姬希文
- 作品数：10 被引量：95H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项上海市浦江人才计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭坦布苏病毒E蛋白中和性单克隆杭体的制备被引量：9
- 2012年
- 本试验利用纯化的鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus , DTMUV)奉贤株(FX2010)免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,筛选获得3株能够稳定分泌杭DTMUV的杂交瘤细胞,分别命名为:J1-E5-E4, 7B5和1E5-B6,3株杂交瘤细胞诱导同品系刁、鼠的杭体效价为1:12 800,1:6 400和1:25 600。间接ELISA和IFA结果显示,3株单杭均可以与DTMUV发生特异性反应。进一步研究发现,J1-E5-E4可以与DTMUV-E蛋白结合,使得表达E蛋白的293T细胞显现出特异性的绿色荧光;在病毒中和试验中,J1-E5-E4可以中和DTMUV,使其失去致死鸡胚的能力。这些结果表明,J1-E5-E4是一株针对DTMUV-E蛋白中和表位的单杭,该单杭将在DTMUV诊断和杭原分析中发挥重要作用。
- 姬希文李雪松李国新肖亚莉颜丕熙徐大伟范钊张七斤李泽君
- 关键词：E蛋白单克隆抗体
- 稳定表达流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK细胞系的建立
- 2011年
- 根据流感病毒A/Puerto Rico/8/34株NS1基因的核苷酸序列设计引物,PCR扩增后,将NS1完整开放阅读框分别克隆于pMX载体和PET30a载体,成功构建了pMX-PR8-NS1和PET-PR8-NS1重组质粒。将PET-PR8-NS1重组质粒转化Jm109感受态大肠杆菌,诱导表达获得重组NS1蛋白免疫小鼠制备多抗血清。同时,将逆转录病毒载体系统pMX-PR8-NS1、pCI-NF-KB、PMDSV和MDSV共转染293T细胞,制备逆转录病毒样粒子。将逆转录病毒样粒子感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行抗性筛选。然后经过PCR、RT-PCR、间接免疫荧光鉴定,获得稳定表达PR8病毒NS1蛋白的细胞系,将之命名为MDCK-PR8-NS1细胞系。该细胞系的建立有望为深入开展流感病毒NS蛋白生物学功能的研究以及为扩增NS1基因删除的流感病毒提供了有利的工具。
- 张旭滕巧泱闫丽萍周洁文徐大伟颜丕熙姬希文戴晓光王洪斌高利李泽君
- 关键词：流感病毒NS1基因MDCK
- 鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗构建及免疫原性的初步研究被引量：15
- 2012年
- 鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染引起产蛋鸭产蛋急剧下降。目前,没有预防该病的疫苗。为研究DTMUV DNA疫苗的免疫效果,本研究将DTMUV的E基因插入pCAGGS载体,构建了重组质粒pCAGGS-E。将pCAGGS-E转染293T细胞后,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot检测E蛋白的表达情况。结果显示,两种方法均检测到了E蛋白的特异性表达。将pCAGGS-E用脂质体包裹后通过尾静脉注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测抗体的产生情况。结果表明,随着免疫次数的增加及免疫时间的延长,免疫小鼠的抗体滴度逐渐升高。本研究证明,编码E基因的重组质粒DNA免疫小鼠后能够诱导有效的免疫应答,为DTMUV DNA疫苗的研究奠定了基础。
- 徐大伟李国新李雪松姬希文李云章李泽君
- 关键词：DNA疫苗E基因
- 鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
- 为建立快速检测鸭坦布苏病毒（DTV）的血清学方法，本研究利用纯化的DTV奉贤株（FX2010）作为包被抗原，建立了检测DTV血清抗体的间接ELISA方法，并且对各种检测条件进行了优化。优化后确定的抗原最适包被浓度为1.6...
