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巢式PCR分型检测非典型肺炎病人痰液标本中的军团菌: 宣瑞红朱庆义李连青; 关键词：非典型肺炎军团菌巢式PCR

16S rRNA PCR基因测序鉴定临床标本军团菌被引量：1: 2010年; 目的建立军团菌PCR基因测序鉴定方法,探讨广东地区非典型性肺炎患者军团菌感染状况。方法 2008年7月至2009年6月对广东地区各社区医院采集的100例非典型性肺炎痰液标本,采用军团菌16S rRNA基因片段作PCR试验,基因测序法对PCR结果进行鉴定。结果 100例非典型性肺炎患者痰液16S rRNA PCR试验阳性13例,其中12例经测序鉴定为嗜肺军团菌,1例测序结果阴性,结果表明PCR试验敏感性100%,特异性98.86%。结论 16S rRNA PCR基因测序不仪可以提高阳性率,而且可以排除假阳性。本研究结果显示,广东地区各社区医院内非典型性肺炎患者的军团菌感染率为1 2%。; 宣瑞红王娟胡朝晖周向红朱庆义; 关键词：肺炎聚合酶链反应微生物敏感性试验

聚合酶链反应-酶切分型鉴定广州地区环境水源军团菌被引量：4: 2010年; 【目的】探讨聚合酶链反应-酶切分型在快速鉴定环境水源军团菌方面的应用价值,并了解广州地区环境水源军团菌的分布状况。【方法】对广州地区采集的44份环境水样,作军团菌分离培养,再对分离菌株进行16Sr DNA PCR-酶切分型鉴定、16S rDNA基因测序和mip基因测序鉴定。【结果】在广州地区环境水源分离的112株军团菌,经聚合酶链反应-酶切分型鉴定、16S rDNA基因测序和mip基因测序鉴定,检出嗜肺军团菌66株,非嗜肺军团菌46株,其中菲氏军团菌20株,戈氏军团菌17株,橡树岭军团菌7株,长滩军团菌2株。【结论】聚合酶链反应-酶切分型检测环境水源军团菌是一种简便、快速、特异的鉴定方法;在广州地区环境水源中普遍存在军团菌,主要是嗜肺军团菌,其次是菲氏军团菌,戈氏军团菌,橡树岭军团菌和长滩军团菌。; 赵利伟胡朝晖宣瑞红刘洋敏朱庆义王娟詹晓勇; 关键词：军团菌基因测序

军团菌分子生物学分型测定及其实用性研究进展被引量：13: 2010年; 军团菌病首次暴发至今已有30多年历史,临床上对于军团菌的检测方法很多,细菌分离培养是军团菌检测的"金标准"。近年来,分子生物学方法检测军团菌已被越来越多的实验室所认可。本文对军团菌分子生物学检测和分型方法及其用于检测的目的基因作简要概述,并对其优劣和实用价值进行探讨。; 宣瑞红胡朝辉朱庆义; 关键词：军团菌分子生物学基因分型

实时荧光定量PCR检测痰标本中军团菌属被引量：4: 2011年; 目的建立荧光定量PCR方法,用于检测军团菌属特异性16S rRNA基因,并探讨广州地区军团菌属感染状况。方法利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,对广东省中医院采集的532例肺部感染患者痰液标本进行检测。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属细菌检测结果均为阴性;检测灵敏度为102CFU/ml,临床检测532例肺部感染患者的痰液标本,荧光法检出军团菌阳性43例,阳性率为8.08%,16S rRNA PCR法加基因测序验证阳性率为7.71%,两者检测结果差异无统计学意义,表明其具有较好的符合性和等效性。结论 16S rRNA基因荧光定量PCR法检测患者痰液标本中军团菌属,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌属感染调查及快速检测。; 黄宪章周华友唐小龙熊玉娟胡朝晖刘洋敏宣瑞红赵利伟李连青朱庆义; 关键词：荧光定量聚合酶链反应痰液

