孟雪
- 作品数：5 被引量：21H指数：1
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 功能未知基因C17orf77重组蛋白及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的体外克隆表达C17orf77重组蛋白,制备其多克隆抗体,初步探索该蛋白的生物学作用,观察其细胞系分布特征。方法以HepG2细胞cDNA为模板,PCR扩增C17orf77目的基因片段,构建pET-32a(+)-C17orf77原核表达载体。转化大肠埃希菌,IPTG诱导C17orf77重组蛋白表达并进行Western blot鉴定。以重组蛋白免疫大耳白兔,获得兔抗C17orf77蛋白多克隆抗体,并分析其特异性及检测效价。MTT法观察不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。利用Western blot观察C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况。结果 PCR扩增获得C17orf77基因片段,成功诱导表达了C17orf77重组蛋白。制备了多克隆抗-C17orf77,ELISA检测抗体效价>1∶1280000。不同浓度C17orf77重组蛋白对HepG2细胞无明显增殖促进或抑制活性(P>0.05)。C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系均有分布。结论利用体外克隆表达的C17orf77重组蛋白可制备效价和特异性均较高的多克隆抗体。HBV感染相关基因C17orf77在体外肝脏的间质和实质细胞,以及CD4+T细胞系(Jurkat细胞)均有不同程度的表达。提示该基因可能与HBV感染的致病过程相关。
- 孟雪顾红岩李辉孙月詹永婧张仁雯郝晓花魏红山李兴旺
- 关键词：基因抗体重组蛋白质类
- EV71感染者儿茶酚胺水平的研究被引量：19
- 2013年
- 目的比较EV71感染所致的各期手足口病患儿血和尿去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DO)此3种儿茶酚胺(CA)类物质的水平,观察神经系统受累期进展至心肺功能衰竭期此3种CA的变化。方法收集2011年8月至12月首都医科大学附属北京地坛医院收治的手足口病患儿共106例,筛选EV71阳性者进行CA检测。将患者分为4组,即手足口出疹期(1期)患儿为A组;神经系统受累期(2期)患儿为B组,其中未使用糖皮质激素者为B1组,使用糖皮质激素者为B2组;心肺功能衰竭前期(3期)患儿为C组;心肺功能衰竭期(4期)患儿为D组。以同期于本院门诊体检健康儿童为对照组。结果与对照组相比,A～D组患儿体内CA水平均有不同程度的升高。C组患儿DO、NE和E水平较对照组显著升高(P均=0.000),C组患儿血浆3种CA水平较A、B1、B2组显著升高(P均=0.000);C组患儿尿液中3种CA水平较A、B1、B2组显著升高(P均=0.000)。C组患儿发病期3种CA水平较恢复期差异有统计学意义(P=0.003、0.002和0.005),而A组、B1组、B2组发病期仅DO与NE较恢复期显著升高(P均<0.05)。结论手足口病1期患儿存在神经系统受累的可能。对2期患儿进行CA检测,可以预警病情。3和4期的患儿血浆CA水平较1和2期显著升高,且DO会先于NE和E升高,病程进入4期后,NE与E亦显著升高。糖皮质激素治疗对进入2期患儿的CA水平并无显著影响。
- 费晓方凯李兴旺曾慧慧孙月孟雪
- 关键词：肠道病毒71型儿茶酚胺酶联免疫吸附法
- FAM172A及其异构体重组蛋白对体外培养肝细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的体外克隆人类基因FAM172A,构建其原核表达载体并诱导其重组蛋白的表达,制备兔抗FAM172A重组蛋白的多克隆抗体,观察其在不同细胞系的表达情况。观察FAM172A-1和FAM172A-3蛋白对L02细胞增殖的影响。方法利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及PCR技术,构建原核表达质粒pET-32a(+)-FAM172A-1和pET-32a(+)-FAM172A-3。诱导该基因不同异构体重组蛋白的表达,并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)技术进行鉴定。纯化后的重组蛋白FAM172A-1和FAM172A-3与肝细胞L02细胞共孵育,观察不同浓度的重组蛋白对细胞增殖的影响。利用纯化后的FAM172A(异构体3)重组蛋白免疫大耳白兔,获得抗FAM172A-3蛋白的多克隆抗体,利用酶联免疫吸附法(ELISA)以及Western blot技术对获得的多克隆抗体进行效价分析及特异性检测。结果成功扩增获得FAM172A(异构体1、3)的基因片段,测序结果与GenBank已公开的基因序列一致;成功表达FAM172A(异构体1、3)的重组蛋白,经过Western blot鉴定正确;纯化后的重组蛋白FAM172A(异构体1、3)与L02细胞共孵育结果发现,两者对L02细胞在一定浓度范围内均有促进细胞增殖的作用。所制备的兔抗人FAM172A-3重组蛋白的多克隆抗体,ELISA检测显示其效价可达1︰1 280 000,Western blot检测证实该多克隆抗体的特异性良好;Western blot分析显示,该蛋白在肝脏间质细胞和实质细胞均有一定程度的表达。结论 FAM172A蛋白在肝实质细胞及肝间质细胞均表达,且其重组蛋白可以促进L02细胞增殖,推测该基因可能与肝细胞损伤、肝纤维化以及肝细胞再生等发生机制有关。
- 张仁雯康艳芳乔雍郝晓花常路丝李红敏任慧张晓静孟雪李兴旺魏红山
- 关键词：多克隆抗体肝细胞细胞增殖
- C7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析
- 2013年
- 目的体外克隆表达并纯化C7orf69重组蛋白,对C7orf69蛋白进行生物信息学分析。方法 PCR扩增C7orf69目的基因片段,构建原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定,Ni-NTA纯化目的蛋白。结果扩增获得序列完全正确的C7orf69基因片段(自然变异体),重组蛋白以包涵体的形式高效表达,在非变性条件下获得较高纯度的重组蛋白。生物信息学软件预测C7orf69蛋白(含信号肽)含有PKC、CK2磷酸化位点和N-十四烷基化位点。结论成功的对分泌蛋白C7orf69进行了基因克隆、表达与初步纯化,为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。
- 顾红岩孟雪李辉郝晓花李兴旺魏红山
- 关键词：基因分泌蛋白
- C9orf47-1重组蛋白的克隆表达及其对HepG2细胞周期的调控作用
- 2014年
- 目的克隆表达C9orf47-1蛋白,探索其可能的生物学功能。方法构建C9orf47-1原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;纯化目的蛋白,制备兔源多克隆抗体;采用生物信息学软件对C9orf47-1蛋白进行生物信息学分析;采用Western blot检测其在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况,及重组蛋白对HepG2细胞内质网应激的影响;采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响。结果 PCR扩增获得序列完全正确的C9orf47-1基因片段,构建的C9orf47-1原核表达载体能在大肠埃希菌中以包涵体的形式表达C9orf47-1重组蛋白;重组蛋白经Ni-NTA纯化后免疫大耳白兔,获得的多克隆抗体效价高达1∶640 000,并识别C9orf47-1蛋白;C9orf47-1蛋白在4种细胞系中均有表达,其中在HepG2和Jurkat中的表达量高于L02和LX2;重组蛋白未引起HepG2细胞的内质网应激,但可引起细胞周期的变化:延长G1、G2期,缩短S期(P<0.05)。结论 C9orf47-1重组蛋白具有抗原性,该蛋白对肝细胞周期(G2/S)有一定的阻滞作用。
- 顾红岩孟雪李辉郝晓花李兴旺魏红山
- 关键词：HBV分泌蛋白
