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食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究被引量：1: 2011年; 采用食蟹猴耳部成纤维细胞作为核供体利用电融合法构建猴-猪异种核移植胚胎,研究其核重编机制并寻找适宜的培养基,初步建立食蟹猴-猪异种核移植体系。结果显示:(1)重构胚胎激活后3 h,供体核的大小基本不发生变化,但在激活后6 h大部分形成膨大的类原核。(2)食蟹猴-猪异种核移植胚胎融合率为74.2%,有70.5%的重构胚胎发生卵裂,29%的卵裂胚胎发育到桑椹胚阶段。(3)在NCSU-23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中,重构胚突破4-细胞阻滞发育到8-细胞以上的比例分别为23.5%和17.0%,在NCSU-23培养基中的为19.9%,但是只有在NCSU23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中重构胚胎发育到囊胚阶段(1.4%vs1.1%),尽管差异不显著。本研究首次建立了食蟹猴-猪异种体细胞克隆体系。; 吕培茹刘红波左二伟杨小淦宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕; 关键词：食蟹猴异种核移植培养基

一种鸡MDA5基因启动子及其应用: 本发明公开了一种鸡MDA5基因启动子，其序列如序列表SEQ ID NO：3所示，所述的MDA5基因启动子序列长度为2487bp。本发明还公开了MDA5基因启动子的克隆方法及其应用。本发明验证了鸡MDA5基因启动子在细胞中...; 陆阳清张文馨陈东阳左二伟卢克焕; 文献传递

一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法: 本发明涉及性别鉴定技术领域，特别涉及一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法，本发明通过在Y染色体上插入荧光报道基因，通过荧光报道基因的荧光表达，准确鉴定出哺乳动物的胚胎性别，该方法简单、高效、准确、损伤小；在构建Y染色体含荧光报道...; 张明赵秀玲左二伟陆阳清魏巍; 文献传递

一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法: 本发明涉及性别鉴定技术领域，特别涉及一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法，本发明通过在Y染色体上插入荧光报道基因，通过荧光报道基因的荧光表达，准确鉴定出哺乳动物的胚胎性别，该方法简单、高效、准确、损伤小；在构建Y染色体含荧光报道...; 张明赵秀玲左二伟陆阳清魏巍; 文献传递

转红色荧光蛋白基因细胞非侵入式人工智能检测与预测体系的建立: 本研究利用激光光镊拉曼光谱结合基于主成分分析的BP人工神经网络(feed-forward backpropagation network)对新生巴马小型猪肾脏转红色荧光蛋白成纤维细胞进行了光谱分析、模式识别和预测。本实验...; 刘红波杨小淦吕培茹左二伟王献伟胡林林宁淑芳陆阳清卢晟盛卢克焕; 关键词：转基因红色荧光蛋白主成分分析 BP人工神经网络; 文献传递

基于AMEL基因位点差异的水牛性别PCR鉴别方法被引量：2: 2015年; 【目的】建立检测不同性别水牛染色体AMEL基因位点差异的PCR鉴别方法,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供简便可靠的检验手段。【方法】采用PCR扩增不同性别水牛染色体中的AMEL基因,Clone Manager 9.0软件分析序列差异,BLASTn程序分析基因同源性,MEGA 6.06软件构建系统发育进化树。【结果】以水牛血液基因组DNA为模板、amel B1为引物,引物退火温度60℃,公水牛可扩增出两条清晰条带,长度分别为376（AMEL-X基因）和304 bp（AMEL-Y基因）;母水牛仅扩增出1条清晰条带,长度为376 bp（AMEL-X基因）。与AMEL-X基因相比,水牛AMEL-Y基因缺失155-226区域的72 bp,同时存在20个基因型多态位点。临床检测结果证实,基于AMEL基因的PCR鉴别结果与实际性别的吻合率达100%,amel B1引物的灵敏度为0.5 ng模板量。BLASTn比对分析结果显示,水牛AMEL-X和AMEL-Y基因与不同哺乳动物的对应序列存在高度保守性,其相似性均接近或高于90%,与牛存在最近的亲缘关系。【结论】AMEL基因在哺乳动物中高度保守,且在不同性别水牛中呈多态性特征,以其作为分子靶标建立的水牛性别PCR鉴定方法切实可行,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供了一个更便捷、高效的检验手段。; 李婷婷左二伟李孟琪谢龙杨欢卢晟盛陆阳清许惠艳李永国陆之泽杨小淦卢克焕; 关键词：水牛 PCR 性别鉴定

Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响: 2013年; 【目的】探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础。【方法】活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布。以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况。【结果】以15μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51%、89.69%和90.49%,其中处理48和72 h的G0/G1期细胞比率显著高于对照组(P<0.05)。血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12%和90.46%。Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率(15.05%),显著高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果(P<0.05)。【结论】Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率。; 许常龙秦祖兴梁明明胡林林罗茜崔静辉罗军左二伟许惠艳卢晟盛卢克焕; 关键词：食蟹猴异种核移植细胞周期胚胎发育

基于近红外拉曼光谱的猪卵母细胞激活人工智能监控体系的初步建立: 猪卵母细胞胞质激活是猪转基因体细胞克隆产业化的关键环节之一,通过研究激活后卵母细胞的代谢组学特征,来实现对于卵母细胞激活效果的人工智能监控具有重要的应用价值。本实验旨在建立服务于猪体细胞克隆产业化研究的猪卵母细胞激活人工...; 刘红波吕培茹胡林林杨小淦左二伟宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕; 关键词：代谢组学卵母细胞主成分分析 BP人工神经网络人工智能; 文献传递

细胞荧光原位杂交方法: 本发明公开了一种细胞荧光原位杂交方法，包括预处理和杂交，预处理采用75％的低渗液进行低渗处理；杂交之前进行鱼精DNA的预杂交试验，预杂交时间为1‑2h。实际使用表明，该法能够得到更为清晰、直观、准确的染色结果，实现了快速...; 张明赵秀玲左二伟濮黎萍张鹏飞陈富美候振徐壮壮; 文献传递

miRNA-145、Oct4和Sox2基因在小鼠早期胚胎发育分化中的表达情况被引量：1: 2013年; 【目的】揭示miRNA-145、Oct4和Sox2基因与早期胚胎细胞表型间可能存在的关联,为阐明miRNA-145调控早期胚胎发育分化的分子机制奠定基础。【方法】利用手术法收集SPF级昆明小白鼠体内生产的2-细胞胚胎和囊胚,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测小鼠2-细胞胚胎和囊胚中miRNA-145、Oct4和Sox2基因的表达情况。【结果】在小鼠早期胚胎由2-细胞胚胎发育至囊胚的过程中,miRNA-145在囊胚中的表达量显著高于在2-细胞胚胎中的表达量(P<0.05,下同),而Oct4和Sox2在囊胚中的表达量显著低于在2-细胞胚胎中的表达量。【结论】miRNA-145基因表达量上调与Oct4、Sox2基因表达量下调是随着小鼠早期胚胎发育分化的进行同时发生。; 王塑天李敏霞娄娟左二伟陆阳清卢克焕杨小淦; 关键词：小鼠早期胚胎发育分化 OCT4 SOX2

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左二伟

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