军团菌测序鉴定与分子分型研究进展: 2010年; 用分子生物学方法检测军团菌已经被越来越多的专家和实验室所认可,其中以基因测序为基础的军团菌鉴定和分型方法是目前认为最客观、准确且具有较好重复性的方法。军团菌常用的测序靶点有16S rRNA基因、mip基因、rpoB基因、dotA基因、23S-5S rDNA基因间隔区、5S rRNA基因、gyrA基因、dnaJ基因、rnpB基因等位点,但观其分型效果、重复性、流行病学可信度及分辨能力,最具优势的是欧洲军团菌感染工作组(EWGLI)提出的利用7个基因(flaA,mompS,pilE,asd,mip,proA,neuA)测序对军团菌进行分型。随着基因测序技术和序列数据库的发展,基因测序在军团菌的鉴定、分型中发挥着越来越重要的作用。本文对基因测序鉴定军团菌的技术方法及其优缺点和实用价值做一简要概述。; 宣瑞红胡朝晖朱庆义; 关键词：军团菌基因测序分子生物学

临床标本军团菌分离方法研究被引量：3: 2010年; 目的建立临床痰液标本军团菌分离培养标准检验方法,提高培养阳性率。方法采集50例新鲜痰液标本分为两组,一组直接预处理后进行培养,另一组加入标准菌株后再预处理及培养。预处理采用液化处理,然后分别采用直接接种、酸处理或热处理后再接种军团菌选择性BCYEα-DGVPC培养基,观察菌落生长情况。根据军团菌生长缓慢及菌落形态和在缺乏L-半胱氨酸的平板、血平板上不生长的特点作初步判断、生化反应及PCR法确证。结果 50例未加菌的痰液均未分离出军团菌;50例加有军团菌的模拟痰标本直接接种的检出率为58%,其中酸处理的标本检出率为70%,热处理的标本检出率为66%。3种培养方法进行比较,单独的热处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.261),单独的酸处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.003),而酸处理和热处理培养阳性结果比较并不具有一致性。结论酸处理和热处理2种方法均可以提高军团菌检出率,其中酸处理可以显著提高军团菌检出率。; 宣瑞红胡朝晖王娟邓小玲朱庆义李连青

环境水源和临床标本军团菌检测及酶切分型研究: 军团菌(Legionella)是一种兼性胞内寄生菌，在环境水源中分布甚广，是引起人类军团菌病的重要病原体。目前已确认军团菌有50多个种，70多个血清型，接近20个种有临床分离报道，其中嗜肺军团菌(Legionellapn...; 宣瑞红; 关键词：军团菌临床标本酶切分型; 文献传递

荧光定量聚合酶链反应检测临床痰液标本中军团菌: 2010年; 目的建立快速、特异、敏感的TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测军团菌16SRNA基因。方法军团菌标准菌株购自美国标准菌种收藏所,临床痰标本取自南方医科大学南方医院257例病原不明肺炎住院患者。提取菌种DNA及临床痰标本DNA,通过对标准菌株及临床痰液标本DNA分别进行待考核试剂与16SrRNAPCR检测及测序,验证待考核试剂方法的敏感性、特异性。结果荧光定量PCR检测灵敏度为10cfu/mL,比16SrRNA定性PCR检测灵敏度381cfu/mL高38倍。257例病原不明肺炎患者的临床痰标本细菌培养检出嗜肺军团菌血清型1型1例。待考核试剂和16SrRNAPCR方法检测阳性率分别为8.95(23/257)和8.95(23/257),其中2例不符合,1例待考核试剂阳性16SrRNAPCR方法阴性,另一例16SrRNAPCR方法阳性,待考核试剂阴性。二者总符合率为99.22(255/257),其中阳性符合率为95.65(22/23),阴性符合率为99.57(233/234)。结论待考核试剂荧光定量PCR检测军团菌标准菌种敏感性强,特异性好,用于临床痰标本军团菌检测时假阳性率为4.35,与16SrRNAPCR方法及测序比较具有较好的符合性和等效性。; 裘宇容芮勇宇耿穗娜苏斌胡朝晖刘洋敏宣瑞红赵利伟朱庆义; 关键词：聚合酶链反应

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宣瑞红

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