- 姬希文闫丽萍颜丕熙李国新张七斤李泽君
- 关键词：抗体检测敏感性特异性
- 鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达被引量：9
- 2012年
- 本研究利用RT-PCR方法扩增鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)奉贤株(FX2010)的结构蛋白E基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组表达质粒pET32a-E。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,E基因在大肠杆菌中得到了表达,并且可与抗DTMUV的多克隆抗体发生特异性反应。E基因的成功表达为DTMUV的诊断试剂盒、疫苗等的研制奠定基础。
- 姬希文李雪松边延峰李国新颜丕熙张七斤李泽君
- 关键词：E基因克隆
- 稳定表达甲型流感病毒M1蛋白的MDCK细胞系的建立
- 2011年
- 为建立稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)株M1蛋白的MDCK细胞系,将流感病毒PR8株M基因28～1 009bp序列插入逆转录病毒载体pMX,构建了重组质粒pMX-PR8M,并与pCI-NF-KB、pMDSV和MDSV质粒共转染293T细胞,制备逆转录病毒样颗粒。利用逆转录病毒样颗粒感染MD-CK细胞,经嘌呤霉素筛选获得具有抗性的细胞克隆,通过PCR、RT-PCR和间接免疫荧光试验筛选的鉴定方法。获得1株稳定表达M1蛋白的MDCK细胞系,命名为MDCK-PR8M1。本研究建立的表达M1蛋白的细胞系,为研究流感病毒M1蛋白生物学功能以及扩增含有外源基因的流感病毒提供了有利的工具。
- 张旭滕巧泱周洁文徐大伟颜丕熙姬希文闫丽萍戴晓光张树梅王洪斌李泽君
- 关键词：甲型流感病毒MDCK
- 鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：72
- 2011年
- 为建立快速检测鸭坦布苏病毒(DTV)的血清学方法,本研究利用纯化的DTV奉贤株(FX2010)作为包被抗原,建立了检测DTV血清抗体的间接ELISA方法,并且对各种检测条件进行了优化。优化后确定的抗原最适包被浓度为1.675μg/孔,抗原最佳包被条件为37℃放置2 h后,4℃下过夜,血清的最佳稀释度为1∶200,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000。在优化条件下,阴阳性临界值判定标准为0.432。用建立的间接ELISA方法对禽流感病毒、新城疫病毒、网状内皮增生病病毒、I型鸭肝炎病毒、呼肠孤病毒、禽白血病病毒阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为2.9%和3.9%,显示该方法具有很好的稳定性。用间接ELISA方法对140份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,有108份样品呈现阳性,而琼扩试验只有32份呈阳性结果,而且用该方法检测的阳性样品包括了琼扩试验的阳性样品,证明该方法具有较高的敏感性和特异性。本研究快速检测DTV抗体间接ELISA的建立为该病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。
- 姬希文闫丽萍颜丕熙李国新张七斤李泽君
- 关键词：间接ELISA抗体
- 抗鸭坦布苏病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用
- 本发明公开了一种保藏号为CCTCC No.C201220的杂交瘤细胞株及其分泌的抗鸭坦布苏病毒的单克隆抗体。本发明还公开了检测鸭坦布苏病毒抗体的试剂盒和方法，以及上述单克隆抗体在制备诊断鸭坦布苏病毒病的产品中的应用。本发...
- 李泽君李雪松姬希文
- 文献传递
- 抗鸭坦布苏病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用
- 本发明公开了一种保藏号为CCTCC C201220的杂交瘤细胞株及其分泌的抗鸭坦布苏病毒的单克隆抗体。本发明还公开了检测鸭坦布苏病毒抗体的试剂盒和方法，以及上述单克隆抗体在制备诊断鸭坦布苏病毒病的产品中的应用。本发明利用...
- 李泽君李雪松姬希文
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立
- 本研究利用RT-PCR方法扩增鸭坦布苏病毒/(DTMUV/)奉贤株/(FX2010/)的结构蛋白E基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-E。将其转化受体菌E.coli BL21/(DE...
- 姬希文
- 关键词：间接ELISAE蛋白原核表达单克隆抗体
- 文献传递
