能够在体外真核细胞中表达;为进一步筛选新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子奠定了一定的实验基础。
- 汪文玉何汉江谭立志刘传爱占利生蒋显勇
- 关键词：钩端螺旋体DNA疫苗真核表达
- 非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体检测和支原体的药物敏感性分析
- 2006年
- 目的了解衡阳地区非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体（CT）、解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）感染情况压支原体药物敏感性，为临床治疗提供参考依据。方法沙眼衣原体的检测采用PCR法，支原体压药敏试验采用本室研制的支原体分离、鉴定、药敏试剂盒。结果631例非淋菌性尿道炎（NGU）患者几种病原体的感染率分别为CT20．9％．Uu38．7％，Mh5．1％，CT＋Uu5．4％，CT＋Mh1．7％，Uu＋Mh4．0％，CT＋Uu＋Mh1.4％。Uu和Mh对9种抗生素敏感性最高的是克拉霉素，其次分别是交沙霉素和司帕沙星，耐药性最高的是罗红霉素，其次是氧氟沙星。结论CT和Uu是非淋菌性尿道炎的重要病原体，建议本地区支原体感染应首选克拉霉素进行抗感染治疗。
- 粟盛梅余敏君尹卫国曾铁兵唐双阳占利生
- 关键词：非淋菌性尿道炎沙眼衣原体解脲脲原体人型支原体
- 湖南省衡阳地区STD患者病原体检测
- 2004年
- 目的 了解衡阳地区性传播疾病 (STD)患者病原体感染情况。 方法 对 2 4 2 0例可疑STD患者进行检测 :淋病奈瑟菌 (NG)、解脲脲原体 (UU)、人型支原体 (MH)采用培养法 ;沙眼衣原体 (CT)、人乳头瘤病毒 (HPV)、单纯疱疹病毒 (HSV)核酸采用聚合酶链反应 (PCR)法 ;梅毒螺旋体 (TP)采用快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)和TP -PA法。 结果 STD病原体阳性检出率为 38.1% (92 2 / 2 4 2 0 )。在 92 2例中UU占 2 9.6 % ,CT 2 0 .8% ,HPV 17.8% ,NG 17.4 % ,MH 6 .3% ,HSV 4 .2 % ,TP 3.9%。 结论 衡阳地区STD患者中UU感染率最高 ,CT和HPV次之 。
- 粟盛梅吴移谋曾铁兵余敏君占利生
- 关键词：性传播疾病病原体
- GFP-hDaxx融合蛋白高表达下调活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β
- 2003年
- 目的 研究GFP hDaxx融合蛋白瞬时高表达对活化巨噬细胞分泌活性的影响。方法构建GFP hDaxx融合蛋白真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx。将其质粒转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白或GFP的表达与定位 ,并利用Westernblot检测表达产物。通过GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内的瞬时高表达 ,在LPS诱导激活巨噬细胞后 0 .5h、4h、12h时 ,测定活化巨噬细胞分泌细胞因子TNF α和IL 1β的含量。结果 GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内瞬时高表达且定位于细胞核 ,GFP定位于细胞核与细胞浆。GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNF α和IL 1β量明显降低 (在 4h及 12h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1)。结论 hDaxx瞬时高表达可下调活化巨噬细胞分泌细胞因子TNF α和IL 1β。
- 万艳平谭立志刘安元余敏君占利生粟盛梅
- 关键词：活化巨噬细胞分泌TNF-ΑIL-1Β
- 沙眼衣原体感染与血清中抗精子抗体相互关系的研究
- 2004年
- 目的 探讨男性不育患者CT感染与血清中AsAb的关系。方法 应用聚合酶链反应(PCR)与ELISA法对177例男性不育患者分别进行CT和AsAb检测。结果 CT阳性者AsAb的阳性率(27.9％)明显高于CT阴性者的AsAb阳性率(8.3％,X2=12.2,P<0.01)。结论 沙眼衣原体感染可增加AsAb的产生,可能与男性不育有关。
- 粟盛梅刘传爱赵飞骏余敏君占利生唐双阳
- 关键词：沙眼衣原体抗精子抗体男性不育
- 某医学院新生泌尿道支原体感染状况调查被引量：1
- 2008年
- 目的了解大学生泌尿道支原体的感染状况,分析影响大学生泌尿道支原体感染的流行病学因素,为大学生泌尿道支原体感染的预防提供科学依据。方法以某高校医学院2005级新生为研究对象,按文献方法对其尿液进行支原体培养。同时制订调查表进行问卷调查,采用SPSS 13.0进行统计学分析。结果998名大一新生中,阳性65例,其中女性54例,男性11例,总阳性率为6.5%。多因素logistic回归分析发现性别、父母健在情况和家庭居住地与泌尿道支原体的感染有关。结论大学生人群存在泌尿道支原体感染,并且女性感染率明显高于男性。父母健在情况、家庭居住地是影响大学生泌尿道支原体感染的危险因素。
- 郭杨斌占利生余敏君
- 关键词：泌尿道感染支原体学生保健服务
- 钩端螺旋体Lipl21基因真核质粒构建及在HeLa细胞的表达
- 2006年
- 目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白Lipl21基因片段的真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染HeLa细胞,探讨其在体外真核细胞中的表达情况,为寻找新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子提供实验依据。方法应用PCR技术从钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增Lipl21基因,纯化回收后克隆入pUCM-T载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3·1(+),运用脂质体2000将重组体pcDNA3·1(+)/LipL21转染入HeLa细胞,免疫组化法观察目的基因的表达。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建LipL21真核表达重组体pcDNA3·1(+)/LipL21,DNA测序显示重组质粒含有561bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变。重组质粒pcDNA3·1(+)/LipL21在体外HeLa细胞中能有效表达目的蛋白LipL21。结论成功构建了钩端螺旋体Lipl21基因真核表达质粒pcDNA3·1(+)/Lipl21,且能够在体外真核细胞中表达,为进一步筛选新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子奠定了一定的实验基础。
- 何汉江汪文玉李丽华谭立志刘传爱占利生
- 关键词：钩端螺旋体DNA疫苗
