崔锦
- 作品数：5 被引量：35H指数：3
- 供职机构：河南农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学更多>>
- α-淀粉酶基因的体外诱变及在毕赤酵母中表达
- 本研究采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BrdUTP)掺入法，即在PCR反应体系中加入一定比例的5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP)，对野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因(pHN8004)进行...
- 崔锦
- 关键词：Α-淀粉酶基因体外诱变毕赤酵母
- 文献传递
- α-淀粉酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究被引量：5
- 2006年
- 以克隆自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因质粒(pHN8004)为模板,通过PCR方法将α-淀粉酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A中,转化毕赤酵母GS115.利用甲醇对重组毕赤酵母GS115(pHBM905AM1)进行诱导,实现了表达.培养温度为28℃,用体积分数为1.0%的甲醇诱导,第7天分泌表达的α-淀粉酶酶活性最高,为1 081 U.mL-1,该酶的最适反应温度和最适反应pH值分别为50℃和5.9.
- 崔锦柯涛马向东
- 关键词：Α-淀粉酶基因毕赤酵母酶学性质最适温度最适PH值
- 一种简便快速筛选重组子的方法被引量：6
- 2005年
- 目的:根据碱裂解法抽提质粒DNA的原理,研究应用快检缓冲液方法挑取重组子克隆,从而获得简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率的筛选重组子的方法。方法:不需抽提质粒,只要将菌落接入快检缓冲液后直接进行普通琼脂凝胶电泳分析,就可以快速筛选出重组子。结果:结果和提取质粒酶切鉴定结果一致。结论:经实验证明用快检缓冲液方法筛选重组子是一种简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率并且可靠的方法。
- 崔锦李林珂马向东
- 关键词：重组子
- α-淀粉酶基因启动子-35区的诱变及其对大肠杆菌内表达量的影响被引量：3
- 2006年
- 对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHNH003为模板,通过PCR得到该α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列截短141bp的基因,并通过定点诱变改变该截短基因启动子-35区第2位和第3位的碱基(即TGCACA→TTGACA),分别把这2个基因克隆至pBlue-script KS+并转化大肠杆菌DH5α。并把PHNH003转化至大肠杆菌DH5α,作为对照菌株。结果表明,含截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照菌株提高24%;含点突变的截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照提高100%。并分析了α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列及-35区2个碱基的突变对基因在大肠杆菌中表达量的影响。
- 黄春晓崔锦马向东
- 关键词：Α-淀粉酶基因启动子定点诱变大肠杆菌
- 一株蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究被引量：20
- 2006年
- 从牛奶场采集的土壤样品中筛选得到1株蛋白酶的高产菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌,其蛋白酶活力可达682.5U/ml。研究表明:酶反应最适温度为55℃,最适pH值为8.5。
- 李林珂高玉千崔锦马向东
- 关键词：蛋白酶枯草芽孢杆菌
