卢俊
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
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- p38丝裂原活化蛋白激酶在罗哌卡因致SH—SY5Y细胞凋亡中的作用
- 2011年
- 目的评价p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）在罗哌卡因致SH—SY5Y细胞凋亡中的作用，以探讨罗哌卡因诱发神经毒性的机制。方法采用随机数字表法，将SH—SY5Y细胞随机分为4组（n=18）：正常对照组（c组）、10μmol／Lp38MAPK特异性抑制剂SB203580组（sB组）、3mmol／L罗哌卡因组（R组）、10μmol／LSB203580＋3mmol／L罗哌卡因组（sB＋R组）。c组在细胞培养液中继续培养；SB组在含10μmol／LSB203580培养液中孵育；R组在含3mmol／L罗哌卡因的培养液中孵育；SB＋R组在含10μmol／LSB203580的培养液中孵育30min后，用含3mmol／L罗哌卡因的培养液继续孵育。各组细胞培养或罗哌卡因孵育4h后采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平和细胞凋亡率，采用Western blot法检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）的表达，采用MTT法检测细胞活力。结果与c组比较，R组和sB＋R组ROS水平升高，p-p38MAPK表达上调，细胞活力降低，细胞凋亡率升高（P〈0．01），sB组上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）；与R组比较，sB组p-p38MAPK表达下调，细胞活力升高，细胞凋亡率降低（P〈0．01）。四组p38MAPK表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论罗哌卡因致SH—SY5Y细胞凋亡作用的机制部分与p38MAPK的激活有关。
- 周树勤张庆国赖露颖卢俊许睿徐世元
- 关键词：酰胺类P38丝裂原活化蛋白激酶类细胞凋亡
- p38MAPK抑制剂SB203580可减少罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡
- 周树勤张庆国赖露颖卢俊许睿徐世元
- 关键词：罗哌卡因活性氧簇P38丝裂原活化蛋白激酶SB203580
- 人AMPKα2基因pEGFP-N1-AMPKα2表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建表达人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pEGFP-N1-AMPKα2载体,转染SH-SY5Y细胞系,观测其上调AMPKα2基因的效果。方法 PCR法扩增AMPKα2基因片段,克隆到pEGFP-N1质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2转染到SH-SY5Y细胞系,经G418筛选阳性克隆后,用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达。流式细胞仪检测转染重组质粒细胞内ROS变化。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,pEGFP-N1-AMPKα2表达载体构建成功。重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2转染SH-SY5Y细胞系后,细胞中AMPKα2蛋白表达量明显增高。SH-SY5Y细胞转染pEGFP-N1-AMPKα2后,ROS含量增多。结论成功构建了人AMPKα2基因的pEGFP-N1-AMPKα2表达载体。pEGFP-N1-AMPKα2能有效上调AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞系中的表达,为将来应用其研究AMPK在局麻药致细胞损伤中的作用奠定了基础。
- 卢俊徐世元崔睿张庆国雷洪伊
- 关键词：局麻药活性氧
- 人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达
- 2011年
- 目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。
- 卢俊徐世元崔睿张庆国雷洪伊
- 关键词：局麻药
- p38MAPK抑制剂SB203580可减少罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡
- 目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK）在罗哌卡因引发神经细胞毒性中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分:SH-SY5Y细胞正常对照...
- 周树勤张庆国赖露颖卢俊许睿徐世元
- 关键词：罗哌卡因活性氧簇P38丝裂原活化蛋白激酶SB203580
- 文献传递
- 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的 评价单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）在罗哌卡因致神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用.方法 SH-SY5Y细胞在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养.将SH-SY5Y细胞按5×105个/孔接种于6孔培养板中.采用随机数字表法,将培养孔随机分为5组：对照组（Ⅰ组）、空载体质粒pEGFP-N1组（Ⅱ组）、重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2组（Ⅲ组）、阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo NC组（Ⅳ组）和重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2组（Ⅴ组）.Ⅰ组细胞不给予任何处理,其余各组按每孔4 μg质粒、10μl脂质体Lipofectamine2000转染SHSY5Y细胞.采用Western blot法测定AMPKα2蛋白表达水平.SH-SY5Y细胞经3 mmol/L罗哌卡因处理后,采用流式细胞术检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用MTT法检测细胞存活情况,计算细胞存活率;分别采用流式细胞术和Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率.结果 重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2可上调AMPKα2蛋白表达;而重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2可下调AMPKα2蛋白表达（P〈0.01）.下调AMPKα2蛋白表达可抑制细胞内ROS的生成,抑制细胞凋亡;而上调AMPKα2蛋白表达可促进细胞内ROS的生成,导致细胞凋亡（P〈0.01）.结论 罗哌卡因可通过激活AMPK引起SH-SY5Y细胞ROS生成增多,从而导致细胞凋亡.
- 周树勤卢俊张庆国许睿赖露颖徐世元
- 关键词：蛋白激酶类酰胺类细胞凋亡
