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IIn-UK融合基因在CHO细胞中的高表达研究被引量：2: 2004年; 目的 :构建新型高效真核表达载体 ,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体低分子量尿激酶 (IIn UK)在CHO细胞中的高表达。方法 :利用常规分子生物学方法 ,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化 ,构建了一系列新型真核表达载体 ,以IIn UK融合基因为目的基因 ,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力 ,然后挑选高表达的克隆 ,通过MTX加压扩增 ,以提高IIn UK融合基因的拷贝数及表达水平。结果与讨论 :构建了 5种新型真核表达载体 ,并筛选出优化的真核表达载体 ,通过MTX加压扩增 ,实现了IIn UK融合基因在CHO细胞中的高表达 ,表达量达到 10 μg/ (10 6细胞·2 4h )。; 刘志刚林建波张国强安怀杰徐桂清俞炜源; 关键词：真核表达载体重组蛋白

哺乳动物细胞高效表达载体的优化被引量：2: 2006年; 目的:优化哺乳动物细胞表达系统,提高目的基因的表达效率。方法:以组织型纤溶酶原激活剂(tPA)为报告基因,利用本实验室建立的CHOfrt/dhfr-细胞定点整合表达系统,对多种表达调控元件(包括hCMV和hEF-1α启动子、hCMV增强子、hEF-1α1st内含子及翻译增强子H213和V163等)及其多种组合的表达效率进行了系统的比较和评价。结果:hCMV启动子与H213组合以及hEF-1α启动子与V163组合的表达效率分别是仅含hCMV启动子的156.6%和139.5%。结论:该研究为构建高效的哺乳动物细胞表达载体奠定了基础。; 张国强刘志刚刘珊俞炜源

CHO细胞高效表达载体的优化被引量：2: 2006年; 目的:研究分析中国仓鼠EF1-α基因的转录调控序列,以构建新型高效表达载体。方法:利用常规分子生物学技术,构建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻译区调控序列元件的新型真核表达载体。以组织型纤溶酶原激活剂突变体(k2tPA)作为报告基因,利用本室已建立的CHO-dhfr--Z+定点整合表达系统比较载体表达外源基因的能力,挑选表达量高的载体。进一步添加翻译增强子(H213及V163)序列,再进行评价。结果:CHEF1-α5′UTR及启动子+3′UTR 1.65 kb、CHEF1-α5′UTR及启动子+3′UTR 2.7 kb这2种组合均可有效提高目的基因tPA的表达,表达效率与对照载体相比分别提高了65.9%和54.5%。在添加翻译增强子V163后,载体pMCEdEF53Ⅲ-163 frt-k2 tPA的表达效率为对照载体的2.65倍。结论:该载体系统在重组蛋白药物的研发方面具有良好的应用前景。; 刘珊刘志刚张国强俞炜源; 关键词：基因表达组织型纤溶酶原激活物

哺乳动物细胞高效表达载体的优化: 哺乳动物细胞由于有内质网和高尔基体等可用于进行蛋白质糖基化的结构和机制以及具有与人十分相似的糖基化方式，它表达的蛋白质往往具有天然蛋白的构象及生物学特性，这是大肠杆菌、酵母及昆虫表达所无法比拟的优点。但是，哺乳动物细胞表...; 张国强; 关键词：哺乳动物细胞细胞表达基因表达; 文献传递

哺乳动物细胞高效表达系统研究进展被引量：11: 2005年; 哺乳动物细胞高效表达系统是基因工程制药研究中的一个重要内容,而表达载体和宿主细胞是哺乳动物细胞表达系统的2个基本组成部分。近年来通过降低目的基因的位置效应、提高目的基因的转录和翻译水平以及目的基因的拷贝数等方面构建哺乳动物细胞高效表达载体。与此同时,研究者也对宿主细胞进行了多方面的改造,使之能更好地适应工业化大规模培养的要求,从而降低细胞培养和产品纯化的成本。本文就哺乳动物细胞高效表达载体的构建及宿主细胞的改造等方面的最新进展作一简述。; 张国强刘志刚俞炜源; 关键词：基因工程制药宿主细胞

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张国强