张清林
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：徐州市中心医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金徐州市科技局社会发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏β-AR变化的比较被引量：1
- 2008年
- 目的比较糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏β肾上腺素受体(β-AR)及其介导的功能变化。方法采用链脲佐菌素(STZ)注射制胰岛素依赖性糖尿病大鼠模型和高血压糖尿病大鼠模型,放射配体结合实验和离体左心房收缩功能实验等方法观察心脏β-AR及功能的改变。结果与对照大鼠相比,糖尿病大鼠心脏β-AR的最大结合容量(Bmax)下降31%(P<0.05),KD值不变;高血压糖尿病大鼠心脏β-AR的Bmax增加27%(P<0.05)。与对照大鼠相比,糖尿病大鼠左心房β-AR介导的最大收缩反应(Rmax)下降69%(P<0.01);高血压糖尿病大鼠左心房β-AR介导的Rmax下降40%(P<0.05),pD2值不变。结论糖尿病时,大鼠心脏β-AR数量减少,其介导的Rmax也是降低的;而高血压糖尿病时,虽然大鼠心脏β-AR数量代偿性增加,但其介导的Rmax是降低的,其可能与β-AR后信号转导效应减弱有关。
- 宫海滨张清林王雷王洁王秀力
- 关键词：糖尿病高血压Β肾上腺素能心脏
- 应用Ad Easy腺病毒载体系统构建人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)被引量：1
- 2010年
- 目的:利用Adeasy腺病毒表达系统构建含人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法:将人SERCA2a基因全长cDNA(3700bp)插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,成功构建pAd-TrackCMVSERCA2a重组质粒,经PmeI酶切线性化,采用电击法转入到已含Adeasy质粒的电感受态菌BJ5183进行重组。挑选同源重组质粒,PacI酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒,荧光检测有绿色荧光蛋白表达。将重组病毒和SD大鼠心肌细胞共培养,western-blot检测SERCA2a可以在大鼠心肌细胞过表达且影响了胞内SERCA2a的活性。结果:成功包装含人SERCA2a基因的重组腺病毒,并可以有效感染SD大鼠心肌细胞。结论:利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人SERCA2a基因的腺病毒,为以后进一步研究人SERCA2a基因治疗提供了新途径。
- 吕茜魏翠张清林王洁宫海滨
- 关键词：转染
- 重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染骨髓间充质干细胞移植治疗心衰大鼠的实验研究
- 2009年
- 目的:重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)并植入心衰大鼠心肌,观察其心功能的变化。方法:采用部分缩窄腹主动脉法制备大鼠压力超负荷性慢性心力衰竭模型。分离和培养成年大鼠BMSCs,待细胞传代到第6代,用重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染BMSCs48h后将BMSCs移植入心衰大鼠心肌内。实验共分3组:心衰组、移植BMSCs组及移植转染Ad5-ADRbeta2-EGFP的BMSCs组。移植BMSCs(1×104)4周后,检测大鼠血流动力学各指标的变化。结果:荧光显微镜下可见转染BMSCs绿色荧光蛋白表达达到80%以上。移植BMSCs组和移植转染Ad5-ADRbeta2-EGFP的BMSCs组的左心室舒张末压力(LVEDP)低于心衰组,左心室内压变化最大速率(±dp/dtmax)和心率均高于心衰组,差异均有统计学意义(P<0.05)。移植转染Ad5-ADRbeta2-EGFP的BMSCs组的左心室内压上升最大速率(+dp/dt)高于移植BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染BMSCs并移植入心衰大鼠后,能够改善心衰大鼠的心功能。
- 宫海滨王秀力李春梅张清林
- 关键词：基因转染
- 应用Ad Easy载体系统构建人β_2-AR基因重组腺病毒被引量：2
- 2009年
- 目的:利用Ad easy腺病毒表达系统构建含人β2-肾上腺素能受体(β2-AR)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法:将β2-AR全长cDNA插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,构建pAdTrackCMV-β2AR重组质粒,经Pme I酶切线性化后经电击法转入含Ad easy质粒的电感受态菌BJ5183进行重组。挑选同源重组质粒,Pac I酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒。将重组病毒和SD大鼠心肌细胞共培养,western-blot检测β2-AR的表达。结果:琼脂糖凝胶电泳显示在1242bp处有特异性条带后被克隆至腺病毒穿梭质粒。重组穿梭载体经Hind III和Xba I限制性酶切可以得到目的条带并经测序证实。电击法转化BJ5183所得候选重组子经PacI酶切后得到30Kb腺病毒基因组片段和4.5Kb氨苄抗性片段,证实获得同源重组质粒。转染293细胞可以看到绿色荧光蛋白,以MOI100转染SD大鼠心肌细胞发现携带β2-AR的腺病毒可以在心肌细胞中过表达。结论:利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人β2-AR基因的腺病毒,为进一步研究人β2-AR基因治疗奠定了基础。
- 宫海滨魏翠张清林吕茜
- 关键词：AD心肌细胞
- 系统性红斑狼疮患者治疗前后外周血中CXCL12/CXCR4变化分析
- 2021年
- 目的探索CXCL12/CXCR4在SLE疮患者治疗前后的变化规律。方法收集8例初诊SLE患者治疗前和治疗后的PBMCs和15名健康人的PBMCs,通过流式细胞仪检测CXCR4,CD3,CD19在细胞上的表达情况,通过ELISA法检测CXCL12在血浆中的浓度。正态分布资料独立样本采用独立样本t检验,正态分布资料配对样本采用配对样本t检验,非正态分布资料独立样本检验采用Mann-Whitney U检验,非正态分布资料相关样本比较采用Wilcoxon检验,相关性分析中,符合正态分布的数据采用Pearson相关分析,不符合正态分布的数据采用Spearman相关分析。结果①CXCR4^(+)淋巴细胞亚群比例在治疗后(90±7)%比治疗前(75±17)%显著增加(t=-2.440,P<0.05);②CXCR4^(+)淋巴细胞亚群平均荧光强度在治疗后[119.00(92.93,142.50)]比治疗前[177.00(130.75,280.25)]显著下降(Z=-2.100,P<0.05);③血浆中CXCL12的浓度在治疗后(540±243)pg/ml比治疗前(1146±570)pg/ml显著下降(t=3.219,P<0.05);④上述3个指标在治疗后的变化趋势之间有明显的相关性。结论初诊SLE患者治疗后CXCR4^(+)淋巴细胞亚群比例、平均荧光强度和血浆中CXCL12的浓度发生了显著的改变。这提示CXCL12/CXCR4与SLE疾病之间有紧密的联系。
- 张清林刘琳杨君霞
- 关键词：CXCR4受体趋化因子CXCL12流式细胞术
